Name: Lokalisierung, Identifizierung und Exzision Murine Fettgewebe Depots (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-04T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: Lernen Sie die Lokalisierung und Exzision muriner Fettgewebsdepots bei erwachsenen Mäusen. Diese Methode ermöglicht präzise Isolation mit minimaler Kontamination für histologische und molekulare Analysen.

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Die Autoren haben keine Danksagungen.

HINWEIS: Alle Tierversuche wurden mit Zustimmung des Institutional Animal Care und Verwenden Committee (IACUC) von der University of Cincinnati und in Übereinstimmung mit dem Leitfaden für die Pflege und Verwendung von Labortieren durch die National Institutes of Health (NIH-Veröffentlichung durchgeführt . 85-23, Revised 1996). 1. Euthanize und Sterilisieren der Maus <ol><li> Platzieren Sie die Maus in eine Dropbox gemacht, die einen supratheraputic Dosis von Isofluran und lassen Sie den Effekt zu inhalieren. Sobald die Maus getötet, aus dem Feld zu entfernen. </li><li> Zervikal als ein zweites Mittel der Euthanasie verrücken. </li><li> Sterilisieren der Außenfläche der Maus durch Reinigen des Tieres mit 70% Ethanol. </li></ol> 2. Identifizierung und Isolierung von drei verschiedenen Fettgewebedepots <ol><li> Braunes Fettgewebe (BAT) Isolation: <ol><li> Stellen Sie sicher, das Fell nass vom Alkohol Reinigung in Durchschneiden der epidermale und dermale laye Hilfers. </li><li> Bewegen Sie die Maus in Rückenlage mit dem Rücken gegen den Tisch. </li><li> Besorgen Sie sich die Haut direkt unterhalb der Membran mit einer Pinzette, Aufzug und mit einer Schere einschneiden. </li><li> Schneiden in Querrichtung um den Umfang der Maus, um das Peritoneum aussetzen. </li><li> Zeigen die schmetterlingsförmige BAT Depot von degloving die obere Hälfte der Maus. Die unteren Fortsätzen und Bauch in einer Hand und ziehen Sie die Haut bis zum Kopf. </li><li> Richten Sie die Maus, so dass es anfällig auf dem Tisch positioniert ist. Achten Sie darauf, um die freiliegende Depot mit Haar verunreinigen. </li><li> Saubere chirurgischen Instrumenten und Wechsel zu einem neuen Paar Handschuhe. </li><li> Suchen Sie die Schulterblätter und entsprechende Depot. Entfernen Sie vorsichtig jede oberflächliche weiße Fettgewebe oben auf dem Schmetterling und sezieren den Schmetterling von interskapulären braune Fett. Seien Sie vorsichtig, um den Muskel eng mit der braune Fett assoziiert zu vermeiden. HINWEIS: Die Verwendung eines Dissektionsmikroskop wird zur Entfernung des w empfohlenhite Fettgewebe sowie bei der Trennung von dem braunen Fettgewebe von den Schulterblättern. </li><li> Entfernen Sie Fettdepots und Transfer zu einem 2 ml Mikrozentrifugenröhrchen. </li><li> Wenn RNA oder Protein extrahiert werden soll, gefrier des Gewebes durch Eintauchen in flüssigem Stickstoff und bei -80 ° C. Frieren Sie die Probe auf einmal, um den Abbau zu verhindern. Wenn die Kultivierung, decken Sie die Gewebe in DMEF-12 und auf Eis gesetzt, bis alle Proben werden für die Kultur (ergänzende Informationen) gesammelt. </li></ol></li><li> Isolierung von Unterhautfettgewebe (SQ), einem weißen Fettgewebe Depot (WAT): <ol><li> Setzen Sie auf ein frisches Paar Handschuhe, um nicht kreuzkontaminieren zwischen Fettdepots. </li><li> Zeigen die Leisten, dreieckig SQ Depots de Behandschuhung die untere Hälfte der Maus. Halten Sie die oberen Fortsätzen und Thorax in einer Hand und ziehen Sie die Haut nach unten in Richtung der Füße mit der anderen Hand. </li><li> Richten Sie die Maus in Rückenlage, während man aufpassen, nicht, um den belichteten Depot mit Haar verunreinigen. </li><li> Saubere surgical Instrumente und Wechsel zu einem neuen