Fütterung von Zecken auf Tiere, die zur Übertragung und Xenodiagnosis in Lyme Disease Research

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, einen natürlichen Vektor, die Hirschzecke, für die experimentelle Übertragung und Xeno-Diagnose des Lyme-Borreliose-Erregers Borrelia Borre zu nutzen. Dies wird erreicht, indem zunächst Zecken produziert werden, die die Bakterien beherbergen. Nach der Impfung werden die Zecken auf den rasierten Bereich einer Maus aufgebracht und dann in speziellen Käfigen untergebracht.

Die gefütterten Zecken werden dann aus dem Käfigwasser geholt. Für nicht-menschliche Primaten wird eine spezielle Containment-Vorrichtung konstruiert und angebracht, bevor die Zecken auf der Haut platziert werden. Nach fünf Tagen werden die geöffneten Geräte und die gefütterten Zecken eingesammelt.

Letztendlich können Proben entnommen und mit verschiedenen Methoden analysiert werden, um eine Infektion nach einer Zecke zu bestätigen. Fütterungsgewebe kann auch kultiviert, geschnitten und für Immunfluoreszenz gefärbt werden. Die visuelle Demonstration dieser Methoden ist von entscheidender Bedeutung, da die verschiedenen Schritte zwischen den verwendeten Tiermodellen sehr unterschiedlich sind.

Bei der Arbeit mit Zecken sollten ich, Dr. Britton, Grasbären und Mary Jacobs das Verfahren demonstrieren. Weiße Laborkittel mit elastischen Ärmeln, Handschuhe und Einweg-Bouffant-Kappen sollten bei der Arbeit mit Zecken getragen werden. Zu Beginn werden nimale Zecken entnommen, die vier bis sechs Wochen lang bei 23 Grad Celsius gelagert wurden. Platzieren Sie nach der Häutung der Larven doppelseitiges Klebeband auf dem Boden einer kleinen Petrischale und befestigen Sie die Zecken mit der Bauchseite nach oben auf dem Klebeband für die Impfung.

Beberg Dory wird in der BSKH-Medium, das 6 % Kaninchenserum enthält, in der Midlock-Phase gezüchtet. Die Kapillarröhrchen aus Glas werden unter Verwendung eines auf das Zeckenmundteil standardisierten Röhrchens als Größenrichtlinie hergestellt. Wenn Sie fertig sind, mischen Sie die Beberg Doy-Kultur und führen Sie die Spitze des Kapillarröhrchens ein. Platzieren Sie das Röhrchen mit Hilfe eines Präparierfernrohrs über der Hyperkuppel des Zeckenmunds. Befestigen Sie anschließend das Rohr mit Knetmasse.

Setzen Sie die Petrischale mit einem festen Tick in eine große, durchsichtige Plastikwanne ein, um ein zusätzliches Maß an Halt zu gewährleisten, und fügen Sie feuchte Papiertücher hinzu, um Feuchtigkeit zu spenden. Legen Sie die Zecken in einen 37 Grad Celsius heißen Inkubator, bis der Stuhlgang sichtbar ist. Dies deutet darauf hin, dass das Medium, das Spirochäten enthält, die Zecke passiert hat.

Alle Zecken werden zwei bis vier Wochen bei 23 Grad Celsius gehalten, um sich an ihre Umgebung anzupassen, bevor sie an Tiere verfüttert werden. Rasieren Sie die Maus nach der Narkose von den Ohren bis zum mittleren Rücken mit einem elektrischen Trimmer in einem weißen Stift, ohne dass sich andere Gegenstände in der Nähe befinden. Übertragen Sie die geimpften Zecken mit einem angefeuchteten Pinsel auf den haarlosen Bereich der Maus.

Sobald die Zecken an Ort und Stelle sind, bringen Sie das Tier in einen speziellen Käfig. Dieser Käfig besteht aus einem Edelstahlgrill, der von der Unterseite abgehoben ist. Die Oberseite des Käfigs wurde intern modifiziert, um den Wasserflaschenhalter so anzuheben, dass sich die Maus darunter frei bewegen kann, um Zecken einzufangen, die von der Maus fallen könnten.

Der Boden des Käfigs ist gerade mit genug Wasser gefüllt, um die Oberfläche zu bedecken, aber niedrig genug, um ein Eintauchen der Gliedmaßen zu verhindern. Heizkissen werden unter den Käfig gelegt, bis die Maus vollständig geborgen ist. Der Käfig befindet sich auch in einer Schale, die mit Tangle-Tre-Paste und Klebeband für weitere Maßnahmen zur Eindämmung ausgekleidet wurde.

Wenn sich die Maus vollständig von der Narkose erholt hat, wird Wasser bis zu einer Tiefe von etwa einem halben Zoll in den Käfig gegossen und Futter und Wasser werden nach drei, vier und fünf Tagen ersetzt. Überprüfen Sie den Mäusekäfig und das Käfigwasser auf gefütterte Zecken. Sieben Sie das Käfigwasser durch eine weiße Metallpfanne.

Spülen Sie die gefütterten Zecken in sauberem Wasser ab und bewahren Sie sie an den Tagen drei und vier in Plastikgläsern auf. Ersetzen Sie das Wasser im Käfig durch sauberes Wasser. Am fünften Tag durchsuchst du nicht nur den Käfig, sondern auch die Maus gründlich auf Zecken.

