Speichelentnahme und Messung von Speichel-Cortisol und Alpha-Amylase in gebrechlichen älteren Erwachsenen in der Gemeinschaft über pflegende Angehörige

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, die Sammlung und Analyse von Speichel-Bio-Messungen in einer in der Gemeinschaft lebenden, medizinisch gebrechlichen Bevölkerung zu demonstrieren. Dies wird erreicht, indem zunächst die notwendigen Speichelsammelvorräte zusammengestellt werden. Der zweite Schritt besteht darin, den Hausbesuch zu arrangieren, die Vorräte bereitzustellen und der Pflegekraft die Speichelentnahmeverfahren zu demonstrieren.

Geben Sie als Nächstes schriftliche Anweisungen und beantworten Sie alle Fragen. Der letzte Schritt besteht darin, die Speichelproben an das Labor zurückzusenden und die Testverfahren durchzuführen. Letztendlich ist das Protokoll darauf ausgelegt, das Tagesprofil der Speichel-Alpha-Amylase- und Speichel-Cortisol-Konzentrationen bei medizinisch gebrechlichen Patienten zu messen, die in der Gemeinschaft leben.

Diese Methode wird Schlüsselfragen in den Bereichen der Bioverhaltensforschung beantworten, um unser Verständnis der biologischen Sensitivität und Anfälligkeit für stressbezogene Prozesse zu verbessern. Vor der Planung eines Hausbesuchs bei der Einwilligungserklärung stellen die Teilnehmer die notwendigen Vorräte zusammen und stellen sie zusammen, darunter vier psychometrische Kinderabstriche, vier Tupferaufbewahrungsröhrchen, vier farbcodierte Röhrchenkappen, fünf weiße Etiketten, einen Plastikbeutel mit Ziploc, ein Anleitungsblatt zur Speichelsammlung, fünf Nitrohandschuhe und eine Aufbewahrungsbox. Legen Sie mit einer mit Nitro behandschuhten Hand vier Salome-Kindertupfer in die vier Tupfer-Aufbewahrungsröhrchen und verschließen Sie sie mit gelben, orangefarbenen, blauen bzw. violetten Kappen.

Bringen Sie dann ein Etikett auf jedem Aufbewahrungsröhrchen an, auf dem der Zeitpunkt der Entnahme angegeben ist. Legen Sie die vier verschlossenen Aufbewahrungsröhrchen, das Anleitungsblatt für die Speichelsammlung und die vier Nitrohandschuhe in den Ziploc-Beutel und beschriften Sie ihn mit der ID der Person und dem Datum der Entnahme. Nach diesem Zeitplan ein kurzer Hausbesuch bei den zuvor eingewilligten Probanden und am Tag vor der Speichelprobe.

Geben Sie nach Ihrer Ankunft in der Wohnung der Person dem Speichelsammler die Plastiktüte mit den Vorräten und das Anleitungsblatt. Überprüfen Sie das Anleitungsblatt und betonen Sie die Notwendigkeit, die Start- und Stoppzeiten der Speichelentnahme aufzuzeichnen, indem Sie die schriftlichen Anweisungen hervorheben. Notieren Sie den Namen, die Dosierung und den Zeitplan aller verschreibungspflichtigen und rezeptfreien Medikamente, die der Teilnehmer innerhalb der letzten 48 Stunden eingenommen hat.

Weisen Sie den Speichelsammler oder SC an, einen Nitro-Handschuh auf die dominante Hand aufzutragen. Sagen Sie dem Teilnehmer, dass er seinen Kopf nach vorne neigen soll, damit sich der Speichel auf dem Boden seines Mundes sammeln kann. Weisen Sie anschließend den SC an, das Tupferaufbewahrungsröhrchen zu öffnen und den Mundabstrich zu entnehmen.

Weisen Sie den SC an, den Mundtupfer unter die Vorderseite der Zunge des älteren Erwachsenen zu legen, um etwa drei Tropfen des gesammelten Speichels aufzunehmen und den Mundtupfer zwei Minuten lang an Ort und Stelle zu halten, um sicherzustellen, dass er gesättigt ist, lassen Sie den SC den gesättigten Mundtupfer zurück in den Korb des Tupferaufbewahrungsröhrchens zurückführen. und setzen Sie die Kappe wieder auf. Lassen Sie dann den SC das Rohr sofort in die Aufbewahrungsbox legen und stellen Sie es in einen Gefrierschrank. Nachdem Sie den Handschuh in den Mülleimer geworfen haben, weisen Sie den SC an, die Start- und Stoppzeiten auf dem Speichelanweisungsblatt zu notieren.

Informieren Sie als Nächstes das SC, dass es am nächsten Tag viermal Speichelproben entnehmen wird, insbesondere beim Aufwachen 30 Minuten nach dem Aufwachen am Vormittag und Abend, lassen Sie das SC den Patienten sagen, dass er seinen Mund 10 Minuten vor der Speichelentnahme mit Wasser spülen soll. Entsorgen Sie nach der Speichelentnahme die Proben, die sichtbar mit Blut kontaminiert sind. Weisen Sie den SC an, dass die Speichelproben im Gefrierschrank verbleiben sollen, bis sie vom Studienteam entnommen werden.

