Kultivierung und Erhaltung dopaminerger Neuronen aus embryonalem Hirngewebe der Maus

Behandeln Sie das embryonale Mittelhirngewebe, das reich an sich entwickelnden dopaminergen Neuronen ist, mit einer Trypsin-EDTA-Lösung, um sie von der Gewebematrix zu lösen.

Fügen Sie ein Deaktivierungsmedium hinzu, um die Enzymaktivität zu hemmen, und waschen Sie es dann, um verbleibende Enzyme zu entfernen.

Pipettieren Sie das Gewebe wiederholt. Die embryonalen Neuronen besitzen weniger Projektionen, wodurch der Stress während dieser Störung reduziert und eine einzellige Suspension erzeugt wird.

Zentrifugieren und entfernen Sie den Überstand, dann resuspendieren Sie die Neuronen in einem vollständigen Medium. Übertragen Sie diese Neuronen zur Zellanheftung auf ein polymerbeschichtetes Deckglas.

Legen Sie das Deckglas in eine Multi-Well-Platte mit einem vollständigen Medium, das Nährstoffe und Wachstumsfaktoren enthält, die für das Neuronenwachstum unerlässlich sind.

Die Antibiotika im Medium verhindern das Bakterienwachstum und unterstützen so die Lebensfähigkeit der Neuronen.

Wenn Neuronen wachsen und reifen, entwickeln sie zelluläre Fortsätze wie Axone und Dendriten und bilden synaptische Verbindungen.

Entfernen Sie in regelmäßigen Abständen die Hälfte der verwendeten Medien,