Name: MALDI-Imaging-Massenspektrometrie zur Untersuchung von Metaboliten in Medicago truncatula Wurzelknöllchen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-05T17:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 59 s
Description: Erfahren Sie, wie MALDI-Imaging-Massenspektrometrie zur Analyse endogener Metaboliten in Medicago truncatula Wurzelknöllchen eingesetzt wird. Diese Methode liefert wertvolle Einblicke in pflanzliche Stoffwechselprozesse.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Die Autoren bedanken sich bei Dr. Jean-Michel Ané in der Abteilung für Pflanzenbau an der UW-Madison für die Bereitstellung von Medicago truncatula Proben bestätigen. Diese Arbeit wurde zum Teil aus Mitteln der National Science Foundation (NSF) unterstützt Zuschuss CHE-0957784, der Universität von Wisconsin Graduate School und der Wisconsin Alumni Research Foundation (WARF) und Romnes Fakultät Research Fellowship-Programm (LL). EG quittiert eine NSF Graduate Research Fellowship (DGE-1256259).

1. Instrumentierung <ol><li> MALDI-TOF/TOF MSI. Verwenden Sie ein Massenspektrometer mit einer MALDI-Quelle für die Analyse von kleinen Molekülen ausgestattet (siehe Tabelle der Materialien / Geräte). Führen Akquisitionen im positiven oder negativen Ionen-Modus in Abhängigkeit von den Analyten von Interesse. Geben Sie einen Massenbereich von Interesse und sammeln Sie 500 Laserschüsse / Spot bei 50 Intervallen um sowohl in der x-und y-Richtung über die Oberfläche der Probe auf Ionen-Bilder zu erzeugen. Die Rasterweite und die Anzahl der Laserschüsse eingestellt werden, um eine höhere räumliche Auflösung und maximalen Signalintensität bzw. zu erhalten. Verwenden DHB Matrix Peaks oder der Folie oder direkt auf das Gewebe aufgebracht, um die Massenspektren kalibrieren internen Standards. </li><li> Hohe Auflösung LC-MS. (Siehe Tabelle der Materialien / Geräte) Führen Probenextrakten mit LC-MS entweder mit Reversed-Phase (RP) LC mit einer C-18-Säule oder Normalphase (NP) mit einem HILIC Säule in Abhängigkeit von den Analyten von Interesse. Verwenden Sie mobile Phasen undGradienten für das entsprechende speziellen Probentyp. Führen Akquisitionen in positive oder negative Ionen-Modi, je nach Probentyp. </li></ol> 2. Gewebepräparation <ol><li> Schneiden Sie die Wurzelknöllchen aus der Pflanze, so dass 3-4 mm der Wurzel zum Knoten befestigt. </li><li> Unmittelbar nach der Sektion, Zange verwenden, um das Gewebe in einem Kryostaten Tasse legen und decken mit Gelatine (100 mg / ml in VE-Wasser). Es ist für das Gewebe an der Unterseite der Schale ohne Luftblasen aufgeklebt werden. </li><li> Blitzeis das Gewebe, indem Sie den Becher in einem Trockeneis / Ethanol-Bad, bis die Gelatine erstarrt und wird undurchsichtig. Proben bei -80 ° C bis zur Verwendung. </li><li> Proben entfernen aus dem -80 ° C Gefrierschrank, schneiden Sie den Kunststoffbecher und-Kryostaten wegschneiden überschüssige Gelatine. Montieren Sie den eingebetteten Gewebe mit dem Kryostaten Spannfutter mit einer Dime-Größe Menge der optimale Schnitttemperatur (OCT) Medien, die zwar nicht gerade der Oktober berühren das Gewebe. Legen Sie in KryostatenBox, bis die Oktober erstarrt. </li><li> Damit das Spannfutter und Gelatine in den Kryostaten Feld (auf -20 oder -25 ° C) für etwa 15 min äquilibrieren. </li><li> Verwenden Sie den Kryostaten (siehe Tabelle der Materialien / Geräte), um Gewebeschnitt etwa die Dicke einer Zelle (8-20 um je nach Gewebetyp) und Tauwetter montieren jede Scheibe auf die ITO-beschichtetes Glas durch Erwärmen der Rückseite (nicht-ITO beschichtete Seite) einer ITO-beschichtete Glasträger auf der Rückseite der Hand. Legen Sie die ITO-beschichtete Seite der Folie erwärmt in der Nähe des eingefrorenen Gewebeschnitt und damit die Scheibe, um auf der Folie haften. Platzieren Sie die Abschnitte nahe beieinander auf der Folie wird die bessere Ausrichtung bei MSI bieten. </li></ol> 3. Matrix-Anwendung <ol><li> Airbrush Anwendung der MALDI-Matrix <ol><li> Alle Airbrush-Verfahren sollten in einem Abzug durchgeführt werden. </li><li> Die Airbrush-Lösung Behälter und Düse (siehe Tabelle der Materialien / Geräte) mit Methanol gründlich reinigen undFüllen der Lösungsbehälter mit DHB-Matrix-Lösung (150 mg / ml in 50% methanol/0.1% TFA v / v). </li><li> Halten der Spritzpistole etwa 35 cm von der Probe und anzuwenden 10-15 Schichten Matrix auf der Oberfläche des Objektträgers mit einer Dauer von 10 Sek. und 30 Sek. Spritztrockenzeit zwischen jeder Beschichtung. </li><li> Gründlich die Airbrush wieder sauber, wenn Sie fertig mit Methanol, um zu vermeiden Verstopfung von der Matrix-Lösung. </li></ol></li><li> Automatische Sprayer Anwendung der MALDI-Matrix <ol><li> Folgen Sie den Start-up-Anleitungen der Hersteller von automatischen Spritzgerät System. </li><li> Für MSI von Metaboliten in Wurzelknöllchen mit 40 mg / ml (in 50% methanol/0.1% TFA v / v) DHB als Matrix, die Temperatur auf ~ 80 ° C, Geschwindigkeit