Summary

Sondenstrategie für die Sudformel der Traditionellen Chinesischen Medizin bei Osteosarkom-Modellmäusen

Published: June 07, 2024
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Summary

Das Protokoll bietet einen detaillierten Standardisierungsprozess der Abkochformel und der Sondentechnik am Beispiel der Yiqi Jiedu-Abkochung im Osteosarkom-Mausmodell. Es beschreibt den Tierschutz und verbessert die Zuverlässigkeit von Forschungsdaten, indem es effektive Strategien zur Untersuchung der therapeutischen Wirksamkeit und der molekularen Mechanismen von Abkochrezepturen in vivo bietet.

Abstract

Die Suktionsformel ist die am häufigsten verwendete Darreichungsform in der traditionellen chinesischen Medizin und wird seit Tausenden von Jahren in der klinischen Praxis durch transorale Verabreichung angewendet, die sich durch schnelle Wirkung, einfache Absorption und individuelle Behandlung basierend auf den spezifischen Syndromen der Patienten auszeichnet. Die Qualität der Abkochformel ist direkt für die klinische Wirksamkeit der traditionellen chinesischen Medizin verantwortlich. Daher ist der Standardisierungsprozess der Abkochformel wichtig, um Unterschiede in der Abkochungsqualität zu vermeiden, die durch subjektive Faktoren verursacht werden. Aufgrund der Einschränkungen bei der Durchführung klinischer Experimente werden kleine Tiere, die menschliche Krankheiten tragen, wie Mäuse, häufig in der medizinischen Forschung eingesetzt, um die therapeutische Wirksamkeit und die umfassenden Mechanismen verschiedener Interventionen zu untersuchen, einschließlich der Abkochformel für die traditionelle chinesische Medizin. Folglich ist die geschickte Sondentechnik als wichtige transorale Verabreichungsmethode besonders wichtig, um mögliche Schäden an der Speiseröhre und das Verschütten von Medikamenten zu vermeiden, wodurch sichergestellt wird, dass jedem Modelltier die gleiche Menge an Arzneimitteln verabreicht wird, was zu genauen Versuchsergebnissen führt. Darüber hinaus sind die standardisierte Methode der Herstellung von Abkochformeln und eine geschickte Sondenstrategie notwendig, um das Wohlergehen der Tiere zu schützen und die Anzahl der verwendeten Tiere zu minimieren. Hier berichteten wir über einen detaillierten Standardisierungsprozess der Abkochformel und der Sondentechnik mit Yiqi Jiedu Abkochung im Osteosarkom-Mausmodell als Beispiel. Die Wirksamkeit wurde anhand des Tumorvolumens bewertet. Dieses Protokoll wird den Tierschutz maximieren und die Zuverlässigkeit der Forschungsdaten verbessern und somit wirksame Strategien für die zukünftige Untersuchung der therapeutischen Wirksamkeit und der molekularen Mechanismen der Abkochformel für die traditionelle chinesische Medizin in vivo bieten.

Introduction

Die Suktionsformel ist die am häufigsten verwendete Darreichungsform der traditionellen chinesischen Medizin und der flüssigen Arzneimittel 1,2. Die Abkochformel der traditionellen chinesischen Medizin wird verarbeitet, indem die Kräuter nach dem Einweichen in Wasser abgekocht und anschließend gefiltert werden, um den Bodensatz zu entsorgen.

Da die Abkochformel auf der Grundlage klinischer Notwendigkeiten individualisiert werden kann, insbesondere im Einklang mit den Merkmalen der evidenzbasierten Behandlung in der traditionellen chinesischen Medizin, wird diese Darreichungsform über transorale Verabreichung seit Tausenden von Jahren in der klinischen Praxis mit spezifischen und unersetzlichen Vorteilen angewendet 3,4. Die Qualität der Abkochformel steht in direktem Zusammenhang mit der klinischen Wirksamkeit. Daher muss die Abkochformel auf der Grundlage der Prinzipien für die standardisierten Abkochmethoden hergestellt werden, um sicherzustellen, dass die Wirkstoffe maximal extrahiert und geschützt werden3. In der Zwischenzeit sind abkochfertige Medikamente die Hauptform von rohen chinesischen Kräutern, die in der klinischen Praxis verwendet werden. Die Qualitätsstandards und Herstellungsmethoden der verschriebenen abkochfertigen Arzneimittel müssen den Bestimmungen des Chinesischen Arzneibuchsentsprechen 2. Darüber hinaus müssen die verschriebenen abkochfertigen Arzneimittel mindestens 30 Minuten lang in kaltem Trinkwasser eingeweicht werden, bevor sie in einem speziellen pharmazeutischen Topfdurch Erhitzen 5 abgekocht werden. Studien haben gezeigt, dass die meisten Wirkstoffe durch zweimaliges Abkochen extrahiert werden können, und der Verhaltenskodex für die Verabreichung von Abkochräumen traditioneller chinesischer Arzneimittel in medizinischen Einrichtungen schreibt ebenfalls vor, dass das Abkochen zweimal durchgeführt werdenmuss 4,6,7. Wenn spezielle chinesische Kräuter, wie z. B. eines mit harter Textur oder Tonika, verschrieben werden, wird empfohlen, die Abkochzeit zu verlängern. Die Abkochutensilien und Vorratsbehälter, die direkt mit der Abkochformel in Berührung kommen, ausgehend von dem Behälter, in dem die verschriebenen abkochfertigen Medikamente eingeweicht werden, sollten chemisch stabil sein und Deckel wie Aufläufe, Keramik, Glas und Edelstahl haben. Aluminium und gewöhnliche Kunststoffprodukte sollten jedoch nicht verwendet werden, während Eisen und andere ätzende Utensilien verboten werden sollten, um mögliche chemische Reaktionen zu vermeiden, die die therapeutische Wirksamkeit verringern und sogar schädliche Auswirkungen haben 4,6,7.