Paar Handschuhe. </li><li> Sorgfältig sezieren die Dreiecke der SQ Fett. Achten Sie darauf, die Probe mit Muskel verschmutzen, benachbarte Fett, Milchdrüsen oder indem alle Gefäße und verunreinigen die Probe mit Blut. HINWEIS: Die Verwendung eines Dissektionsmikroskop empfiehlt sich, wenn die Grenzen sind nicht klar definiert. </li><li> Entfernen Sie Fettdepots und Transfer zum 2 ml Mikrozentrifugenröhrchen. </li><li> Wenn RNA oder Protein extrahiert werden soll, gefrier des Gewebes durch Eintauchen in flüssigem Stickstoff und bei -80 ° C. Frieren Sie die Probe auf einmal, um den Abbau zu verhindern. </li><li> Zur Färbung, fix oder in OCT eingebettet werden. Wenn die Kultivierung, decken Sie die Gewebe in DMEF-12 und auf Eis gesetzt, bis alle Proben werden für die Kultur (ergänzende Informationen) gesammelt. </li></ol></li><li> Isolierung von Keimdrüsenfett eine viszerale Fettgewebe (VAT) und weißen Fettgewebe (WAT) Depot: <ol><li> Setzen Sie auf ein frisches Paar Handschuhe, um nicht kreuzkontaminieren zwischen Fettdepots. </li><li> Mit Scissors, schneiden Sie das Bauchfell in Querrichtung, direkt unterhalb des Zwerchfells. Schneiden Sie das Bauchfell von der Membran auf den Mastdarm Mitte koronal Bauchorgane aussetzen. </li><li> Suchen Sie die Hoden oder Eierstöcke und identifizieren die angebracht weißen Fettgewebe, wie die Nebenhoden Fettgewebe bei Männern oder Gonaden Fettgewebe bei Frauen bekannt. </li><li> Saubere chirurgischen Instrumenten und Wechsel zu einem neuen Paar Handschuhe </li><li> Sorgfältig sezieren sowohl Nebenhodenfettdepots aus dem Hoden, Nebenhoden und Samenleiter. Oder wenn weiblich, sorgfältig sezieren beide Gonaden Fettpolster aus den Eierstöcken. </li><li> Entfernen Sie Fettdepots und sie auf 2 ml Mikrozentrifugenröhrchen. </li><li> Wenn RNA oder Protein extrahiert werden soll, gefrier des Gewebes durch Eintauchen in flüssigem Stickstoff und bei -80 ° C. Frieren Sie die Probe auf einmal, um den Abbau zu verhindern. </li><li> Zur Färbung, fix oder in OCT eingebettet werden. Wenn die Kultivierung, decken Sie die Gewebe in DMEF-12 und auf Eis gesetzt, bis alle Proben werden für die Kultur (ergänzende Informationen) gesammelt. </li&gt; </ol></li></ol> 3. Isolierung Perivaskuläre Fettgewebe (PVAt) <ol><li> Die Isolierung des Herzens: <ol><li> Legen Sie die Maus in Rückenlage mit oberen und unteren Fortsätze nach außen erweitert. </li><li> Sichere Anhängsel mit chirurgischen Band. </li><li> Nach dem Positionieren der Maus wie oben aufgeführt, zu schaffen Spannung durch Anheben des Schwertfortsatz mit einer Pinzette. Horizontal geschnitten durch die Membran, Aussetzen der untere Teil der Brusthöhle. </li><li> Gute Spannungsstabilität, durch Anheben des Schwertfortsatz, schneiden durch den Brustkorb superior in Richtung des Kopfes, nur an der Seite des Brustbeins. </li><li> Nehmen Sie den Brustkorb nur schlechter als die Schlüsselbein und schnitt entlang der unteren Länge des Schlüsselbeins heraus in Richtung der Achselhöhle in beide Richtungen. Die Brusthöhle und sein Inhalt (Herz, Lunge, etc.) sollte nun deutlich sichtbar sein. </li><li> Reinigen Sie die Brusthöhle von fremden Blut und Flüssigkeit durch den Gebrauch steriler gauze um die Flüssigkeit zu absorbieren. Wenn das Sammeln Organen oder Gefäßen achten Sie darauf, profuse (zusätzliche Informationen). </li><li> Sobald der Bereich des Fluid gelöscht, schneiden die Bronchien und Anbringen Gefäßen, um die Lungen zu entfernen, so dass eine bessere Belichtung des Herzens. </li></ol></li><li> Lokalisierung und Exzision Aortic Perivaskuläre Fettgewebe (PVAt): <ol><li> Entfernen Sie die folgenden Organe besser zu identifizieren, die dem unteren Bereich der Hauptschlagader: Leber, Magen, Milz, Pankreas, Darm und Dickdarm. </li><li> Starten Sie zunächst mit der Identifizierung des Magens und der Speiseröhre. Schneiden Sie die Speiseröhre in den Magen-und Speiseröhrenkrebs Kreuzung, um den Magen aus dem Körper zu befreien. </li><li> Als nächstes identifiziert den Darm und die umliegende Gekröse. Schneiden Sie oberflächlich durch Gekröse, da es sehr eng mit dem Nieren Teil der Aorta liegt, dann &quot;führen Sie den Darm.