Mausmodell für nicht-invasive Bildgebungs zu erfassen und zu überwachen Eierstockkrebs Rezidiv

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, ein intraperitoneales Xenotransplantatmodell für Eierstockkrebs zu etablieren, das das klinische Profil von Patientinnen mit Eierstockkrebs nachahmt. Dies wird durch intrauterine Injektion von mCherry-Fluoreszenz-markierten Eierstockkrebs-Stammzellen in Nacktmäuse erreicht. Anschließend werden die Etablierung der Tumorprogression und das Ansprechen auf die Therapie bestimmt, indem die Fluoreszenz als Surrogat für die Tumorlast gemessen wird.

Dies ermöglicht eine Echtzeitüberwachung des Tumorverlaufs oder des Ansprechens auf die Behandlung, ohne dass die Mäuse geopfert werden müssen. Das Modell, das wir hier zeigen. B rekapituliert das klinische Profil, das bei Patientinnen mit Eierstockkrebs beobachtet wurde, und ermöglicht es uns daher, nicht nur die Biologie der Krankheit zu untersuchen, sondern auch neue Therapien zu identifizieren, insbesondere bei rezidivierendem Eierstockkrebs.

Das Modell ermöglicht es uns, das Fortschreiten des Tumors zu überwachen, um in Echtzeit festzustellen, ob er auf eine Chemotherapie anspricht, und auch um festzustellen, ob die Krankheit erneut auftreten würde, wenn die Chemotherapie abgebrochen wird. Um dieses Verfahren zu beginnen, betäuben Sie eine sieben bis acht Wochen alte, Thymus-Nacktmaus mit 2% Fluor. Überprüfen Sie dann, ob es vollständig betäubt ist, indem Sie seinen Fußballen einklemmen.

Legen Sie dann das Tier auf die rechte Seite darauf, steriles Mullkissen mit dem Kopf vom Experimentator weg. Tragen Sie die Salbe auf beide Augen auf, um Trockenheit während der anschließenden Narkose zu verhindern. Stecken Sie den Kopf des Tieres schnell in ein Nasenkegelsystem, das mit einem Isofluran-Verdampfer verbunden ist.

Desinfizieren Sie die rechte Seite des Bauches mit Alkoholpads, gefolgt von Jod. Legen Sie dann das sterile OP-Abdecktuch mit einer sterilen chirurgischen Schere und Pinzette darüber. Machen Sie einen ein bis zwei Zentimeter großen Hautschnitt im unteren linken Quadranten der Maus.

Heben Sie danach den Muskel an und machen Sie einen Schnitt, um das Bauchfell zu erreichen. Präparieren Sie anschließend den schrägen Muskel, um die Bauchhöhle freizulegen. Lokalisieren Sie dann das linke Gebärmutterhorn mit einer sterilen Hämostatklemme, sowohl die vordere als auch die hintere Seite des Horns.

Platzieren Sie die vordere Klemme direkt unter dem Eileiter und die hintere Klemme direkt über dem Gebärmutterhals. An diesem Punkt haben Sie den zweiten Experimentator. Injizieren Sie die Zellsuspension, indem Sie die Zellen, die die Nadel enthalten, in einem 45-Grad-Winkel senkrecht zum Horn platzieren.

Injizieren Sie dann langsam 50 Mikroliter Zellsuspension in das Lumen des Gebärmutterhorns. Lösen Sie als Nächstes die vordere Klemme, gefolgt von der hinteren Klemme. Setzen Sie danach das Gebärmutterhorn wieder in die Bauchhöhle ein.

Verschließen Sie das Bauchfell mit einer synthetischen, resorbierbaren Naht. Verschließen Sie dann die Haut mit einem Tissue-Kleber. Wenn Sie fertig sind, nehmen Sie die Maus aus dem Nasenkonus und setzen Sie sie wieder in ihren Käfig ein.

Stellen Sie sicher, dass das Tier wach und aktiv ist, bevor Sie es unbeaufsichtigt lassen. Geben Sie Ibuprofen in den ersten 48 Stunden nach der Operation in das Trinkwasser. Öffnen Sie nun die molekulare Bildgebungssoftware und dann die Mars Capture-Software.

