JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 4:45 Min. • July 8th, 2025
Mikroglia – die im Gehirn ansässigen Makrophagen – exprimieren CD11b, ein Integrin auf der Zelloberfläche.
Um Mikroglia aus dem Gehirn von Mäusewelpen zu isolieren, nehmen Sie Großhirnfragmente in Dissoziationsröhrchen, die Puffer mit Papain, einem proteolytischen Enzym, und Desoxyribonuklease enthalten.
Legen Sie die Röhrchen auf einen mechanischen Dissoziator. Während des Laufs bricht der Dissoziator das Gewebe mechanisch auf.
Papain verdaut die extrazelluläre Matrix des Gewebes und setzt Zellen, einschließlich Mikroglia, in Suspension frei. Desoxyribonuklease baut freie DNA in Suspension ab und verhindert so eine ineffiziente Zellisolierung.
Zentrifuge. Schließen Sie die mechanische Dissoziation durch Pipettieren ab. Übertragen Sie die Suspension durch ein Zellsieb, um Ablagerungen und Zellklumpen zu entfernen und eine homogene Einzelzellpopulation zu erhalten.
Inkubieren Sie mit superparamagnetischen Mikrokügelchen, die mit Anti-CD11b-Antikörpern funktionalisiert sind. Die Mikrokügelchen binden spezifisch an CD11b auf Zellen, einschließlich Mikroglia.
Nach der Inkubation, Zentrifuge. Entfernen Sie den Überstand mit den ungebundenen Kügelchen. Resuspendieren Sie die Zellen im Pu
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