&quot; </li><li> Schneiden Sie den Doppelpunkt zu befreien so nah an den Mastdarm wie möglich. Somit befreit den Magen, Darm und Dickdarm von der Maus. </li><li> Rebewegen Sie den Magen, Darm, Dickdarm, Bauchspeicheldrüse und Milz durch Schneiden durch die Befestigungs Gekröse und Gefäße. Die Bauchspeicheldrüse und Milz sollte mit dem Magen, Darm und Dickdarm Tarif. </li><li> Entfernen Sie die Leber durch Schneiden durch die Lebervenen und Anbringen Gekröse, entfernen Sie alle Lappen. </li><li> Schneiden Sie die viszerale Fettschicht und umgeben die Nieren. Lassen Sie die Nieren in die Aorta in vivo angebracht ist, als geografische Marker für verschiedene Segmente der Aorta zu dienen. </li><li> Spülen Sie den Bereich mit sterilen 1x PBS und entfernen Sie alle Flüssigkeit durch Absorption mit steriler Gaze. </li><li> Mit Mikro-Schere und Mikro-Pinzette, trennen Sie die Hauptschlagader von seinem Rücken-an der Wirbelsäule und ihrer ventralen Befestigung an der Speiseröhre. </li><li> Isolieren Sie die Aorta, indem Sie und Lösen der Aorta die Länge der absteigenden Aorta vom Ursprung im Herzen zur Bifurkation in der Leistengegend. </li><li> Identifizieren und zu isolieren, die Schlüsselbeingefäßen. Trennen Sie diese Gerätevom Hals bis der Aortenwurzel, besser setzen die Aorten-Kreuzung und Wurzel im Herzen. </li><li> Entfernen Sie den Thymus dann schneiden die Truncus brachiocephalicus, die linke Halsschlagader und der linken Schlüsselbeinarterie, die eine Bewegung des Herzens. </li><li> Mit der Unterstützung von einem Dissektionsmikroskop, zeigen Sie die perivaskulären Fettgewebe (PVAt) Schicht rund um die Aorta. </li><li> Unter besonderer Berücksichtigung der nicht kneifen oder drücken Sie die PVAt, ziehen Sie den PVAt Weg aus der Aorta mit Mikro-Pinzette. Geschnitten sanft die Befestigung des PVAt zur Aorta mit Mikroscheren ab thorakalen Bereich genau oberhalb denen die Membran angeordnet ist. HINWEIS: Ein Dissektionsmikroskop empfohlen. </li><li> Wiederholen Sie diesen Vorgang über die gesamte Länge der Aorta, und endet bei der infrarenalen Region, die sich nur überlegen die iliakalen Bifurkation der Aorta Gefäß. </li><li> Wenn Aortenbogen PVAt gewünscht wird, verwendet die gleiche Methode, um die PVAt vom wenigen c entfernenurvature des Bogens. </li><li> Platzieren PVAt Proben in 2 ml Mikrozentrifugenrohr (en). </li><li> Wenn RNA oder Protein extrahiert werden soll, gefrier des Gewebes durch Eintauchen in flüssigem Stickstoff und bei -80 ° C. Frieren Sie die Probe auf einmal, um den Abbau zu verhindern. Wenn die Kultivierung, decken Sie die Gewebe in DMEF-12 und auf Eis gesetzt, bis alle Proben werden für die Kultur (ergänzende Informationen) gesammelt. HINWEIS: Weitere Fettgewebe Depots bei Interesse an einer umfassenden Fettgewebe Depotanalyse berücksichtigen: retroperitoneal, mesenterialen, omentalis, Herzbeutel und Kniekehle. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Ogden, C. L., Carroll, M. D., Kit, B. K., Flegal, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+obesity+in+the+United+States%2C+2009-2010%5BTitle%5D)+AND+%22NCHS+Data+Brief%22%5BJournal%5D)">Prevalence of obesity in the United States, 2009-2010.</a> NCHS Data Brief. 82, 1-8 (2012).</li>
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</ol>

