Retrograde Markierung von retinalen Ganglienzellen im erwachsenen Zebrafisch mit Fluoreszenzfarbstoffen

Erwachsene.Debra Fish hat die einzigartige Fähigkeit, das Nervensystem nach Verletzungen wie Haarzellen, Riechklappe, T-Sland, Rückenmark und Sehnerv zu regenerieren. Da der Teil des ZNS ist, kann eine Verletzung des Sehnervs das Überleben und die Degeneration von RGC induzieren. Die HG-Färbung und der Antikörper-IHC konnten die RRG-Erkrankung jedoch nicht spezifisch markieren, wobei die transgene Linie, die alle R-GCs markiert ist, nicht konstruiert wurde.

Um die Veränderung der R-GCs-Zahl nach einer Verletzung des Sehnervs bei adulten Zebrafischen zu untersuchen, ist es uns gelungen, alle RGC durch retrograde Markierung von RGC aus dem Tum zu markieren. Hallo, ich bin, ich bin, wir sind Mitglieder des Labors für Neuroentwicklung und Reparaturschule der Lexus University of Sales and Technology of China. Und heute zeigen wir Ihnen, wie Sie die retrograde Markierung von RG CS in ABRA-Fischen durchführen und die RG CS-Nummer in der gesamten Bergnetzhaut erhalten können.

Also, fangen wir an. Zuerst müssen wir ein Perfusionssystem aufbauen, um die Anästhesie und das frische Wasser zu untersuchen. Weitere Details zu den Operatoren finden Sie im angehängten PDF-Dokument dieses Films.

Stellen Sie die Box darüber und stellen Sie sicher, dass die Flüssigkeit reibungslos von der Box zum Fisch fließen kann. Halten Sie alle Bediener während der Operation desinfiziert. Bereite mehrere Speedballs vor und lege sie in die Höhlen.

Tröpfeln Sie sie mit 75% Ethanol und absolutem Ethanol. Bereiten Sie ein Neurore-Auge mit einer Glasnadel vor, um es zu vertiefen, außerdem benötigen Sie Geo-Form-Säureätzen, lichthärtende gebundene Bindezange, Schmuckzange, Akupunktur, Ping-Blunt-Indeed-Pinzette, Skle-Rektum, Schere, Coum-Tupfer. Auffällige blaue LED-Glasnadel mit Neurore-Auge am Ende, Feuerzeug und einem 75%igen Ethanol.

Anize den Fisch mit 0,03%MS Triple Two. Lege es dann in den Spalt des Schwamms. Addieren Sie nur die Perfusionsgeschwindigkeit zu etwa einem Tropfen pro Sekunde.

Führen Sie die Nadel in das Fischmaul ein, um sie mit Sauerstoff zu versorgen. Decken Sie den Fisch mit einem Stück Carpas ab, um die Haut feucht zu halten. Nun wenden wir uns der Draufsicht zu, um weitere Details zu erfahren.

Entfernen Sie zuerst die Haut über dem Ganzen fM und wischen Sie die Oberfläche mit einem Fugentupfer ab. Waschen Sie das Tuch mit Salient.

Trocknen Sie es dann mit einer Ohrenspülbirne. Korrodieren Sie den Schädel 10 Sekunden lang mit dem Mittel, wischen Sie das Mittel vollständig weg. Waschen Sie dann den Bereich mit Salient und trocknen Sie ihn abdecken.

Akzeptieren Sie das richtige Tectum mit Lichthärtung nach innen zum Schutz vor der eindringenden Korrosion. Härten Sie es mit einem Zeitraum von 40 Sekunden unter Einwirkung von blauem Licht aus. Setzen Sie das Mittel erneut auf das rechte Tum, um eine vollständige Kante zu erhalten.

Wischen Sie das Mittel zwei Minuten lang vollständig ab. Waschen Sie dann den Bereich mit Salient und trocknen Sie ihn. Öffne den Schädel vorsichtig mit der Pinzette Nummer fünf.

Um das rechte Taktil freizulegen, absorbieren Sie die aus der Wunde austretende Gehirnspinalflüssigkeit mit Geoformm. Streichen Sie die Farbe über das gesamte rechte Tectum. Decken Sie dann ein Stück Geo-Formm auf dem D-Auge ab, um es an der ganzen rechten Tectum Tally zu befestigen.

Decken Sie das Loch mit dem Ster ab. Schuppen vom Sandfisch ab. Versiegeln Sie die Wunde mit der Lichthärtebindung und fixieren Sie sie mit blauem Licht.

Schalten Sie die Anästhesielösung aus. Beleben Sie den Fisch mit frischem Wasser. Normalerweise schneiden wir ihre Sachen ab, damit sie nicht schnell schwingen.

In unserem Labor werden alle Operationen von einer fachkundigen Person durchgeführt. Pro Fisch dauert es 10 bis 12 Minuten. Etwa 20 bis 30 Fische können an einem halben Tag etikettiert werden.

Die Netzhaut ist nicht in der Celia-Zone enthalten. Machen Sie eine Augenmuschel, indem Sie die Celia-Zone und die Hornhaut mit einer Venenschere entfernen. Entfernen Sie die Linse und spülen Sie die wässrige Flüssigkeit mit I-C-P-B-S aus.

Spülen Sie den pigmentgeschnittenen Sehnerv an der Bandscheibe aus. Entfernen Sie die Sklera, um eine Netzhaut zu erhalten. Die Fixierung der Netzhaut mit 2% PFA ist optional.

Wenn die Bildgebung nicht schnell auf die Trennung folgt, reinigen Sie die Blutwolken und die Pigmentfragmente vor der Montage. Transportieren Sie die Netzhaut mit einem Löffel aus gebogenem Deckglas. Die Altersangaben sind durch Linien gekennzeichnet.

Legen Sie die Netzhaut in ca. 30%Glycerin auf ein Mikroskop. Gleiten. Halten Sie RGCL nach oben.

Entferne das Glycerin und schneide die Netzhaut in vier Quadranten. Tropfen Sie 20 Mikroliter. Ich sehe 75% Glycerin auf der Netzhaut.

Decken Sie die Probe mit einem quadratischen Deckglas mit einer Stille von 1,8 Zentimetern ab. Versiegeln Sie das Deckglas mit Nagelöl und dem Markt. Beobachten Sie die Probe mit diesem OP am Fluoreszenzmikroskop

Wir retrogradieren erfolgreich die Kennzeichnung von RTCs in. Passen Sie den Zebrafisch an und erhalten Sie die RTC-Nummer in der gesamten Bergnetzhaut. Durch die Verwendung von Lichthärtungsbindungen verbessern wir die Überlebensrate von Zebrafischen, was diese Methode effektiver macht.