Dünnschichtchromatographie-basierte Trennung von Mykolsäurevarianten: Eine Methode zur Trennung von mykobakteriellen Zellwandlipiden anhand der Polarität

Die mykobakterielle Zellwand enthält verschiedene Varianten von Mykolsäuren – langkettige Fettsäuren mit konservierten Alpha-Ketten. In ihren Beta-Ketten gibt es strukturelle Unterschiede, die zu Schwankungen in der Polarität verschiedener Mykolsäuren führen.

Um die Varianten mit Hilfe der Dünnschichtchromatographie oder TLC - einer Flüssigchromatographie-Technik - zu trennen, werden mykobakterielle Zellwandlipide in das gewünschte organische Lösungsmittel gebracht. Spotten Sie die Lipide in der Nähe des Bodens einer DC-Platte, die mit einer dünnen Schicht Adsorptionsmaterial vorbeschichtet ist, die als stationäre Phase fungiert.

Legen Sie die Platte in ein Gefäß mit einem organischen Lösungsmittel - der mobilen Phase - und stellen Sie sicher, dass der Flüssigkeitsstand unter den Probenflecken liegt, um eine vorzeitige Diffusion der Mykolsäuren zu verhindern.

Während des Laufs steigt die bewegliche Phase durch Kapillarwirkung durch die winzigen Poren der Adsorptionsschicht auf der Platte auf, schließlich lösen sich die Mykolsäuren im Lösungsmittel auf und wandern nach oben.

Polarere Mykolsäurevarianten werden von der polaren stationären Phase über intermolekulare Kräfte vorübergehend adsorbiert, wodurch ihre Aufwärtsbewegung behindert wird. Weniger polare Mykolsäuren verbleiben in der unpolaren mobilen Phase und wandern weiter.

Die Unterschiede in der Migration führen dazu, dass sich die Varianten der Mykolsäure in diskrete Banden aufteilen.

Besprühen Sie die getrocknete Platte nach Fertigstellung mit einem Phosphomolybdsäurefleck. Erhitze die Platte, um den Fleck in Gegenwart der Lipide zu reduzieren und den Bändern eine dunkelgrüne Farbe zu verleihen.