Die Autoren erklären, dass sie keine konkurrierenden finanziellen Interessen oder sonstige Interessenkonflikte haben.

Übergewicht kann zu einer großen Vielzahl von Begleiterkrankungen und dem vollen Verständnis der Rolle, die adipöse spielt ist nicht vollständig geklärt führen; daher die weitere Forschung auf dem Gebiet der adipösen notwendig. Tiermodelle, insbesondere murine Modelle sind ideal für Vorlaufforschung in der Progression von Krankheiten und das Testen von potentiellen pharmazeutischen Behandlungen. Bei der Verwendung dieser Modelle ist eine genaue Trennung und Entfernung von Fettgewebedepots ein äußerst wichtiges und notwe...

Adipöse einen bemerkenswerten Auftritt im Scheinwerferlicht der Medien, durch dramatische Zunahme Adipositas ist in den letzten Jahrzehnten des 20. Jahrhunderts. Übergewicht wirkt sich auf derzeit mehr als ein Drittel der Erwachsenen und 17% der Kinder und Jugendlichen in den Vereinigten Staaten (US) 1. Quer durch alle ethnischen Gruppen hat statistische Untersuchungen rund um die Adipositas-Epidemie gezeigt, dass nicht-hispanischen Schwarzen haben die höchste altersbereinigte Rate von Übergewicht (49,5%) im Vergleich zu Mexico-Amerikaner (40,4%) aller Hispanics (39,1%), und nicht- hispanischen Weißen (34,3%) 2. Die wirtschaftlichen Auswirkungen von Übergewicht ist auch ein wachsendes Interesse für das Gesundheitssystem. Im Jahr 2012 wurde geschätzt, dass die jährlichen medizinischen Kosten für die Betreuung von Fettleibigkeit in den USA im Jahr 2005 190.200.000.000 $, fast 21% der gesamten medizinischen Ausgaben Budget. Leider wurde die Fettleibigkeit bei Kindern geschätzt 14 Milliarden Dollar im direkten medizinischen Kosten allein verantwortlich zu sein. Statistisch gesehen, war es, dass die durchschnittliche medizinische Kosten ermitteltPersonen mit Übergewicht war 2741 $ pro Jahr höher als die ohne diese Morbidität 3-5. Übergewicht ist ein wichtiger Risikofaktor für eine Vielzahl von Erkrankungen wie: Typ 2-Diabetes, Fettstoffwechselstörungen, Herz-Kreislauf-Erkrankungen, Krebs, Muskel-Skelett-Erkrankungen und chronischen Entzündungen. Adipositas ist tief mit der Pathogenese von metabolischen Syndrom und anderen chronischen Erkrankungen 6-8 gebunden. Mit solch drastische und negative Zusammenhänge zwischen Adipositas und anderen Begleiterkrankungen, hat die wissenschaftliche Forschung konzentrierte sich die Aufmerksamkeit auf die aktuelle Epidemie und die vielfältigen und eine entscheidende Rolle gespielt von Fettgewebe besser zu verstehen. Historisch wurde Fettgewebe als belanglos und wurde nur als eine einfache Befüllung Gewebe angesehen. Derzeit Fettgewebe wurde gezeigt, dass viele wichtige Rollen in der Körper die Funktion spielen: Stoffwechsel, Hormonhaushalt, Entzündungen, Schutz und Isolierung 9. Fettgewebe ist in erster Linie ausAdipocyten enthält aber auch Perizyten, Endothelzellen, Monozyten, Makrophagen und pluripotenten Stammzellen 8. Fettgewebe wird durch den Körper in unterschiedlichen Depots verteilt. Die Hauptdepots können subdermal gefunden werden, subkutan, intramuskulär und viscerally 10. Adipose Depots gezeigt worden, Depot spezifische Stoffprofile, die eine Depot spezifische Anfälligkeit für Fettleibigkeit gezeigt und verwandten Störungen 8 haben. Traditionell wurde Fettgewebe in zwei Haupttypen klassifiziert: weißes Fettgewebe (WAT) und braunem Fettgewebe (BAT); obwohl neuere Literatur zeigt die Präsenz einer dritten Gruppe getauft brite oder beige Fettgewebe 11. Fettgewebe ist gezeigt worden, um verschiedene Farben zu Morphologien, die Stoffwechselfunktionen, biochemischen Eigenschaften und die genetische Expressionsmuster 10 aufweisen. Adipozyten in WAT ein einziges, großes Fetttröpfchen und variable Mengen von Mitochondrien. WATdominant im subkutanen und viszeralen Ortschaften des Körpers gefunden. WAT wirkt in erster Linie als Ort der Energiespeicherung und Organprotektion. Adipozyten in BAT eine multilokuläre Morphologie und reichlich Mitochondrien. BAT ist in erster Linie in den Hals und großen Blutgefäße des Thorax, sowie die Schulterblätter 12 angeordnet. BAT vor allem Funktionen in energie aufwendet Verhaltensweisen, die Thermogenese 7 regulieren. Brite oder beige Fettgewebe wurde gezeigt, dass eine analoge Morphologie und Expression BAT teilen, aber hat sich herausgestellt, von weißen Fettzellen 11 entstanden ist. Die beschriebene Operationsmethode in diesem Manuskript bietet Forschern mit der Fähigkeit, verschiedene Effekte, dass Faktoren wie zu analysieren: Umwelt, Pharmazie und Genetik, haben am Fettgewebe; sowie die vorteilhafte oder nachteilige Rolle spielt in adipose Erkrankungen und allgemeine Gesundheit. Auch bietet eine Möglichkeit zur Identifizierung und Isolierung verschiedener Arten von Fettgewebeermöglichen ein besseres Verständnis der biochemischen Zusammenhänge und Unterschiede zwischen Depots. Dies kann bei der Bestimmung der Beziehung zwischen der Lage, die Funktion und Arten von Fett im Körper zu unterstützen. Das beschriebene Verfahren erreicht dies, indem sie die Einrichtung zum Brutto Visualisierung, Genexpressionsanalyse, Analyse der Proteinexpression, die histologische Untersuchung und Isolierung von primären Zelllinien für die in vitro-Studien. Momentan gibt es viele Artikel, die einen Einblick in die metabolischen Verhalten verschiedener adipose Depots sowie ihre anatomischen Orten bereitzustellen; aber nicht bieten eine gründliche Methode, wie man gezielt zu lokalisieren, identifizieren und isolieren diese Depots. Dieses chirurgische Verfahren liefert eine genaue Technik, die für die Isolierung von mehreren Depots mit einer minimalen Menge an Präparation und Verunreinigungen im Vergleich zu anderen Methoden zur Isolat von einem oder zwei Depots 13-14 gestaltet ermöglicht. Das Ziel des Protokolls ist es,ein präzises Verfahren zur Identifizierung und Isolierung von verschiedenen Arten von Fettdepots von mehreren anatomischen Stellen.

