Bildgebung der subzellulären Kalziumdynamik in Neuronen von Caenorhabditis elegans

Nehmen Sie zwei separate transgene Caenorhabditis elegans-Stämme auf Objektträgern mit Agar-Pads. Die Pads enthalten eine Rolllösung mit einem Lähmungsmittel, das die Bewegung minimiert.

Der ventrale Nervenstrang (VNC) der Würmer enthält exzitatorische Interneurone, die in einem Stamm zytoplasmatische Kalziumindikatoren und im anderen mitochondriale Kalziumindikatoren exprimieren.

Legen Sie ein Deckglas auf, um die Würmer zu rollen, richten Sie den VNC zur Visualisierung aus und positionieren Sie sie dann unter einem Fluoreszenzmikroskop.

Verwenden Sie sichtbares Licht, um die Würmer zu lokalisieren, und wechseln Sie dann in den Fluoreszenzmodus.

In ruhenden Neuronen hält ein niedriger intrazellulärer Kalziumspiegel die Indikatoren ungebunden, was zu einer schwachen Fluoreszenz führt.

Spontane neuronale Aktivität öffnet spannungsgesteuerte Kalziumkanäle und ermöglicht so den Kalziumeinfluss.

Im Stamm mit zytoplasmatischen Indikatoren bindet Calcium an die Indikatoren und erhöht so die zytoplasmatische Fluoreszenz.

Überschüssiges zytoplasmatisches Kalzium gelangt durch Kanäle in die Mitochondrien. Bei dem Stamm mit mitochondrialen Indikatoren erhöht die Kalziumbindung die mitochondriale Fl