bis 1250 mm / min, Durchflussrate auf 50 ul / min, und die Anzahl der Durchgänge 24. Für beste Leistung wird empfohlen, um die Düse 90 und / oder versetzt die Düse von 1,5 mm zwischen jedem Durchlauf drehen. Starten Sprayer-Methode. Als side Note, insbesondere die Spritzensystem verwendet hier heizt die Düse zur schnelleren Verdampfung des Lösungsmittels. Wenn das Lösungsmittel verdampft, wobei die Konzentration des Matrix schnell erhöht. Die mit der Airbrush und dem Spritzautomaten auf die Probe aufgebracht Matrix vergleichbare Konzentrationen. </li><li> Folgen Sie den Anweisungen Abschaltung der Hersteller von automatischen Spritzgerät System. </li></ol></li><li> Sublimation Anwendung der MALDI-Matrix <ol><li> Wiegen Sie 300 mg DHB in den Boden des Sublimationskammer (siehe Tabelle der Materialien / Geräte). </li><li> Kleben Sie den Glasobjektträger zu der kalten Finger (obere Teil des Sublimationskammer) mit den Gewebeschnitten nach unten mit einem doppelseitigen, leitfähiges Band. Decken Sie die gesamte Rückseite der Folie mit dem doppelseitigen Klebeband selbst für Leitfähigkeit, wodurch auch Matrix-Abscheidung. </li><li> Klemmen Sie die oberen und unteren Hälften der Sublimation Kammer zusammen mit der C-Klemme. Verbinden Sie den Vakuum-und Ad-d Eis und kaltes Wasser an die Spitze Reservoir. </li><li> Platzieren Sublimationskammer in einem Heizmantel bei Raumtemperatur. </li><li> Einschalten der Vakuumpumpe. Warten Sie 15 min und die Heizung andrehen Mantel. Der Heizmantel sollte 120 ° C im Verlauf von 10 min zu erreichen. </li><li> Nach 10 min, schalten Sie die Hitze, in der Nähe der Vakuumventil (so das Innere der Kammer bleibt unter Vakuum), und schalten Sie die Vakuumpumpe. </li><li> Lassen Sie die Kammer auf Raumtemperatur zu kommen, öffnen Sie das Ventil das Vakuum Druck und entfernen Sie die Probe. Die Größe der Kammer Sublimation wird die Höhe der Matrix zu dem Glasobjektträger sublimiert bestimmen. Die größeren Sublimation Kammern (die Größe einer 400 ml-Becherglas) werden ca. 300 mg HTB während die kleineren Kammern (die Größe einer 150 ml-Becherglas) werden ca. 100 mg HTB und erfordert Schneiden der Glasplatte, so dass es passt in die Kammer. </li></ol></li></ol> 4. Image Acquisition <ol> &lt;li&gt; Mark a + Muster auf jeder Ecke der Probe mit einem WiteOut Korrekturflüssigkeit Stift als &quot;lehren Punkte&quot; verwendet werden. Setzen Sie den Glasobjektträger in die MALDI Dia-Adapterplatte und nehmen Sie ein optisches Bild der Probe mit Hilfe eines Scanners. </li><li> Einrichten einer Bildaufnahme-Datei unter Verwendung der von der Firma Instrument mit einer Rasterschrittweite von 50 um und einer Laserdurchmesser gleich oder kleiner als die Rasterschrittweite vorgesehen Software. An diesem Instrument, der minimale Lasereinstellung gibt einen Laserdurchmesser von etwa 10 um und kleinen Lasereinstellung hat einen Durchmesser von 40 bis 50 um. </li><li> Laden des optischen Bildes in die Software und Ausrichten der Platte mit dem optischen Bild. </li><li> Kalibrieren Sie das Gerät vor Beginn der gemeinsamen Akquisition mit Matrix-Clusterionen, interne Standards oder eine Kalibrierung Mix. </li><li> Geben die Bereiche des Gewebes mit MSI analysiert werden, einschließlich einer Stelle der reinen Matrix auf der Folie als &quot;blank&quot; verwendet werden. </li><li> Beginnen acErwerb. </li></ol> 5. Bildgenerierung <ol><li> Öffnen Sie die Bilddatei in der handelsüblichen Software, die vom Hersteller bereitgestellt und extrahieren Sie die Ionen-Bilder. Andere Open-Source-Software ist für MSI 19 Datenverarbeitung zur Verfügung. </li></ol> 6. Identifizierung von Metaboliten <ol><li> Wählen Sie einen bestimmten m / z von Interesse aus dem Massenspektrum mit der herstellerspezifischen Software (siehe Tabelle der Materialien / Geräte). Ein Analyt kann aus einem Matrix-Ionen unterschieden werden, wenn ein Analyt ausgewählt ist aus Peak im Massenspektrum und Ionen Bilder erzeugt werden spezifisch an den Gewebeabschnitt zu lokalisieren. </li><li> Erstellen Sie eine Liste von Analyten von Interesse und führen Sie MS / MS-Experimente. Siehe Tabelle 1 und Tabelle 2 in Repräsentative Ergebnisse für die Probenlisten von Analyten. </li><li> Führen Sie gezielt LC-MS-Analyse auf einem hochauflösenden Massenspektrometer (oder hoher Auflösung MALDI-MS falls vorhanden) genau zu erhaltenMassenmessungen der Analyten von Interesse und führen auch LC-MS/MS der Ziel Analyten charakteristischen Fragmentierungsmuster zu erhalten. </li><li> Führen Datenbank suchen, um vermeintliche Identifikationen für die Ziel Analyten zu bestimmen. Beispiele für Stoffwechsel Datenbanken enthalten: METLIN, ChemSpider, PubChem, KEGG und HMDB. </li><li> Um die vermeintlichen Identifikationen von genauen Massendatenbanksuche bestätigen, passen Sie die MS / MS von den gezielten Analyten MS / MS-Spektren von Standards, Literatur und / oder Splitter Vorhersage-Software. </li></ol>