Aufgrund der Einschränkungen bei der Durchführung klinischer Experimente werden kleine Tiere, die menschliche Krankheiten tragen, wie Mäuse, häufig in der medizinischen Forschung verwendet, um die therapeutische Wirksamkeit und die umfassenden Mechanismen verschiedener Interventionen zu untersuchen, einschließlich der Abkochformel der traditionellen chinesischen Medizin 8,9; Im Gegensatz zum Menschen sollten die Abkochrezepturen jedoch jeden Tag zubereitet, miteinander gemischt und in der klinischen Praxis 2x täglich frisch verabreicht werden. Tiere sind nicht in der Lage, ihre Medikamente freiwillig rechtzeitig in der erforderlichen Dosierung einzunehmen, und die meisten Tierversuche im Zusammenhang mit der traditionellen chinesischen Medizin sind derzeit eine orale Verabreichung der Abkochformeln auf Sondenbasis. Die für In-vivo-Tierversuche verwendeten Abkochformeln sollten im Voraus hergestellt, aliquotiert, bei -20 °C gelagert und kurz vor der Verwendung aufgetaut werden 3,4,10. Darüber hinaus erhöhen minderwertige Tierimmobilisierung und die Manipulation der Sondennadel das Risiko unnötiger Verletzungen und negativer Emotionen. Daher ist die geschickte Sondentechnik als wichtige Methode der transoralen Arzneimittelverabreichung besonders wichtig, um mögliche Verletzungen der Speiseröhre und das Verschütten von Medikamenten zu vermeiden und so sicherzustellen, dass jedes Modelltier die gleiche Menge an verschriebener pflanzlicher Medizin erhält, um genaue experimentelle Ergebnisse zu erzielen. Hier stellen wir ein Sondenprotokoll für die Abkochungsformel der traditionellen chinesischen Medizin zur Verfügung.

Protocol

Dieses Protokoll beschreibt die detaillierte Sondentechnik bei Osteosarkom-Modellmäusen unter Verwendung des Yiqi Jiedu-Suds als Probe. Vier Wochen alte, männliche athyme Mäuse (BALB/c nackt) wurden in diesem Experiment verwendet und im SPF-Zuchtraum des Laboratory Animal Center der Shanghai University of Traditional Chinese Medicine gehalten. Alle Tierversuche wurden vom Animal Management and Committee der Shanghai University of Traditional Chinese Medicine genehmigt, entsprachen dem Ethikkodex für Labortiere (Anima…

Representative Results

Die hemmende Wirkung der Yiqi Jiedu-Abkochung auf das Wachstum von Osteosarkomen in vivo wurde in einem intratibialen Xenotransplantat-Osteosarkom-Mausmodell bestimmt, das durch Injektion der 143B-Osteosarkomzellen in die Tibia von athymischen Mäusen hergestellt wurde. Der Yiqi Jiedu-Sud wurde den Mäusen der Yiqi Jiedu-Abkochungsgruppe ab dem zweiten Tag der 143B-Injektion 28 Tage lang per Sonde verabreicht. Den Mäusen in der Kontrollgruppe wurde physiologische Kochsalzlösung verabreicht. Alle Mäuse wurden …

Discussion

Die klinische Wirksamkeit der in der traditionellen chinesischen Medizin verschriebenen Kräuter hängt weitgehend mit der verabreichten Dosis und Darreichungsform zusammen; Daher sind die Etablierung einer standardisierten Abkochstrategie und eines qualifizierten Verabreichungsprozesses in der klinischen Praxis sowie zur Verbesserung der Zuverlässigkeit experimenteller Ergebnisse erforderlich.

In dieser Studie haben wir zunächst eine detaillierte Strategie für das standardisierte Abkochen …

Offenlegungen

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Die aktuelle Arbeit wird durch Zuschüsse der (1) National Nature Science Foundation (81973877 und 82174408), (2) des National Key R&D Program of China (2020YFE0201600), (3) des Bauprojekts des Shanghai Top Priority Research Center (2022ZZ01009), (4) des Shanghai Collaborative Innovation Center of Industrial Transformation of Hospital TCM Preparation und (5) Forschungsprojekte im Rahmen des Budgets der Shanghai University of Traditional Chinese Medicine (2021LK047) unterstützt.

