Großzebrafisch Embryonale Herz Dissection für Transkriptionsanalyse

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, Herzen durch schnelle manuelle Dissektion von lebenden Zebrafischembryonen zu gewinnen, um kardienspezifischen Mr.NA zu erhalten. Dies wird erreicht, indem zuerst viele anästhesierte Embryonen durch eine schmale Pipettenspitze auf und ab pipettiert werden, um gleichzeitig die Herzen aus den embryonalen Körpern zu lösen. Anschließend werden die präparierten Herzen in zwei schnellen Filtrationsschritten von embryonalen Trümmern getrennt. Dann werden die fluoreszierend markierten Herzen manuell von Resten getrennt.

Schließlich wird kardialspezifische RNA aus gesammelten Herzen extrahiert. Letztendlich wird das Herzdissektionsprotokoll verwendet, um ausreichende Mengen an embryonalen Herzen für die Durchführung einer Transkriptomanalyse zu sammeln. Diese Methode wird dazu beitragen, Schlüsselfragen im Bereich der Entwicklung des Silberfischchen-Herzens zu stellen, z. B. welche Transkripte in verschiedenen Entwicklungsstadien im Herzen exprimiert werden, und auch wilde und mutierte Herzexpressionen zu vergleichen. Um Zebrafischembryonen für die Herzextraktion zu erhalten, kreuzen Sie adulte transgene Fische, die ein fluoreszierendes Protein im Herzen exprimieren, wie z. B. transgene EGFP Meile sieben unter dem Stereomikroskop.