Dieses Modul ermöglicht eine koordinierte Steuerung der Mars-Aufnahmeeinstellungen und nutzt gleichzeitig die Erfassungs- und Analysefunktionen der Bildgebungssysteme. Geben Sie als Nächstes die vorgegebenen Erfassungswerte ein. Speichern Sie anschließend die Parameter als einzelne Session-Dateien.

Erstellen Sie dann ein Rotationssequenzprotokoll, indem Sie auf die Schaltfläche "Bearbeitungsprotokolle erstellen" klicken. Wählen Sie im Erfassungsfenster der Systemschnittstelle die zuvor gespeicherte Fluoreszenzsitzungsdatei aus und speichern Sie sie als ersten Schritt. Wählen Sie als Nächstes die entsprechende Röntgensitzungsdatei aus und speichern Sie sie als Schritt zwei. Wenn Schritt eins ausgewählt ist.

Verwenden Sie die Option "Rotationsreihe festlegen" aus dem Einblendmenü "Vor der Bildaufnahme", um den gewünschten Startwinkelbereich und das gewünschte Inkrement festzulegen. Um eine nahtlose Visualisierung von Features zu gewährleisten, umfassen die spezifischen Werte einen Startwinkel von minus 180 Grad, einen Bereich von 375 Grad und eine Inkrementierung von 15 Grad. Speichern Sie das Protokoll und klicken Sie auf die Schaltfläche Fertig, um den Mars zu initialisieren.

Starten Sie dann die Ausrichtung, indem Sie die Vorschauschaltfläche im Erfassungsmenü auswählen, um die Registerkarte Rotator aufzurufen, und verwenden Sie die Fluoreszenzaufnahmeeinstellung, wie sie für die M-Kirschbildgebung angegeben ist. Lassen Sie die Tür während der Vorschau offen, um die Positionierung zu beschleunigen, was auch eine visuelle Überprüfung der Mauspositionierung während des Ausrichtungsvorgangs ermöglicht. Wählen Sie als Nächstes die Option Maus laden und fahren Sie mit der Reihe von Positionierungsmenüs fort.

Stellen Sie sicher, dass sich das Schlauchende des zusammenklappbaren Nasenkonus in der Aussparung des Nasenkonus befindet. Platzieren Sie dann die anästhesierte Maus in Bauchlage mit dem Kopf im Nasenkonus. Beginnen Sie die Kalibrierung in der Null-Grad-Position mit der Bauchseite des Tieres nach unten.

Positionieren Sie das Tier mit den beiden Knöpfen am Rotationssystem so, dass es im Vorschaufenster zentriert erscheint. Wiederholen Sie den Vorgang bei Aufforderung für minus 180, minus 90 plus 90 und plus 180 Grad und klicken Sie auf Fertig. Hier sehen Sie ein Beispiel für einen Film, der aus den aufgenommenen Bildern generiert wurde.

Diese Abbildung zeigt die Korrelation zwischen der intraperitonealen Tumorlast und dem Fluoreszenz-Röntgenüberlagerungsbild. Etwa 32 Tage nach der Injektion von F zwei M Kirsch-Eierstockkrebszellen wurde eine 2D-Bildgebung durchgeführt und die Mäuse wurden geopfert, um das aufgenommene Bild mit der tatsächlichen Tumorlast zu korrelieren. Und hier sind die Rotationsdatensätze zu sehen, die eine Mehrwinkelbildgebung und die Erkennung von Tumoren in der Kontrolle, von Paclitaxel-behandelten und den rezidivierenden Mäusen ermöglichen.

Das Bild einer einzelnen Maus pro Panel wird angezeigt, wenn sie mit dem Mars-System gedreht wird. Beachten Sie, dass selbst bei Kontrollmäusen mit signifikanter Tumorlast die Tumorgröße je nach Winkel, aus dem das Bild aufgenommen wurde, unterschätzt werden kann. Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie in der Lage sein, ein intraperitoneales Ovarialkarzinom-Xenotransplantatmodell auf intrauterinem Weg zu etablieren und mit einem multimodalen Rotationssystem Live-Tierbildgebung durchzuführen.