In-vitro-Phagozytose-Assay: Eine auf Live-Bildgebung basierende Methode zur Untersuchung der Echtzeit-Astrozyten-vermittelten Synaptosomen-Phagozytose

Synaptosomen sind isolierte neuronale Fraktionen, die reich an synaptischen Vesikeln sind. Diese Synaptosomen werden von Astrozyten - einer Population von Immunzellen im Gehirn - durch einen Prozess verschlungen, der als Phagozytose bekannt ist.

Um die Astrozyten-vermittelte Phagozytose in vitro zu untersuchen, beginnen Sie mit der Entnahme einer Kulturplatte, die eine Monoschicht von Astrozyten enthält. Geben Sie nun eine pH-Indikator-konjugierte Synaptosomensuspension in die Platte. Dieser Indikatorfarbstoff hat die Eigenschaft, ausschließlich bei einem niedrigen pH-Wert zu fluoreszieren. Inkubieren Sie die Platte für die gewünschte Dauer.

Während der Inkubation ermöglicht Phosphatidylserin oder PS, das auf der äußeren Membran des Synaptosoms vorhanden ist, dass es an die entsprechenden PS-Rezeptoren auf der Astrozytenmembran bindet. Dies erleichtert die Ansiedlung von Synaptosomen an der Basis. Aspirieren Sie das verbrauchte Medium zusammen mit ungebundenen Synaptosomen von der Platte.

Ergänzen Sie die Platte anschließend mit Phagozytose-fördernden Faktoren und inkubieren Sie. Anschließend wird die Platte mit einem Fluoreszenzmikroskop abgebildet. Nach der Bindung an die Oberflä