<ol><li>Seeley, E. H., Schwamborn, K., Caprioli, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+of+Intact+Tissue+Sections%3A+Moving+beyond+the+Microscope%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Imaging of Intact Tissue Sections: Moving beyond the Microscope.</a> J. Biol. Chem. 286, 25459-25466 (2011).</li>
<li>van Hove, E. R. A., Smith, D. F., Heeren, R. M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+concise+review+of+mass+spectrometry+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">A concise review of mass spectrometry imaging.</a> J. Chromatogr. A. 1217, 3946-3954 (2010).</li>
<li>Lietz, C. B., Gemperline, E., Li, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Qualitative+and+quantitative+mass+spectrometry+imaging+of+drugs+and+metabolites%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Drug+Deliv.+Rev%22%5BJournal%5D)">Qualitative and quantitative mass spectrometry imaging of drugs and metabolites.</a> Adv. Drug Deliv. Rev. 65, 1074-1085 (2013).</li>
<li>Ye, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MALDI+mass+spectrometry-assisted+molecular+imaging+of+metabolites+during+nitrogen+fixation+in+the+Medicago+truncatula-Sinorhizobium+meliloti+symbiosis%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+J%22%5BJournal%5D)">MALDI mass spectrometry-assisted molecular imaging of metabolites during nitrogen fixation in the Medicago truncatula-Sinorhizobium meliloti symbiosis.</a> Plant J. 75, 130-145 (2013).</li>
<li>Ye, H., Gemperline, E., Li, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+vision+for+better+health%3A+mass+spectrometry+imaging+for+clinical+diagnostics%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Chim.+Acta%22%5BJournal%5D)">A vision for better health: mass spectrometry imaging for clinical diagnostics.</a> Clin. Chim. Acta. 420, 11-22 (2013).</li>
<li>Wei, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolomics+and+Its+Practical+Value+in+Pharmaceutical+Industry%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Drug+Metab%22%5BJournal%5D)">Metabolomics and Its Practical Value in Pharmaceutical Industry.</a> Curr. Drug Metab. 12, 345-358 (2011).</li>
<li>Kobayashi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Serum+Metabolomics-Based+Diagnostic+Approach+to+Pancreatic+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Epidem.+Biomar%22%5BJournal%5D)">A Novel Serum Metabolomics-Based Diagnostic Approach to Pancreatic Cancer.</a> Cancer Epidem. Biomar. 22, 571-579 (2013).</li>
<li>West, P. R., Weir, A. M., Smith, A. M., Donley, E. L. R., Cezar, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predicting+human+developmental+toxicity+of+pharmaceuticals+using+human+embryonic+stem+cells+and+metabolomics%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol.+Appl.+Pharm%22%5BJournal%5D)">Predicting human developmental toxicity of pharmaceuticals using human embryonic stem cells and metabolomics.</a> Toxicol. Appl. Pharm. 247, 18-27 (2010).</li>
<li>Spegel, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time-resolved+metabolomics+analysis+of+beta-cells+implicates+the+pentose+phosphate+pathway+in+the+control+of+insulin+release%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+J%22%5BJournal%5D)">Time-resolved metabolomics analysis of beta-cells implicates the pentose phosphate pathway in the control of insulin release.</a> Biochem. J. 450, 595-605 (2013).</li>
<li>Pendyala, G., Want, E. J., Webb, W., Siuzdak, G., Fox, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomarkers+for+neuroAIDS%3A+The+widening+scope+of+metabolomics%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuroimmune.+Pharm%22%5BJournal%5D)">Biomarkers for neuroAIDS: The widening scope of metabolomics.</a> J. Neuroimmune. Pharm. 2, 72-80 (2007).</li>
<li>Prell, J., Poole, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+changes+of+rhizobia+in+legume+nodules%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Metabolic changes of rhizobia in legume nodules.</a> Trends Microbiol. 14, 161-168 (2006).</li>
<li>Kutz, K. K., Schmidt, J. J., Li, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+tissue+analysis+of+neuropeptides+by+MALDI+FTMS+in-cell+accumulation%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">In situ tissue analysis of neuropeptides by MALDI FTMS in-cell accumulation.</a> Anal. Chem. 76, 5630-5640 (1021).</li>
<li>Stemmler, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-mass-resolution+direct-tissue+MALDI-FTMS+reveals+broad+conservation+of+three+neuropeptides+%28APSGFLGMRamide%2C+GYRKPPFNGSIFamide+and+pQDLDHVFLRFamide%29+across+members+of+seven+decapod+crustaean+infraorders%5BTitle%5D)+AND+%22Peptides%22%5BJournal%5D)">High-mass-resolution direct-tissue MALDI-FTMS reveals broad conservation of three neuropeptides (APSGFLGMRamide, GYRKPPFNGSIFamide and pQDLDHVFLRFamide) across members of seven decapod crustaean infraorders.</a> Peptides. 28, 2104-2115 (2007).</li>
<li>Rubakhin, S. S., Churchill, J. D., Greenough, W. T., Sweedler, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Profiling+signaling+peptides+in+single+mammalian+cells+using+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Profiling signaling peptides in single mammalian cells using mass spectrometry.</a> Anal. Chem. 78, 7267-7272 (1021).</li>
<li>Neupert, S., Predel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mass+spectrometric+analysis+of+single+identified+neurons+of+an+insect%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+Bioph.+Res.+Co%22%5BJournal%5D)">Mass spectrometric analysis of single identified neurons of an insect.</a> Biochem. Bioph. Res. Co. 327, 640-645 (2005).</li>