Materials

143B cell line ATCC CRL-8303 osteosarcoma cell line
Anesthesia machine Shenzhen RWD Life Technology Co.,Ltd R500IP The Equipment of Anesthesia mice
Automatic cell counter Shanghai Simo Biological Technology Co., Ltd IC1000 Counting cells
BALB/c athymic mice Shanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd. Male Animal
Barbed skullcap herb Shanghai Yanghetang Traditional Chinese Medicine Tablet Co., Ltd. 20230606 Decoction-ready medicines 
Basement Membrane Matrix Shanghai Uning BioscienceTechnology Co., Ltd 356234, BD, Matrigel re-suspende cells
Centrifuge tube (15 mL) Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd 430790, Corning Centrifuge the cells
Elbow gavage needle (12-gauge/ 55 mm) RWD Life Science Co., Ltd. C21014-12 Component of gastric perfusion device
Gauze Haishi Hainuo Group Co., Ltd. LC45 Decoction filter
Ginseng Shanghai Wanshicheng Pharmaceutical Co., Ltd. 20220704-2 Decoction-ready medicines 
Hedyotis diffusa Shanghai Yanghetang Traditional Chinese Medicine Tablet Co., Ltd. 2023071107 Decoction-ready medicines 
isoflurane Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd VETEASY Anesthesia mice
Micro-volume syringe Shanghai high pigeon industry and trade Co., Ltd 0-50 μL Inject precise cells into the tibia
Phosphate-buffered saline Beyotime Biotechnology ST447 wash the human osteosarcoma cells
Rubber bands Shanghai Hengfei Biotechnology Co., Ltd. XPJ Fixing gauze on the measuring cup
Syringe (1 mL ) Shanghai Mishawa Medical Industry Co., Ltd. SBM0040 Component of gastric perfusion device
Trypsin (0.25%) Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd 25200056, Gibco trypsin treatment of cells

Referenzen

  1. Gao, S. Discussion on advantages and improvement of traditional Chinese medicine decoction. Chinese Community Physicians (Comprehensive Edition). (21), 12 (2005).
  2. Chinese Pharmacopoeia Commission. . Pharmacopoeia of the People’s Republic of China. , (2015).
  3. An, Y., et al. Interpretation on specification of traditional Chinese medicine decoction. Herald Med. 42 (11), 1648-1652 (2023).
  4. Chen, S., et al. Research strategies in standard decoction of medicinal slices. China J Chinese Materia Medica. 41 (8), 1367-1375 (2016).
  5. Luo, F. Effect of soaking traditional Chinese medicine before decoction on active components. Shanghai Yiyao. 40 (9), 63-64 (2019).
  6. Liu, F., Chen, M. On the standardization of decocting methods of modern decoction. Global Trad Chinese Med. 7 (5), 377-378 (2014).
  7. Li, X., et al. Influence of decocting times and instrument on the quality of decoction. J Trad Chinese Med. 50 (6), 550-552 (2009).
  8. Li, X., et al. Herbal decoctosome is a novel form of medicine. Sci China. Life Sci. 62 (3), 333-348 (2019).
  9. Lan, Y., Hu, Y., Huang, W., Tang, S. Reflections on PK – PD model based on animal experiments for study of Chinese medicine. Lishizen Med Materia Medica Res. 34 (2), 395-397 (2023).
  10. Li, Y., Bai, M., Song, Y., Guo, H., Miao, M. Research and reflection on standard decoction of Chinese materia medica. Chinese Trad Herbal Drugs. 49 (17), 3977-3980 (2018).
  11. . Estimating the maximum safe starting dose in initial clinical trials for therapeutics in adult healthy volunteers Available from: https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidance-documents/estimating-maximum-safe-starting-dose-initial-clinical-trials-therapeutics-adult-healthy-volunteers (2005)
  12. Chang, J., et al. Intratibial osteosarcoma cell injection to generate orthotopic osteosarcoma and lung metastasis mouse models. J Vis Exp. (176), 63072 (2021).
  13. He, C. Laboratory animal science. , (2006).
  14. Patten, A. R., Fontaine, C. J., Christie, B. R. A comparison of the different animal models of fetal alcohol spectrum disorders and their use in studying complex behaviors. Fronti Pedia. 2, 93 (2014).
  15. Jones, C. P., Boyd, K. L., Wallace, J. M. Evaluation of mice undergoing serial oral gavage while awake or anesthetized. J Am Assoc Lab Animal Sci. 55 (6), 805-810 (2016).
  16. Recena Aydos, L., et al. Nonalcoholic fatty liver disease induced by high-fat diet in C57bl/6 models. Nutrients. 11 (12), 3067 (2019).

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Diesen Artikel zitieren
Zhou, C., Sun, X., Chang, J., Tong, J., Zhao, P., Guo, S., Yang, Y. Gavage Strategy for Decoction Formula of Traditional Chinese Medicine in Osteosarcoma Model Mice. J. Vis. Exp. (208), e66177, doi:10.3791/66177 (2024).

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