In der Regel haben zu diesem Zeitpunkt alle Zecken gefressen und die Mäuse können wieder in den regulären Käfig gebracht werden. Lagern Sie alle Abfälle aus den Mäusekäfigen, einschließlich Flüssigkeiten, in Behälter für biologische Gefahren. Führen Sie für das Autoklavieren und die Entsorgung jederzeit ein Protokoll über die Anzahl der auf den Mäusen platzierten und die wiedergefundenen Zecken.

Der erste Schritt besteht darin, die Zeckeneindämmungsvorrichtung vorzubereiten. Schneiden Sie mit einem sauberen Skalpell und der Messanleitung einen Kreis mit einem Durchmesser von eineinhalb Zoll und einem Durchmesser von eineinhalb Zoll in die drei mal drei Zoll große LA-Klappe und verwenden Sie den Ausschnitt als Vorlage, um Kreise identischer Größe in den Biota-Schaum und DuoDERM zu schneiden. Der Schaum wird verwendet, um den Lappen über die Hautoberfläche zu heben und ein mögliches Zerquetschen der Zecke zu verhindern.

Das Duo-Derm fügt eine weitere Polsterschicht hinzu und überlagert die Ränder der Rückhaltevorrichtung für zusätzliche Sicherheit vor dem Austreten von Zecken. Nach der Narkose wird ein elektrischer Trimmer verwendet, um alle Bereiche zu rasieren, die von der Jacke bedeckt werden. Rasieren Sie anschließend eine Fläche von etwa 25 x 20 Zentimetern genau.

Reinigen und trocknen Sie dann den Bereich. Nach dem Reinigen und Trocknen der Haut legen Sie das Duo-Derm auf den Rücken des Tieres, direkt unter das Schulterblatt auf beiden Seiten der Wirbelsäule. Verwende einen Marker, um den Kreis an dieser Stelle nachzuzeichnen.

Skin Prep wird verwendet, um die Haut abzuwischen und Öle zu entfernen. Tragen Sie nach dem Abwischen der Haut eine Schicht Hautkleber auf. Entfernen Sie die Kleberückseite vom Biotinschaum und kleben Sie ihn an der entsprechenden Stelle auf die Haut.

Versiegeln Sie die Kanten mit Hautkleber und Fixx-Klebeband. Entfernen Sie die Kleberückseite von der Lasche und befestigen Sie sie auf dem Biotine Legen Sie Hautkleber und hyper fixx Tape um die Ränder. Nachdem Sie die Netzklappe festgeklebt haben, legen Sie die Jacke auf das Tier.

Überprüfen Sie 24 Stunden später die Sicherheit des Geräts und verstärken Sie es bei Bedarf. Wenn das Gerät sicher ist, platzieren Sie mit einem Pinsel etwa 20 nicht gefütterte Zecken auf der Haut. Entfernen Sie nach dem Übertragen der Zecken die Kleberückseite aus dem Netz der Klappe und verschließen Sie sie.

Entfernen Sie die Duo-Derm-Rückseite und legen Sie sie auf die Rückhaltevorrichtung. Versiegeln Sie die Ränder mit hyper fixx Klebeband. Zum Schluss legen Sie ein Stück Hyper Fixx Tape über den offenen Maschenkreis und tauschen die Jacke wieder aus.

Fünf Tage später wird das Tier betäubt und die Jacke entfernt. Entfernen Sie zuerst das Klebeband, damit die Zeckenfütterung durch das Netz sichtbar ist. Nachdem Sie das Duo-Derm vorsichtig von der Klappe abgezogen haben, ziehen Sie den Netzteil an den Rändern zurück, um Zugang zu den Zecken zu erhalten.

Fed-Zecken sind häufig in der Nähe oder unter dem Schaumkreis zu finden. Entfernen Sie die Zecken mit einem Pinsel und legen Sie sie in sauberes Wasser. Sobald alle sichtbaren gefütterten Zecken eingesammelt sind, entfernen Sie das Gerät und wischen Sie die Haut mit Alkohol ab.

Lagern Sie die Zecken schließlich bei 23 Grad Celsius für die zukünftige Verwendung. Mit der Kapillarfütterungstechnik wurde festgestellt, dass über 90 % der Fed-Zecken Bedoy beherbergen, wie hier durch Antikörperfärbung und Fluoreszenzmikroskopie gezeigt wurde. Die Infektionsraten von Mäusen mit einem niedrigen Passagestamm liegen bei nahezu 100 %Eine Kombination aus Serologie, wie hier gezeigt, und Kultur wird verwendet, um festzustellen, ob sich jede Maus beim Versuch des Kapillarfütterungsverfahrens infiziert hat.

Es ist wichtig, daran zu denken, die Zecken regelmäßig auf Anzeichen von Nahrungsaufnahme oder Verschiebung von Schläuchen aus den Mundwerkzeugen nach ihrer Entwicklung zu überprüfen. Die Techniken zur Fütterung von Zecken an Säugetiere ebneten Forschern auf dem Gebiet der Weinkrankheit den Weg, um sowohl die Reaktionen des Wirts als auch der Krankheitserreger nach einer natürlichen Infektion zu untersuchen. Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie man Zecken der ex-exotischen Spezies erzeugt, die Bor- und Fe-Zecken auf Meermeerkatzen für Studien zur Borreliose beherbergen.