Digest enzimatico di restrizione

Gli enzimi di restrizione o le endonucleasi riconoscono e tagliano il DNA in una sequenza specifica. Questi enzimi si trovano naturalmente nei batteri come difesa contro i batteriofagi – virus che infettano i batteri. Gli enzimi di restrizione batterica tagliano il DNA del batteriofago invasore lasciando illeso il DNA genomico batterico a causa dell’aggiunta di gruppi metilici.

Questo video spiega i principi di base degli enzimi di restrizione, tra cui: come vengono denominati gli enzimi di restrizione e i tipi di siti di riconoscimento e sporgenze esistenti. Viene inoltre fornita una procedura generalizzata passo-passo su come impostare un digest di restrizione che includa i componenti necessari, l’ordine in cui la miscela deve essere assemblata e la temperatura e il tempo tipici di incubazione. Viene menzionata l’importanza di inattivare gli enzimi di restrizione per prevenire l’attività delle stelle. Vengono inoltre forniti suggerimenti per l’esecuzione di più digest enzimatici e l’utilizzo di controlli nelle reazioni di digestione.