Isoelektrische Fokussierung in der Flüssigphase: Eine Elektrophoresetechnik zur Trennung bioaktiver Moleküle aus rohem Gymnema sylvestre-Extrakt

Beginnen Sie mit einer vormontierten isoelektrischen Fokussierung, IEF-Zelle - einer Flüssigphasenelektrophoreseeinheit. Bei dieser Säule handelt es sich um eine unterteilte, horizontale poröse Kammer mit unterschiedlichen Plus- und Minuspolen an den Enden.

Nehmen wir nun den Pflanzenextrakt, der eine komplexe Mischung aus unterschiedlich geladenen Komponenten mit unterschiedlichen isoelektrischen Punkten, pI enthält - ein pH-Wert, bei dem die Nettoladung eines Moleküls Null ist.

Der Extrakt wird mit Ampholyten variabler Ladung ergänzt, die die spätere Fraktionierung der Probenbestandteile erleichtern.

Laden Sie die Probe in die Ladeöffnungen der Säule. Derzeit hat die IEF-Säule einen konstanten pH-Wert. Legen Sie anschließend eine Hochspannung an, um die Elektrophorese zu starten.

Unter dem elektrischen Feld wandern die löslichen Ampholyten zu entgegengesetzt geladenen Elektroden und bilden einen linearen pH-Gradienten über die Säule. Die Probenkomponenten beginnen durch den pH-Gradienten der Flüssigphase zu wandern, und diejenigen, die bei einem pH-Wert unterhalb ihres pI positioniert sind, tragen eine positive Nettoladung.

Diese wandern in Richtung der negativen Elektrode, bis die Komponenten ihren pI erreichen, wo sich ihre Ladung neutralisiert und die Migration stoppt. In ähnlicher Weise wandern Komponenten mit einem pH-Wert über ihrem pI zur positiven Elektrode und stoppen, wenn sie ihren pI erreichen. Dabei werden die Probenkomponenten anhand ihres pI in fokussierte Kompartimente unterteilt. Ernten Sie die gereinigten Fraktionen für die weitere Analyse.