<table><tbody><tr><td>Isofluran</td><td>Med-Vet International</td><td>#RXISO-250</td><td></td></tr><tr><td>70% Ethanol</td><td>Fisher</td><td>07-678-001</td><td></td></tr><tr><td>DMEF-12</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D-6421</td><td>Vor dem Anlegen des Taschentuchs im Wasserbad erwärmen.</td></tr><tr><td>2 ml Mikrozentrifugenröhrchen</td><td>Midsci</td><td>MCT-200-C-S</td><td></td></tr><tr><td>Phosphat gepufferte Kochsalzlösung</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P5368-10PAK</td><td></td></tr></tbody></table>

lokalisierung, identifizierung und exzision murine fettgewebe depots

Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots

Fettleibigkeit hat in den letzten Jahrzehnten dramatisch zugenommen und betrifft über ein Drittel der erwachsenen US-Bevölkerung. Die wirtschaftlichen Auswirkungen von Fettleibigkeit erreichten im Jahr 2005 eine schwindelerregende Summe von 190,2 Milliarden US-Dollar allein an direkten medizinischen Kosten. Adipositas ist ein wesentlicher Risikofaktor für eine Vielzahl von Krankheiten. Historisch gesehen war wenig über Fett und seine wichtigsten und wesentlichen Funktionen im Körper bekannt. Braunes und weißes Fett sind die beiden Hauptarten von Fettgewebe, aber die aktuelle Literatur hat eine neue Art von Fett identifiziert, das als brites oder beiges Fett bezeichnet wird. Die Forschung hat gezeigt, dass Fettdepots spezifische Stoffwechselprofile aufweisen und bestimmte Depots eine Neigung zu Fettleibigkeit und anderen verwandten Erkrankungen ermöglichen. Das Ziel dieses Protokolls ist es, Forschern die Möglichkeit zu geben, Fettdepots zu identifizieren und zu entfernen, die die Analyse verschiedener faktorieller Effekte auf Fettgewebe ermöglichen. sowie die vorteilhafte oder nachteilige Rolle, die Fett für die Krankheit und die allgemeine Gesundheit spielt. Die Isolierung und Exzision von Fettdepots ermöglicht es den Untersuchern, sowohl grobe morphologische Veränderungen als auch histologische Veränderungen zu betrachten. Das isolierte Fett kann auch für molekulare Studien zur Bewertung von transkriptionellen und translationalen Veränderungen oder für In-vitro-Experimente zur Entdeckung von interessanten Zielen und Wirkmechanismen verwendet werden. Diese Technik ist anderen veröffentlichten Techniken überlegen, da das Design die Isolierung mehrerer Depots mit Einfachheit und minimaler Kontamination ermöglicht.

Identifizierung und Lokalisierung von Leisten subkutane Fettgewebe, interskapulären braunen Fettgewebe, viszerale Fettgewebe Nebenhoden (Abbildung 1) sowie den Aortenbogen perivaskulären Fettgewebe, thorakalen Aorta Fettgewebe, Neben Aorta Fettgewebe und der infrarenalen Fettgewebe (Abbildung 2) wurde erfolgreich mit Hilfe erreicht die beschriebene Operationsmethode. Die histologische Untersuchung und Differenzierung zwischen BAT und WAT Proben wurden positiv mit Hämatoxylin und Eosin (...