<li>Caprioli, R. M., Farmer, T. B., Gile, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+imaging+of+biological+samples%3A+localization+of+peptides+and+proteins+using%5BTitle%5D)+AND+%22MALDI-TOF+MS.+Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Molecular imaging of biological samples: localization of peptides and proteins using.</a> MALDI-TOF MS. Anal. Chem. 69, 4751-4760 (1997).</li>
<li>Baluya, D. L., Garrett, T. J., Yost, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+MALDI+matrix+deposition+method+with+inkjet+printing+for+imaging+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Automated MALDI matrix deposition method with inkjet printing for imaging mass spectrometry.</a> Anal. Chem. 79, 6862-6867 (2007).</li>
<li>Hankin, J. A., Barkley, R. M., Murphy, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sublimation+as+a+method+of+matrix+application+for+mass+spectrometric+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Soc.+Mass+Spectrom%22%5BJournal%5D)">Sublimation as a method of matrix application for mass spectrometric imaging.</a> J. Am. Soc. Mass Spectrom. 18, 1646-1652 (2007).</li>
<li>Robichaud, G., Garrard, K. P., Barry, J. A., Muddiman, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MSiReader%3A+an+open-source+interface+to+view+and+analyze+high+resolving+power+MS+imaging+files+on+Matlab+platform%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Soc.+Mass+Spectrom%22%5BJournal%5D)">MSiReader: an open-source interface to view and analyze high resolving power MS imaging files on Matlab platform.</a> J. Am. Soc. Mass Spectrom. 24, 718-721 (2013).</li>
<li>Northen, T. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clathrate+nanostructures+for+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Clathrate nanostructures for mass spectrometry.</a> Nature. 449, (2007).</li>
<li>Shrivas, K., Hayasaka, T., Sugiura, Y., Setou, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+for+simultaneous+imaging+of+endogenous+low+molecular+weight+metabolites+in+mouse+brain+using+TiO2+nanoparticles+in+nanoparticle-assisted+laser+desorption%2Fionization-imaging+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Method for simultaneous imaging of endogenous low molecular weight metabolites in mouse brain using TiO2 nanoparticles in nanoparticle-assisted laser desorption/ionization-imaging mass spectrometry.</a> Anal. Chem. 83, 7283-7289 (2011).</li>
<li>Thomas, A., Charbonneau, J. L., Fournaise, E., Chaurand, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sublimation+of+new+matrix+candidates+for+high+spatial+resolution+imaging+mass+spectrometry+of+lipids%3A+enhanced+information+in+both+positive+and+negative+polarities+after+1%2C5-diaminonapthalene+deposition%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Sublimation of new matrix candidates for high spatial resolution imaging mass spectrometry of lipids: enhanced information in both positive and negative polarities after 1,5-diaminonapthalene deposition.</a> Anal. Chem. 84, 2048-2054 (2012).</li>
<li>Chen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((2%2C3%2C4%2C5-Tetrakis%283%27%2C4%27-dihydroxylphenyl%29thiophene%3A+a+new+matrix+for+the+selective+analysis+of+low+molecular+weight+amines+and+direct+determination+of+creatinine+in+urine+by+MALDI-TOF+MS%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">2,3,4,5-Tetrakis(3',4'-dihydroxylphenyl)thiophene: a new matrix for the selective analysis of low molecular weight amines and direct determination of creatinine in urine by MALDI-TOF MS.</a> Anal. Chem. 84, 10291-10297 (2012).</li>
<li>Shroff, R., Rulisek, L., Doubsky, J., Svatos, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acid-base-driven+matrix-assisted+mass+spectrometry+for+targeted+metabolomics%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Acid-base-driven matrix-assisted mass spectrometry for targeted metabolomics.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 106, 10092-10096 (2009).</li>
<li>Shroff, R., Svatos, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proton+sponge%3A+a+novel+and+versatile+MALDI+matrix+for+the+analysis+of+metabolites+using+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Proton sponge: a novel and versatile MALDI matrix for the analysis of metabolites using mass spectrometry.</a> Anal. Chem. 81, 7954-7959 (2009).</li>
<li>Shimma, S., Setou, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mass+Microscopy+to+Reveal+Distinct+Localization+of+Heme+B+%28m%2Fz+616%29+in+Colon+Cancer+Liver+Metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mass+Spectrom.+Soc.+Jpn%22%5BJournal%5D)">Mass Microscopy to Reveal Distinct Localization of Heme B (m/z 616) in Colon Cancer Liver Metastasis.</a> J. Mass Spectrom. Soc. Jpn. 55, 145-148 (2007).</li>
<li>Paschke, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mirion-A+Software+Package+for+Automatic+Processing+of+Mass+Spectrometric+Images%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Soc.+Mass+Spectrom%22%5BJournal%5D)">Mirion-A Software Package for Automatic Processing of Mass Spectrometric Images.</a> J. Am. Soc. Mass Spectrom. 24, 1296-1306 (2013).</li>
<li>Parry, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((omniSpect%3A+an+open+MATLAB-based+tool+for+visualization+and+analysis+of+matrix-assisted+laser+desorption%2Fionization+and+desorption+electrospray+ionization+mass+spectrometry+images%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Soc.+Mass+Spectrom%22%5BJournal%5D)">omniSpect: an open MATLAB-based tool for visualization and analysis of matrix-assisted laser desorption/ionization and desorption electrospray ionization mass spectrometry images.</a> J. Am. Soc. Mass Spectrom. 24, 646-649 (2013).</li>
</ol>