Rufen Sie das Studienteam an, um zu bestätigen, dass es eine Uhrzeit und einen Tag für die Entnahme der gefrorenen Proben vereinbaren und neue Speichelentnahmematerialien für einen zukünftigen Entnahmetermin mitbringen wird. Nachdem die Proben aus dem Gefrierschrank des Probanden genommen wurden, bewahren Sie sie während des Transports zum Labor eingefroren auf, indem Sie sie in einen isolierten Gefrierbeutel legen. Ersetzen Sie bei Ihrer Ankunft im Labor das weiße Etikett auf jedem Röhrchen durch einen sequenziellen Barcode.

Überprüfen Sie, ob der sequenzielle Barcode mit der Betreff-ID, dem Datum der Entnahme und der Uhrzeit der Entnahme übereinstimmt. Dann geben Sie die Speichelproben wieder in einen bei minus 20 Grad Celsius warmen Gefrierschrank, um das Muzin auszufällen. Nach dem Auftauen der Speichelproben zentrifugieren Sie die Proben 15 Minuten lang bei der 1500-fachen Schwerkraft.

Sobald die Reagenzien des Speichelassay-Kits etwa 90 Minuten lang bei Raumtemperatur sind, bereiten Sie den Waschpuffer gemäß den Anweisungen des Kits vor und pipettieren Sie 25 Mikroliter der Standardkontrollen und Proben in die entsprechenden Vertiefungen einer 96-Well-Platte. Im Anschluss an diese Pipette werden 200 Mikroliter einer zuvor hergestellten Enzymkonjugationslösung in die Vertiefungen gegeben. Mischen Sie die Proben, indem Sie die Platte fünf Minuten lang bei 500 U/min auf einen Rotator stellen.

Nachdem die Proben 55 Minuten lang bei Raumtemperatur inkubiert wurden, waschen und tupfen Sie die Platte viermal mit Waschpuffer ab. Fügen Sie dann 200 Mikroliter Tetraethylbenzin oder TMB-Lösung hinzu. Sobald die Proben fünf Minuten lang gemischt wurden.

Decken Sie die Platte bei 500 U/min mit Alufolie ab und inkubieren Sie sie weitere 25 Minuten im Dunkeln. Wenn Sie fertig sind, fügen Sie 50 Mikroliter Stopplösung hinzu und mischen Sie die Proben drei Minuten lang bei 500 U/min. Wischen Sie innerhalb von 10 Minuten nach der Zugabe der Stopplösung den Plattenboden ab und lesen Sie die Platte mit einem Plattenlesegerät bei 450 Nanometern ab.

Berechnen Sie als Nächstes die Cortisolkonzentration anhand der durchschnittlichen optischen Dichte. Subtrahieren Sie die durchschnittliche optische Dichte in unspezifischen Bindungsvertiefungen von der durchschnittlichen optischen Dichte in Nullstandard-Kontroll- und Probenvertiefungen. Schätzen Sie schließlich die Konzentrationen der Kontrollen und Unbekannten mit Hilfe einer Logistiksoftware.

Die beschriebenen Verfahren dienen der Messung des Tagesprofils der Speichel-, Alpha-Amylase- und Speichelcortisolkonzentrationen. Da sich gezeigt hat, dass die Cortisolergebnisse positiv verzerrt sind, wird empfohlen, die logarithmische Transformation der Daten zu verwenden, um eine Normalverteilung zu erhalten. Es stehen verschiedene Strategien zur Verfügung, um Unterschiede im Tagesrhythmus von Cortisol und Alpha-Amylase zu modellieren.

Die erste Strategie besteht darin, die tägliche Veränderung der Alpha-Amylase oder des Cortisols zwischen dem Aufwachen und 30 Minuten nach dem Aufwachen darzustellen. Die zweite Strategie besteht darin, die Gesamtkonzentration von Cortisol oder Alpha-Amylase über einen Tag darzustellen. Die resultierenden Zusammenfassungsparameter können in zwei allgemeine Kategorien eingeteilt werden: das Maß für das Ausmaß der Reaktion oder die Maße für das Muster der Reaktion im Zeitverlauf.

Die Modellierung der Wachstumskurve kann für Studien nützlich sein, in denen mehrere Proben von Individuen über den Tag verteilt gesammelt werden. Eine Wachstumskurve kann angepasst werden, um individuelle Unterschiede im Tageszyklus zu berücksichtigen, indem Prädiktoren auf individueller oder Messebene hinzugefügt werden. Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie man Speichel sammelt und wie man Pflegekräften beibringt, wie man medizinisch Speichel für unsere älteren Erwachsenen zu Hause sammelt, und Sie sollten ein gutes Verständnis dafür haben, wie man Laboranalysen von Speichelanalyten durchführt, die machbar sind, eine hohe Compliance aufweisen und qualitativ hochwertige Proben liefern.