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DOI: 10.3791/4351-v
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Die hier vorgestellte Methode umfasst die genaue Verletzung des Lebens Zebrafischembryonen mit hochenergetischer Laserpulse und der anschließenden Analyse dieser Verletzungen und deren Wiederherstellung mit der Zeit. Wir zeigen auch, wie genetisch markierten einzelne oder Gruppen von Skelettmuskelzellen kann während und nach der Laser-Licht induzierten Schäden verfolgt werden.
Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, den Zebrafisch, den embryonalen Skelettmuskel, genau kontrolliert zu schädigen, um die Muskelregenerationsprozesse zu untersuchen. Dies wird erreicht, indem zunächst einzelne Skelettmuskelzellen mosaikartig genetisch markiert werden. Anschließend werden ausgewählte Embryonen in Agros eingebettet, die auf einem Objektträger mit Trica versorgt werden.
Dann werden die Embryonen unter das Mikroskop gelegt und die gezielten Muskelzellen mit einem Mikropunktlaser verletzt. Schließlich werden die Embryonen aus dem Agros entnommen und für bestimmte Zeiträume wieder gesund gelassen. Letztendlich können Ergebnisse erzielt werden, die Veränderungen in der myofibrillären Organisation durch Laserverletzung gefolgt von konfokaler Mikroskopie zeigen.
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