Die Autoren erklären, dass sie keine finanziellen Interessen konkurrieren.

Wie oben diskutiert, ist die Probenvorbereitung der wichtigste Schritt in der MSI Workflow. Die Einbettung des Gewebes verursachen ungleichmäßig Schneiden schwierig oder in einigen Fällen nicht möglich zu sein. Der Abschnitt Größe und angemessene Ausgleichszeit sind entscheidend für die Aufrechterhaltung der Gewebeintegrität und Vermeidung von Falten und Tränen. Auswahl der Matrix-und Applikationstechnik eine Rolle bei der Bestimmung der Arten von Analyten zu erfassen ist, die räumliche Auflösung und Reproduzierbarkeit ...

Die wachsenden Bereich der Metabolomics hat viele wichtige biologische Anwendungen, einschließlich der Entdeckung von Biomarkern, die Entschlüsselung Stoffwechselwege in Pflanzen und anderen biologischen Systemen und Toxikologie Profilierung 4,6-10. Eine große technische Herausforderung bei der Untersuchung biologischer Systeme ist es, Wege metabolomic sie ohne Unterbrechung 11 studieren. MALDI-MSI ermöglicht die direkte Analyse von intaktem Gewebe, die sensitive Detektion von Analyten in einzelnen Organen und sogar 12,13 14,15 Einzelzellen ermöglicht. Probenvorbereitung ist ein entscheidender Schritt in der Herstellung reproduzierbare und zuverlässige Massenspektren Bilder. Die Qualität der Bilder hängt stark von Faktoren wie Gewebeeinbettungsmedium, Schichtdicke, MALDI-Matrix und Matrix-Anwendungstechnik. Bei bildgebenden Anwendungen ist ideal Schnittdicke die Breite einer Zelle (8-20 um je nach Probentyp). MALDI erfordert Abscheidung einer organischen, Crystalline Matrixverbindung, typischerweise eine schwache Säure, auf die Probe, um einen Analyten-Ablation und Ionisierung zu unterstützen. 16 verschiedene Matrizen bieten unterschiedliche Signalintensitäten, störenden Ionen und Ionisierungseffizienz von verschiedenen Klassen von Verbindungen. Die Matrix Applikationstechnik spielt auch eine Rolle, in der Qualität der Massenspektren Bilder und verschiedene Techniken für die verschiedenen Klassen von Analyten geeignet sind. Drei Matrix Anwendungsmethoden werden in diesem Protokoll vorgestellt: Airbrush, Spritzautomaten und Sublimation. Airbrush-Matrix-Anwendung wurde vielfach in der MALDI-Bildgebung verwendet. Der Vorteil der Airbrush-Matrix-Anwendung ist, dass es relativ schnell und einfach ist. Allerdings ist die Qualität der Airbrush Matrix Anwendung hängt stark von der Geschicklichkeit des Benutzers und neigt weniger reproduzierbar und führen Diffusion von Analyten, insbesondere kleine Moleküle 17. Automatische Spritze Systeme haben ähnliche Mechanik Matrix Anwendung Airbrush, aber have entwickelt worden, um die Variabilität mit manueller Airbrush-Anwendung gesehen zu entfernen, so dass das Spray mehr reproduzierbar. Diese Methode kann manchmal mehr Zeit in Anspruch als herkömmliche Airbrush-Matrix-Anwendung sein. Sowohl manuelle Airbrush und Spritzautomaten Systeme sind lösemittelbasierten Matrix Anwendungsmethoden. Sublimation ist eine trockene Matrix Applikationstechnik, die immer mehr und mehr populär für die Massenspektrale Bildgebung von Metaboliten und kleinen Molekülen, weil es Analytdiffusion reduziert, aber es fehlt die notwendige Lösungsmittel zu extrahieren und zu beobachten, höhere Massen 18 Verbindungen. Zuversichtlich Identifizierung von Metaboliten erfordert in der Regel präzise Massenmessungen an vermeintlichen Identifikationen gefolgt von Tandem-Massenspektrometrie (MS / MS) Experimente zur Validierung, mit MS / MS-Spektren, die verglichen werden, um Standards, Literatur oder theoretischen Spektren zu erhalten. In diesem Protokoll hoher Auflösung (Massenauflösungsvermögen von 60.000 bei m / z 400), Flüssigchromatographie (LC)-MS ist mit MALDI-MSI gekoppelt, die die Rauminformationen und zuversichtlich Identifikationen von endogenen Metaboliten zu erhalten, mit Medicago truncatula Wurzeln und Wurzelknollen als das biologische System. MS / MS-Experimente können direkt auf das Gewebe mit MALDI-MSI-oder Gewebeextrakten mit LC-MS durchgeführt und für die Validierung der Metabolit Identifikationen verwendet werden. Dieses Protokoll bietet eine einfache Methode, um endogene Metaboliten in M. Karte truncatula, die angepasst und MSI von kleinen Molekülen in verschiedenen Gewebetypen und biologische Systeme angewandt werden kann.

<table><tbody><tr><td>Gelatine</td><td>Difco</td><td><a href="http://catalog.bd.com/bdCat/viewProduct.doCustomer?productNumber=214340">214340</a></td><td>Hitze zum Auflösen</td></tr><tr><td>von Kryostat - HM 550</td><td>Thermo Scientific</td><td>956564A</td><td></td></tr> Mit <tr><td>Indiumzinnoxid (ITO) beschichtete Objektträger&nbsp;</td><td>Delta Technologies</td><td>CB-90IN-S107</td><td>25 mm x 75 mm x 0,8 mm (Breite x Länge x Dicke)</td></tr><tr><td>2,5-Dihydroxybenzoesäure (DHB) Matrix&nbsp;</td><td>ICN Biomedicals</td><td><a href="http://www.labsource.com/Catalog/Item.aspx? ItemID=1787195">PI90033</a></td><td></td></tr><tr><td>Airbrush</td><td>Paasche Airbrush Company</td><td>TG-100D</td><td>gekoppelt mit 75 ml Stahlbehälter</td></tr><tr><td>Automatisches Matrixsprühsystem - TM-Sprayer</td><td>HTX Technologies, LLC</td><td>HTX. TMSP. H021-U</td><td>Spezifische Anweisungen zum Ein- und Ausschalten werden bei der Installation des Instruments gegeben</td></tr><tr><td>. Sublimationsgerät&nbsp;</td><td>Chemglass Life Science</td><td><a href="http://www.chemglass.com/product_view.asp?pnr=CG-3038">CG-3038-01</a></td><td></td></tr><tr><td>Vakuumpumpe- Alcatel 2008 A</td><td>Ideal Vacuum Products</td><td>P10976</td><td>Enddruck = 1 x 10-4 Torr</td></tr><tr><td>ultrafleXtreme MALDI-TOF/TOF</td><td>Bruker Daltonics</td><td>276601</td><td></td></tr><tr><td>FlexImaging</td><td>Bruker Daltonics</td><td>269841</td><td>Ein Beispiel für eine "anbieterspezifische Software"</td></tr><tr><td>MALDI LTQ Orbitrap</td><td>Thermo Scientific</td><td>IQLAAEGAAPFADBMASZ</td><td>Hochauflösendes MALDI-Gerät für genaue Massenmessungen</td></tr><tr><td>Q Exactive</td><td>Thermo Scientific</td><td>IQLAAEGAAPFALGMAZR Hochauflösendes</td><td>LC-MS-Gerät für genaue Massenmessungen</td></tr></tbody></table>

maldi-imaging-massenspektrometrie zur untersuchung von metaboliten in<em&gt; medicago truncatula</em&gt; wurzelknöllchen

MALDI-Mass Spectrometric Imaging for the Investigation of Metabolites in Medicago truncatula Root Nodules