Durch die drastische und negative Zusammenhang zwischen Fettleibigkeit und andere Begleiterkrankungen, Forschung über die Rolle Fettgewebe spielt in Krankheit und die allgemeine Gesundheit gerechtfertigt ist. Wir stellen ein Protokoll für die Isolierung und Entfernung von Fettgewebe Depots ermöglicht die Untersuchung von Fettgewebe unter Verwendung von in situ und in vitro-Verfahren.

Lokalisierung, Identifizierung und Exzision Murine Fettgewebe Depots

Obesity has increased dramatically in the last few decades and affects over one third of the adult US population. The economic effect of obesity in 2005 ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, die Identifizierung und Exzision von Fettablagerungen für die Analyse verschiedener faktorieller Effekte auf und durch Fettgewebe zu demonstrieren. Dies wird erreicht, indem zunächst die inneren Organe und Fettdepots einer erwachsenen Maus freigelegt werden. Im zweiten Schritt werden die Organe und das überflüssige Gewebe entnommen, um die Depots besser freizulegen und so die Depots an den entsprechenden Standorten identifizieren zu können.Im letzten Schritt wird dann das Fettgewebe mit besonderer Sorgfalt entnommen, um eine Kontamination zu vermeiden. Letztendlich wird durch die Isolierung und Exzision dieser Ablagerungen Gewebe für die histologische Analyse, die Proteinexpression, die Enzymaktivität und die Genexpressionsanalyse sowie für In-vitro-Studien bereitgestellt. Der Hauptvorteil dieses speziellen Protokolls gegenüber bestehenden Methoden besteht darin, dass es eine Isolierung mehrerer Depots mit minimaler Dissektion sowie minimaler Kontamination ermöglicht.Dieses Verfahren kann also helfen, Fragen rund um das Thema Fettleibigkeit zu beantworten. Zum Beispiel die schädlichen oder sogar positiven Auswirkungen von Fettgewebe auf menschliche Krankheiten. Um braunes Fettgewebe zu isolieren, beginnen Sie damit, eine mit Ethanol gereinigte, euthanasierte erwachsene Maus in Rückenlage mit dem Rücken gegen den Tisch zu legen.Heben Sie dann die Haut mit einer Pinzette direkt unter dem Zwerchfell an und schneiden Sie die Haut mit einer Schere ein. Schneiden Sie quer um den Umfang der Maus, um das Bauchfell freizulegen. Halten Sie dann die unteren Gliedmaßen und den Bauch in einer Hand und ziehen Sie mit der anderen Hand die Haut in Richtung Kopf, um die obere Hälfte der Maus zu enthandschuhen, wodurch das schmetterlingsförmige braune Fettdepot oder die Fledermaus zum Vorschein kommt.Lokalisiere als Nächstes das Scape und das entsprechende Fledermausdepot. Verwenden Sie dann ein Präpariermikroskop, um vorsichtig oberflächliches weißes Fettgewebe auf dem Schmetterling zu entfernen, und präparieren Sie das interscapulare braune Fett, wobei Sie darauf achten, damit verbundene Muskeln zu vermeiden. Um das subkutane oder subq-Fettgewebe zu isolieren, halten Sie die oberen Gliedmaßen und den Thorax in einer Hand und ziehen Sie mit der anderen Hand die Haut in Richtung der Füße nach unten, um die untere Hälfte der Maus zu enthandschuhen und die dreieckigen leistenförmigen subq-Ablagerungen freizulegen.Bringen Sie dann die Maus wieder in die Rückenlage und zerlegen Sie vorsichtig die Dreiecke aus subq-Fett, um das Gonadenfett aus der Bauchhöhle zu isolieren. Schneide das Bauchfell mit einer Schere quer direkt unter dem Zwerchfell. Schneiden Sie dann das Bauchfell vom Zwerchfell bis zum Rektum, in der Mitte koronal, um die Bauchorgane freizulegen, und präparieren Sie vorsichtig beide epidermalen Fettdepots von den Hoden epi und Vasa deia.Um das perivaskuläre Fettgewebe zu isolieren, halten Sie das Tier in Rückenlage und strecken Sie die oberen und unteren Gliedmaßen nach außen. Heben Sie als Nächstes den Xiphoid-Prozess mit einer Pinzette an, um eine Spannung über die Oberseite des Körpers zu erzeugen, und schneiden Sie horizontal durch das Zwerchfell, wodurch der untere Teil der Brusthöhle freigelegt wird. Schneiden Sie durch den Brustkorb superior in Richtung Kopf bis zur Seite des Brustbeins und nehmen Sie dann den Brustkorb knapp unterhalb des Schlüsselbeins