Ultraschallgesteuerte Implantation: Eine Technik zur Implantation von duktalen Adenokarzinomzellen der Bauchspeicheldrüse in eine erwachsene Maus

- Ultraschall liefert hochauflösende Bilder, die dazu beitragen, Krebszellen mit minimaler Entzündung während der Injektion von Tumorzellen an einer bestimmten Gewebestelle zu implantieren. In erster Linie verwenden wir orthotope Modelle, um Tumorzellen in ein relevantes Organ der Tumorherkunft zu transplantieren. Das Organ ahmt die ursprüngliche Mikroumgebung des Tumors nach und erleichtert die Metastasierung.

Beginnen Sie damit, die Tumorzellen in kaltem PBS zu suspendieren, um den pH-Wert aufrechtzuerhalten, und stellen Sie das Röhrchen auf Eis. Platzieren Sie anschließend die Narkosemaus auf dem Ultraschalltisch und sichern Sie die Gliedmaßen mit Laborband. Tragen Sie die erforderliche Menge Ultraschallgel auf den rasierten Bauch auf und passen Sie die Position der Ultraschallsonde an, bis die Bauchspeicheldrüse deutlich sichtbar ist. Befüllen Sie die Spritze mit Tumorzellsuspension und injizieren Sie die Zellen vorsichtig in die Bauchspeicheldrüse.

Auf dem Ultraschallbild erscheint eine Flüssigkeitsblase, die die erfolgreiche Implantation bestätigt. Warten Sie 5 Sekunden, um den Rückfluss der Zellen zu verhindern, und entfernen Sie vorsichtig die Nadel. Bringen Sie das Tier in einen sauberen Käfig und überwachen Sie, bis es sich von der Narkose erholt hat. Innerhalb weniger Wochen nach der Injektion teilen sich die injizierten Krebszellen in der Bauchspeicheldrüse schnell und bilden einen Tumor. Im folgenden Protokoll werden wir eine ultraschallgesteuerte Implantation von murinen duktalen Adenokarzinomzellen der Bauchspeicheldrüse in die Bauchspeicheldrüse des orthotopen Modells durchführen.

- Vor Beginn des Eingriffs resuspendieren Sie die interessierende duktale Adenokarzinom-Zelllinie der Bauchspeicheldrüse in einer angemessenen Menge sterilem kaltem PBS auf Eis. Stellen Sie die Käfige auf eine 37 Grad Celsius warme Warmhalteplatte und reinigen Sie die biologische Sicherheitswerkbank, die Induktionskammer und den Ultraschalltisch gründlich mit einem geeigneten Sterilisationsmittel. Stellen Sie die Wärmefunktion des Ultraschalltisches auf 37 Grad Celsius ein und tragen Sie nach Einleitung der Anästhesie eine Salbe auf die Augen des ersten Tieres auf.

Legen Sie die Maus in dorsaler Liege auf den Ultraschalltisch und fixieren Sie die oberen und unteren Extremitäten vorsichtig mit dem Tape am Tisch. Tragen Sie mit einem sterilen Applikator mit Wattespitze eine großzügige Schicht Enthaarungscreme auf den oberen linken Quadranten des Bauches über den Bereich der Milz bis zur Mittellinie auf. Verwenden Sie nach 1 Minute ein trockenes Mullkissen, um die Haare sanft zu entfernen, bevor Sie die überschüssige Enthaarungscreme mit der salzhaltigen feuchten Gaze entfernen. Platzieren Sie dann die Maus in einem der neuen sauberen Käfige auf dem Wärmer.

Für die ultraschallgesteuerte Tumorzellimplantation stellen Sie die Ultraschallplattform so ein, dass die Oberfläche parallel zum Boden ist und auf der linken Seite des Tieres steht, während der Kopf der Maus nach rechts zeigt. Stellen Sie die Position des Schallkopfes so ein, dass ein transversales Bauchbild erhalten wird, und befestigen Sie die Gliedmaßen der Maus mit Klebeband auf der Plattform. Senken Sie den Schallkopf vorsichtig ab, um den Bauch der Maus zu berühren, und stellen Sie den Schallkopf ein, bis die Bauchspeicheldrüse deutlich sichtbar ist. Lokalisieren Sie die linke Niere und Milz, um eine genaue Orientierung in der Bauchhöhle zu gewährleisten.

Wenn die Injektionsstelle lokalisiert wurde, laden Sie eine 29-Gauge-Insulinspritze mit 25 Mikrolitern der Tumorzellsuspension und wischen Sie die Nadelspitze mit einem sterilen Alkoholvorbereitungspad ab. Verwenden Sie eine Zange mit stumpfer Kante, um die Haut und die Peritonealwand der Maus zu greifen, um die Spannung an der Injektionsstelle zu erhöhen. Halten Sie die Spritze in einem Winkel von etwa 25 bis 45 Grad zur Oberfläche der Ultraschallplattform und schieben Sie die Nadel langsam durch die Haut und die Peritonealwand. Vergewissern Sie sich, dass die Nadel die Peritonealwand durchstochen hat, bevor Sie die Ultraschallvisualisierung verwenden, um die Nadel direkt in die Bauchspeicheldrüse zu führen.

Wenn die Nadel an Ort und Stelle ist, injizieren Sie langsam die Tumorzellen. Die Bildung eines flüssigen Bolus in der Bauchspeicheldrüse wird bei einer korrekt injizierten Bauchspeicheldrüse durch Ultraschall erkennbar. Sobald das gesamte Volumen der Suspension injiziert wurde und ein Flüssigkeitsbolus durch Ultraschall beobachtet werden kann, halten Sie die Spritze einige Sekunden lang sehr ruhig, bevor Sie die Nadel langsam aus dem Bauch der Maus zurückziehen, wobei Sie darauf achten, die injizierten Zellen nicht zu stören. Setzen Sie dann die Maus in einen neuen, sauberen Käfig auf dem Wärmer mit Überwachung, bis sie vollständig wiederhergestellt ist.

- Die richtige Platzierung der Nadel in der Bauchspeicheldrüse, einschließlich der Nadeltiefe und des Nadelwinkels, ist ein kritischer Schritt in diesem Protokoll. Die Visualisierung des Flüssigkeitsbolus hilft, eine erfolgreiche Tumorinjektion zu bestätigen. Die Kontrolle der Injektionstiefe ist der schwierigste Aspekt. Mein Rat ist, mit Trypanblau-Injektionen zu üben und den Flüssigkeitsbolus sowohl durch Ultraschall als auch durch Autopsie zu bestätigen.