Die meisten Techniken verwendet, um kleine Moleküle, wie Medikamente oder endogene Metaboliten studieren, verwenden Gewebeextrakten, die die Homogenisierung des Gewebes von Interesse, die möglicherweise Änderungen in der Stoffwechselwege untersucht 1 verursachen könnte erfordern. Bildgebenden Massenspektrometrie (MSI) ist ein leistungsstarkes Analyse-Tool, das in intakten Scheiben von biologischen Gewebeproben 1-5 räumliche Informationen von Analyten zur Verfügung stellen kann. Diese Technik wurde ausgiebig verwendet, um verschiedene Arten von Verbindungen, einschließlich Proteine, Peptide, Lipide, kleine Moleküle wie Metaboliten endogenen studieren. Mit Matrix-unterstützte Laserdesorption / Ionisation (MALDI)-MSI können räumliche Verteilungen mehrerer Metaboliten gleichzeitig detektiert werden. Hierbei wird eine speziell für die Durchführung von Metabolomics ungezielte MSI Experimente an Leguminosen Wurzeln und Wurzelknöllchen entwickelte Methode vorgestellt, das Einblicke in die biologischen Prozesse, die sich offenbaren konnte. Diehier vorgestellte Methode zeigt eine typische MSI Workflow, von der Probenvorbereitung bis zur Bildaufnahme, und konzentriert sich auf die Matrix-Anwendung Schritt und zeigt mehrere Matrix Anwendungstechniken, die nützlich für die Erkennung kleiner Moleküle sind. Sobald die MS Bilder erzeugt, wird die Analyse und Identifizierung von Metaboliten von Interesse diskutiert und gezeigt. Die hier vorgestellten Standard-Workflow kann leicht für verschiedene Gewebearten, Molekülarten, und Instrumentierung geändert werden.

Ein Überblick über experimentelle MSI ist in Fig. 1 gezeigt. Am Anfang des Experiments ist die Probenvorbereitung ein kritischer Schritt. Knöllchen aus der Pflanzenwurzel geschnitten und in Gelatine eingebettet. Das Gewebe muss flach gegen den Kryostaten Tasse gedrückt werden, ohne Blasen, während es eingefroren wird, das wird einfacher und die richtige Ausrichtung des Gewebes zu gewährleisten, während es geschnitten ist. Wenn das Gewebe in Scheiben geschnitten wird, ist es wichtig, das Gewebe bei der r...

Bildgebenden Massenspektrometrie (MSI) ist ein leistungsfähiges Werkzeug, das benutzt werden kann, um in intakten Geweben entdecken und identifizieren verschiedene chemische Spezies, die Erhaltung der Verbindungen in ihrer natürlichen Umgebung, die neue Einblicke in die biologischen Prozesse zur Verfügung stellen kann. Hierin eine für die Analyse von kleinen Molekülen entwickelt MSI Verfahren beschrieben.

MALDI-Imaging-Massenspektrometrie zur Untersuchung von Metaboliten in<em&gt; Medicago truncatula</em&gt; Wurzelknöllchen