auf.Schneiden Sie entlang der unteren Länge des Schlüsselbeins in Richtung Achselhöhle in beide Richtungen. Die Brusthöhle und ihr Inhalt sollten nun deutlich sichtbar sein. Sobald der Bereich von Flüssigkeit befreit ist, schneiden Sie die Bronchien und die daran befestigten Gefäße ab, um die Lunge zu entfernen und das Herz freizulegen.Nachdem Sie den Magen und die Speiseröhre identifiziert haben, schneiden Sie die Speiseröhre am gastroösophagealen Übergang durch, um den Magen zu befreien. Identifizieren Sie als Nächstes den Darm und das umgebende Mesenterium. Schneiden Sie oberflächlich durch das Mesenterium und schneiden Sie dann den Dickdarm so nah wie möglich am Rektum, um Magen, Darm, Dickdarm, Bauchspeicheldrüse und Milz zu befreien.Wenn die Organe entfernt wurden, durchtrennen Sie die Lebervenen und das Verbindungsmesenterium und entfernen Sie alle Leberlappen. Schneiden Sie die viszerale Schicht und das Fett, das die Nieren umgibt, weg und lassen Sie die Nieren in vivo an der Aorta befestigt, um als geografische Marker für die verschiedenen Segmente der Aorta zu dienen. Wenn der Bereich um die Nieren herum frei ist, verwenden Sie eine Mikroschere und eine Mikrozange, um die Aorta von ihrem dorsalen Ansatz an der Wirbelsäule und ihrem ventralen Ansatz an der Speiseröhre zu trennen.Im Thorax verfolgen und lösen Sie die Aorta von ihrem Ursprung im Herzen bis zur Bifurkation im Beckenbereich. Um das Aortenfettgewebe zu isolieren, können an dieser Stelle die Schlüsselbeingefäße identifiziert werden. Isolieren Sie diese Gefäße vom Hals bis zur Aortenwurzel, um den Aortenübergang und die Wurzel im Herzen besser freizulegen.Entfernen Sie dann die Thymusdrüse und durchtrennen Sie die brachiozephalie, die linke Halsschlagader und die linke Arteria subclavia, um die Bewegung des Herzens zu ermöglichen. Verwenden Sie abschließend ein Präpariermikroskop, um das perivaskuläre Fettgewebe oder die P VVA T-Schicht, die die Aorta umgibt, zu betrachten. Verwenden Sie dann eine Mikrozange, um das Gewebe vorsichtig von der Aorta wegzuziehen, und eine Mikroschere, um den Ansatz des PVAT an der Aorta vorsichtig zu durchtrennen, beginnend im Brustbereich, knapp oberhalb der Stelle, an der sich das Zwerchfell befindet.Verwenden Sie dann eine Mikrozange, um das Gewebe vorsichtig von der Aorta wegzuziehen, und eine Mikroschere, um den Ansatz des PVAT an der Aorta vorsichtig zu durchtrennen, beginnend im Brustbereich, der knapp über der Stelle liegt, an der sich das Zwerchfell befindet. Wiederholen Sie diesen Vorgang über die gesamte Länge der Aorta und enden Sie in der infrarenalen Aortenregion, die sich knapp oberhalb der Beckenbifurkation des Aortengefäßes und unterhalb der Nierenäste befindet. Und die Proben können durch histologische Analyse unterschieden werden, wobei die primären Zelllinien der subkutanen Adipozyten und der perivaskulären Zelllinien mit h und e gefärbt werden.Adipozyten können dann kultiviert und von Präadipozyten zu Adipozyten für die Microarray-Analyse differenziert werden. In diesen repräsentativen Bildern wurde beispielsweise die Umwandlung von kultivierten Präadipozyten in Adipozyten mit ölroten O-färbenden Adipozyten bestätigt, die mit dieser Methode isoliert, kultiviert und differenziert wurden und für weitere in vitro Analysen verwendet werden können. In diesem repräsentativen Experiment wurde beobachtet, dass die enzymatische Aktivität von MM P zwei bei isolierten perivaskulären Adipozyten als Reaktion auf eine experimentelle Behandlung im Vergleich zu unbehandelten Kontrollen abnahm.Wenn Sie dieses Verfahren versuchen, ist es wichtig, daran zu denken, Ihre Handschuhe zu wechseln und Ihre Instrumente häufig zu reinigen, um die Kontamination zu minimieren. Nachdem diese Gewebe entnommen wurden, können eine Vielzahl von Eingriffen an ihnen durchgeführt werden. Zum Beispiel Zellkultur, histologische Analysen, Proteinmessungen und sogar Genexpression.Und dann können diese Ergebnisse verwendet werden, um die Beziehung und die Ähnlichkeiten und Unterschiede zwischen den verschiedenen Depots zu verstehen.

