Etablierung eines Alzheimer-Modells im Gehirn von Zebrafischen durch Amyloid-Peptid-Injektion

Füllen Sie eine Glasinjektionskapillare mit einer Lösung aus synthetischen monomeren Amyloidpeptiden, bei denen es sich um abnormale Peptide mit aggregationsanfälligen Eigenschaften handelt.

Führen Sie die Kapillare in einen Mikroinjektionshalter ein.

Legen Sie gleichzeitig einen Zebrafisch in eine Petrischale, in der sich eine Anästhesielösung befindet.

Sobald der Fisch betäubt ist, halten Sie ihn mit einer Pinzette seitlich, um den Kopf zu sichern.

Machen Sie einen kleinen Schnitt im Fischschädel an der Verbindungsstelle der beiden Seitenplatten, um Zugang zum neuronenreichen Vorderhirn zu erhalten.

Führen Sie nun die Kapillarnadel durch den Schnitt ein und injizieren Sie die Amyloid-Peptidlösung in das Vorderhirn.

Setzen Sie den Zebrafisch in einen Auffangbehälter mit zirkulierendem Wasser um.

Im Vorderhirn sammeln sich die Amyloid-Peptide in der Nähe der Neuronen an.

Diese Peptide falten sich spontan fehl, um Beta-Faltblätter zu bilden, und aggregieren um die Neuronen herum, um toxische Amyloid-Plaques zu bilden.

Diese Plaques schädigen die Nervenzellen und beeinträchtigen deren Signalübertragung.

Damit wird ein Zebrafischmodell für die Alzheimer-Krankheit etabliert, eine Erkrankung des Gehirns, die durch Amyloid-Plaques gekennzeichnet ist.

Verwenden Sie einen Nadelabzieher mit den im Textprotokoll beschriebenen Parametern, um Glasinjektionskapillaren vorzubereiten. Stellen Sie die Druckeinstellung an der Druckquelle auf 25 PSI ein. Stellen Sie dann am Mikroinjektor den Nachdruck auf 20 PSI, den Ausstoßdruck auf 10 PSI, den Periodenwert auf 2,5 und den Gating-Wert auf 100 Millisekunden ein. Laden Sie anschließend die Glaskapillare mit der Injektionslösung.

Führen Sie dann die Glaskapillare in den Mikroinjektionshalter ein und stellen Sie den Injektionswinkel auf 45 Grad ein. Legen Sie einen Fisch in eine neue Petrischale, die mit Betäubungslösung gefüllt ist. Sobald er betäubt ist, halten Sie den Fisch mit einer Pinzette fest und richten Sie ihn für die Injektion aus. Erzeugen Sie mit der Spitze einer 30-Gauge-Nadel einen Schlitz im Schädel über dem optischen Tectum, wo sich die beiden Seitenplatten treffen. Verwenden Sie nur die Spitze der Nadel und dringen Sie nicht mehr als 1 Millimeter durch den Schädel ein.

Sie den Fisch weiter festhalten, führen Sie dann die Spitze der Glaskapillare durch die Inzisionsstelle. Richten Sie die Spitze der Glaskapillare in einem Winkel von 45 Grad in Richtung Telencephalon aus und injizieren Sie dann 1 Mikroliter der Lösung. Setzen Sie den Fisch zurück in einen Transportbehälter, bis er sich erholt hat. Verbinden Sie dann den Behälter mit dem regelmäßig zirkulierenden Fischwasser, um eine optimale Wasserqualität zu gewährleisten.