Most techniques used to study small molecules, such as pharmaceutical drugs or endogenous metabolites, employ tissue extracts which require the ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, zuverlässige, mehrfache Massenspektrometrie-Bildgebung von kleinen Molekülen in Pflanzenwurzelgewebe durchzuführen. Dies wird erreicht, indem zunächst die Gewebeproben auf die geeignete Größe vorbereitet werden. Der zweite Schritt besteht darin, die maldi-Matrix für die Gewebeprobe zu optimieren und aufzutragen. Anschließend wird die Probe einer MALDI-Analyse unterzogen, und Spektren werden über das Gewebe hinweg erfasst. Der letzte Schritt ist die Datenverarbeitung, bei der biologisch wichtige Analyten identifiziert werden können. Letztendlich dient die MALDI-MALDI-Bildgebung (MSI) dem Nachweis endogener Metaboliten, die in Wurzelknöllchen von Leguminosen vorkommen.Diese Methode kann Einblicke in die in Pflanzenwurzelgewebe vorhandenen Metaboliten gewähren, kann aber auch auf die Untersuchung von kleinen Molekülen und Geweben aus anderen Modellsystemen angewendet werden, einschließlich Säugetiere, Krebstiere, Insekten und mehr. Entnehmen Sie zunächst zuvor vorbereitete Pflanzengewebeproben dem minus 80 Grad Celsius kalten Gefrierschrank. Schneiden Sie dann die Plastikschale des Kryostaten ab und entfernen Sie das überschüssige Gelatine. Befestigen Sie das eingebettete Gewebe mit einer münzgroßen Menge an Medium mit optimaler Schneidetemperatur oder OCT-Medium an einem Kryostatchuck, wobei das OCT-Medium das Gewebe nicht berühren darf.Stellen Sie den Kryostat-Chuck in eine auf minus 20 Grad Celsius eingestellte Kryostatbox, bis das OCT erstarrt ist. Nachdem Sie den Chuck und die Gelatine etwa 15 Minuten lang in der Kryostatbox zur AC-Aquilibration belassen haben, schneiden Sie das Gewebe im Kryostat auf eine Dicke von etwa einer Zelle. Bringen Sie dann jeden Schnitt durch Erwärmen der unbeschichteten Seite der präkonditionierten Objektträger am Handrücken mit dem Daumen auf dem Objektträger an.Als Nächstes platzieren Sie die mit ITO beschichtete Seite der warmen Objektträger nahe der gefrorenen Gewebeschnittprobe und lassen Sie die Probe am Objektträger haften, um die MALDI-Matrix mittels Airbrush aufzutragen. Reinigen Sie den Airbrush-Lösungsbehälter und die Düse gründlich mit Methanol und füllen Sie den Behälter mit DHB-Matrixlösung. Halten Sie den Airbrush etwa 35 Zentimeter vom Probenmaterial entfernt und tragen Sie 10 bis 15 Matrixschichten auf die Oberfläche des Objektträgers auf, wobei jeweils 10 Sekunden Sprühdauer und 30 Sekunden Trocknungszeit zwischen den einzelnen Schichten liegen.Wenn Sie fertig sind, reinigen Sie die Airbrush gründlich mit Methanol, um Verstopfungen zu vermeiden. Aufgrund der Matrixlösung ist zu beachten, dass, obwohl Airbrush-Geräte leichter verfügbar sind, automatische Matrix-Sprühvorrichtungen häufig eine gleichmäßigere und reproduzierbarere Matrixbedeckung für die Sublimationsanwendung der MALDI-Matrix erzeugen. Wiegen Sie 300 Milligramm DHB in den Boden der Sublimationskammer ab. Befestigen Sie den Objektträger mit der Gewebeschnittfläche nach unten mithilfe von doppelseitigem leitfähigem Klebeband am Kühlfinger. Schneiden Sie den Objektträger zu, falls er zu groß ist.Beim Sublimationskolben befestigen Sie die obere und untere Hälfte der Sublimationsvorrichtung mit einer C-Klammer. Dann stellen Sie die Sublimationsvorrichtung in ein Heizbad, das sich bei Raumtemperatur befindet. Schließen Sie das Vakuum an und füllen Sie die obere Kammer mit Eis in kaltem Wasser.Wenn die Vakuumpumpe eingeschaltet wurde, warten Sie 15 Minuten und schalten Sie dann den Heizmantel ein. Nach 10 Minuten schalten Sie die Heizung aus, schließen das Ventil zum Vakuum und schalten die Vakuumpumpe aus. Sobald die Kammer auf Raumtemperatur abgekühlt ist, öffnen Sie das Ventil, um den Vakuumdruck abzulassen, und nehmen Sie die Probe heraus.Markieren Sie anschließend mit dem Korrekturstift ein Kreuzmuster an jeder Ecke der Probe, das als Lehrpunkt dient. Legen Sie den Objektträger in die MALDI-Objektträgeradapterplatte ein und nehmen Sie mithilfe eines Scanners ein optisches Bild der Probe auf. Überprüfen Sie das Bild am Computer und drehen Sie es, sodass es auf dem Bildschirm korrekt ausgerichtet angezeigt wird.Die Probe wird in derselben Orientierung in das Instrument eingelegt. Erstellen Sie eine Bilddatenaufnahme-Datei mithilfe der Software des Instrumentenherstellers mit einer Raster-Schrittgröße von 50 Mikrometern und einem Laserdurchmesser, der gleich oder kleiner als die Raster-Schrittgröße ist. Laden Sie anschließend das optische Bild in die Software und richten Sie die Platte mit dem optischen Bild aus.Nach der Kalibrierung des Instruments legen Sie die Gewebebereiche fest, die mit der MSI analysiert werden sollen, einschließlich eines Flecks mit reinem Matrixmaterial auf dem Objektträger, der als Leerwert verwendet wird. Danach starten Sie die Datenaufnahme. Öffnen Sie nach der Datenaufnahme die Bilddatei in der vom Hersteller bereitgestellten Software und extrahieren Sie die Ionenbilder, indem Sie ein bestimmtes Massen-zu-Ladungs-Verhältnis von Interesse aus dem Massenspektrum auswählen. Erstellen Sie mithilfe der Software eine Liste spezifischer Analyten von Interesse zur weiteren Identifizierung.Führen Sie eine genaue Massendatenbanksuche durch, um mögliche Identifizierungen für die gezielten Analyten zu bestimmen. Um die möglichen Identifizierungen aus der genauen Massendatenbanksuche zu bestätigen, vergleichen Sie die MS-Spektren der gezielten Analyten mit MS/MS-Spektren von Referenzsubstanzen, Literaturdaten und/oder Fragmentierungsvorhersagesoftware. Hier ist ein optisches Bild eines Mego-Tula-Wurzelknöllchenschnitts abgebildet.Hier ist ein optisches Bildbeispiel der Matrixabdeckung und Kristallgrößen unter Verwendung einer Airbrush-Automatensprühvorrichtung bzw. der Sublimation. Die Airbrush-Auftragsmethode erzeugt große und kleine Kristalle. Während die Automatensprühmethode kleine, gleichmäßig große Kristalle erzeugt, erzeugt die Sublimation eine gleichmäßige Matrixschicht.Herkömmliche Matrizes wie DHB erzeugen viele Ionen im niedrigen Massenbereich unterhalb von 500 Dalton. Diese Matrixionen können die Detektion von Metaboliten in diesem Bereich stören. Gezeigt sind hier die MS-Spektren allein der DHB-Matrix im Vergleich zu Wurzelknöllchengegewe, das mit DHB-Matrix beschichtet ist.Matrix-Peaks können mithilfe der MS-Bilder von echten Metaboliten unterschieden werden. Beim Anklicken eines Peaks wird das Ionenbild extrahiert und überlagert mit dem optischen Bild angezeigt. Diejenigen Peaks, die Bilder mit klarer Lokalisation im Gewebe erzeugen und nicht im nur Matrix enthaltenden Bereich erscheinen, gelten als Metaboliten. Hier gezeigt sind mehrere repräsentative Ionenbilder von Metaboliten, die im Wurzelknöllchengewebe gefunden wurden.Während Beispiele von MS-Bildern, die Matrix-gebundenen Signalen entsprechen, hier dargestellt sind, zeigt dieses Bild eine deutliche Lokalisierung im Wurzelknöllchen-Gewebe und das Fehlen eines Signals in dem ausschließlich Matrix enthaltenden Bereich, der abgebildet wurde. Dieses Signal weist eine geringe Lokalisierung auf und ist über das gesamte Gewebe hinweg vorhanden. Das Signal ist außerdem in dem ausschließlich Matrix enthaltenden Bereich sichtbar, der abgebildet wurde.Das Endziel von untargeted Metabolomik-Experimenten besteht darin, biologisch wichtige Analyten nachzuweisen, zu bestimmen und die interessierenden Verbindungen zu identifizieren. Ein Beispiel für ein mit MSI und LCMS detektiertes Metabolit wird hier gezeigt. Dieses Metabolit wurde basierend auf der exakten Masse, die mit hochauflösender LCMS erfasst wurde, sowie auf dem MSM-MSS-Spektrum als Häm identifiziert.Diese MSMS-Daten wurden mit den zuvor von Shima und Sato veröffentlichten MSM-S-Spektren verglichen, wobei zwei MSM-S-Spektren übereinstimmten. Daher konnte die Identität des Massen-zu-Ladungs-Verhältnisses von 6 1 6 0,2 basierend auf der Suche in einer genauen Massendatenbank sowie dem Vergleich der MS/MS-Daten mit Literaturdaten zuverlässig als Häm bezeichnet werden. Nachdem Sie dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie man MALDI-Massenspektrometrie-Bildgebung verwendet, um die räumliche Verteilung biologisch relevanter Metabolite nachzuweisen und abzubilden, und zwar mithilfe einer Methode, die auf die Untersuchung kleiner Moleküle in einer Vielzahl von Gewebetypen und Modellsystemen angewendet werden kann.

