Modellierung neuronaler Schädigung in primären zerebellären Körnerneuronen der Maus

Beginnen Sie mit einer Kultur von primären Kleinhirn-Körnerneuronen der Maus.

Fügen Sie hohe Konzentrationen von N-Methyl-D-Aspartat oder NMDA, einem exzitatorischen Neurotransmitter-Rezeptor-Agonisten, und Glycin, einem Co-Agonisten, hinzu. Inkubieren Sie die Kultur.

NMDA und Glycin binden an ihre jeweiligen Stellen auf den NMDA-Rezeptoren, was zu einer Überstimulation und einem massiven Einstrom von Kalziumionen führt.

Das erhöhte intrazelluläre Kalzium aktiviert kalziumabhängige Phospholipasen, die Zellmembranphospholipide abbauen, was zu Membranschäden führt.

Darüber hinaus aktiviert intrazelluläres Kalzium Proteasen, die zelluläre Proteine abbauen.

Der erhöhte Kalziumspiegel induziert auch mitochondrialen Stress und Fragmentierung, was zur Freisetzung von reaktiven Sauerstoffspezies (ROS) und oxidativem Stress führt.

Darüber hinaus aktiviert intrazelluläres Kalzium DNasen, die zusammen mit ROS DNA-Schäden verursachen, die letztendlich zum neuronalen Tod führen.

Ersetzen Sie das Medium durch frisches Medium ohne NMDA und Glycin, um die Signalkaskade zu stoppen.

Das NMDA-induzierte neuronale Verletzungsmodell ist bereit für weitere Analysen.

Um eine neuronale Exzitotoxizität mit NMDA zu induzieren, behandeln Sie die Kleinhirn-Körnerneuronen nach sieben Tagen in vitro eine Stunde lang mit 100 mikromolaren NMDA und 10 mikromolarem Glycin. Ersetzen Sie dann das Medium durch konditioniertes Medium aus den Parallelkulturen ohne Behandlung. Diese Konzentration führt zu einem Zelltod von 50 % 24 Stunden nach der Behandlung.