maldi-mass-spectrometric-imaging-for-investigation-metabolites

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Eine schnelle Art und Weise beschrieben, Einblicke in die Struktur der Polysaccharide in einer extrazellulären Matrix zu gewinnen. Die Methode nutzt die Spezifität von Glykosylhydrolasen und die Empfindlichkeit der Massenspektrometrie ermöglicht winzige Mengen von Materialien analysiert werden. Diese Technik ist anpassungsfähig, um direkt auf das Gewebe selbst verwendet werden.

Oligo Messe Profiling (OLIMP) der extrazellulären Polysacchariden

Eine massenspektrometrische Bildgebungsquelle (MSI), die bei Atmosphärendruck betrieben wird, wurde durch Kopplung von Laserdesorption im mittleren Infrarot und Elektrospray-Nachionisation entwickelt. Als energieabsorbierende Matrix wurde eine exogene Eismatrix verwendet, um die resonante Desorption von gewebebezogenem Material zu erleichtern. Dieses Manuskript enthält ein Schritt-für-Schritt-Protokoll für die Durchführung der IR-MALDESI MSI bei einer Ganzkörper-Neugeborenenmaus.

Ganzkörper-Massenspektrometrie Imaging durch Infrarot-Matrix-assistierte Laser-Desorptions-Elektrospray-Ionisations (IR-MALDESI)

Blatt-Spray-Massenspektrometrie ist eine direkte chemische Analyse-Technik, die minimiert die Probenvorbereitung und beseitigt Chromatographie, so dass für die schnelle Erkennung von kleinen Molekülen von Pflanzengewebe.

Blatt-Spray-Massenspektrometrie: Eine schnelle Ambient Ionisation Technik direkt Metaboliten von Pflanzengewebe bewerten

Diese Methode verwendet massenspektrometrische Bildgebung (MSI), um Stoffwechselprozesse in S. alba-Blättern zu verstehen, wenn sie Xenobiotika ausgesetzt sind. Die Methode ermöglicht die räumliche Lokalisierung von interessierenden Verbindungen und ihren vorhergesagten Metaboliten in spezifischen, intakten Geweben.

Untersuchung des Xenobiotika-Stoffwechsels in Salix alba-Blättern mittels Massenspektrometrie-Bildgebung

Ein Protokoll zur Untersuchung von biologischem Gewebe in hoher räumlicher Auflösung mittels ultrahochfeld-Magnetresonanzmikroskopie (MRM) mit Mikrospulen wird vorgestellt. Für die Charakterisierung der Mikrospulen werden Schritt-für-Schritt-Anleitungen bereitgestellt. Schließlich wird die Optimierung der Bildgebung an Pflanzenwurzeln demonstriert.

MRM Microcoil Performance Calibration and Usage demonstriert auf Medicago-Truncatula-Wurzeln bei 22 T

Das Ziel dieses Protokolls ist es, detaillierte Anleitungen zur Probenvorbereitung bei der Planung von Experimenten mit MALDI MSI zur Maximierung des metabolischen und molekularen Nachweises in biologischen Proben bereitzustellen.

Probenvorbereitung für metabolisches Profiling mittels MALDI-Massenspektrometrie-Bildgebung

In dieser Studie wird eine Reihe von Methoden zur Aufbereitung von DESI-MSI-Proben aus Pflanzen vorgestellt und ein Verfahren der DESI-Montageinstallation, MSI-Datenerfassung und -verarbeitung detailliert beschrieben. Dieses Protokoll kann unter verschiedenen Bedingungen angewendet werden, um räumliche Metabolominformationen in Pflanzen zu erhalten.

Visualisierung von Metaboliten, die im räumlichen Metabolom der Traditionellen Chinesischen Medizin mit DESI-MSI identifiziert wurden

Dieses Protokoll zielte darauf ab, detaillierte Leitlinien für die Vorbereitung von harten Saatgutprobenschnitten mit niedrigem Wassergehalt für die MALDI-IMS-Analyse zu beschreiben, die ursprüngliche Verteilung und Häufigkeit der Analyten beizubehalten und eine qualitativ hochwertige Signal- und räumliche Auflösung bereitzustellen.

Aufbereitung von harten Palmsamen für die matrixgestützte Laserdesorptions-/Ionisations-Imaging-Massenspektrometrie-Analyse

Für die massenspektrometrische Bildgebung (MSI) von Hirnorganoiden wurde eine fortschrittliche Methode entwickelt, die es ermöglicht, die Metabolitenverteilungen innerhalb dieser Modelle abzubilden. Diese Technologie bietet Einblicke in die Stoffwechselwege und Metabolitensignaturen des Gehirns während der frühen Entwicklung und bei Krankheiten und verspricht ein tieferes Verständnis der menschlichen Gehirnfunktion.

Molekulare Bildgebung von Organoiden des menschlichen Gehirns mittels Massenspektrometrie 

Wir zeigen, wie hairy root Composite Pflanzen können verwendet werden, um Pflanzen-Interaktionen und Rhizobium nodulation in der schwer zu verwandeln Arten zu...

Generierung von Composite-Anlagen in Medicago truncatula Für Nodulation Assays verwendet

Erfahren Sie, wie MALDI-Imaging-Massenspektrometrie zur Analyse endogener Metaboliten in Medicago truncatula Wurzelknöllchen eingesetzt wird. Diese Methode liefert wertvolle Einblicke in pflanzliche Stoffwechselprozesse.

MALDI-Imaging-Massenspektrometrie zur Untersuchung von Metaboliten in

Weitere Videos entdecken