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Medizin

In diesem Video demonstrieren wir das chirurgische Verfahren zur Isolierung des subkutanen weißen Fettgewebes und des interscapularen braunen Fettgewebes einer neugeborenen Maus.

Entnahme von weißem und braunem Fettdepot von Mäusewelpen: Ein chirurgischer Eingriff zur Entnahme von weißem Fettgewebe und braunem Fettgewebe von Mäusewelpen

Fettgewebe (AT) kann die Homöostase des ganzen Körpers beeinflussen, daher ist es wichtig, die molekularen Mechanismen der Adipozytendifferenzierung und -funktion zu verstehen. Wir stellen ein Protokoll zur Verfügung, um neue Einblicke in diese Prozesse zu gewinnen, indem wir die Homöostase, die Differenzierung und die Hypoxie-Exposition der Adipozyten als Modell für die induzierte Apoptose der Adipozyten analysieren.

Mechanismus der Regulierung der Adipocyte Zahlen in adulten Organismen durch Differenzierung und Apoptosis Homöostase

Wir stellen die Techniken vor, die zur Isolierung der stromalen vaskulären Fraktion (SVF) aus inguinalen (subkutanen) und perigonadalen (viszeralen) Fettgewebsdepots der Maus erforderlich sind, um ihre Genexpression und kollagenolytische Aktivität zu beurteilen. Diese Methode umfasst die Anreicherung von Sca1-Stammzellen (ASCs) mithohem Fettgehalt durch immunomagnetische Zelltrennung.

Immunomagnetische Trennung von Fett Depot-spezifische Sca1<sup&gt; Hoch</sup&gt; Fettgewebe gewonnene Stammzellen (ASC)

Adipozyten gibt es in diskreten Depots und haben unterschiedliche Rollen in ihren einzigartigen Mikroumgebungen. Da regionale Unterschiede in Adipozytencharakter und Funktion aufgedeckt werden, ist eine standardisierte Identifizierung und Isolierung von Depots entscheidend für die Weiterentwicklung des Feldes. Hierin stellen wir ein detailliertes Protokoll zur Exzision verschiedener Mausfettdepots vor.

Identifizierung und Zerlegung von diversen Maus-Adipose-Depots

Das Ziel dieses Protokolls ist es, fluoreszenzmarkierte Liposomen zu synthetisieren und die Durchflusszytometrie zu verwenden, um die In-vivo-Lokalisation von Liposomen auf zellulärer Ebene zu identifizieren.

Vorbereitung, Verabreichung und Bewertung der in vivo gewebespezifischen zellulären Aufnahme von fluoreszierenden farbstoffmarkierten Liposomen

Dieses Protokoll beschreibt den technischen Ansatz zur Isolierung von adipogenen und fibro-inflammatorischen Stromazell-Subpopulationen aus murinen intraabdominalen Depots aus weißem Fettgewebe (WAT) durch fluoreszenzaktivierte Zellsortierung oder immunomagnetische Kügelchentrennung.

Isolierung von adipogenen und fibro-inflammatorischen Stromazell-Subpopulationen aus murinen intraabdominalen Fettdepots

Dieses Protokoll beschreibt eine Methode zur Dissektion von Maus-Fettdepots und zur Isolierung und Verdauung entsprechender Arterien, um die Endothelzellpopulation freizusetzen und dann zu identifizieren. Frisch isolierte Zellen, die in nachgeschalteten Anwendungen eingesetzt werden, werden das Verständnis der vaskulären Zellbiologie und der Mechanismen vaskulärer Dysfunktion voranbringen.

Isolierung und Identifizierung vaskulärer Endothelzellen aus unterschiedlichen Fettdepots für Downstream-Anwendungen

Dieses Protokoll beschreibt die halbautomatische Isolierung der stromalen vaskulären Fraktion (SVF) aus murinem Fettgewebe, um Präadipozyten zu erhalten und eine Adipozytendifferenzierung in vitro zu erreichen. Die Verwendung eines Gewebedissoziators für den Kollagenaseverdau reduziert die experimentelle Variation und erhöht die Reproduzierbarkeit.

Halbautomatische Isolierung der stromalen vaskulären Fraktion aus murinem weißem Fettgewebe mit Hilfe eines Gewebedissoziators

Hier bieten wir ein praktisches Verfahren zur Präparierung und Durchführung histologischer und Genexpressionsanalysen von murinem supraklavikulärem braunem Fettgewebe.

Dissektion, histologische Verarbeitung und Genexpressionsanalyse von murinem supraklavikulärem braunem Fettgewebe

Die Größe und Zerbrechlichkeit reifer Adipozyten haben die Techniken und Werkzeuge, die für ihre Untersuchung und Isolierung zur Verfügung stehen, eingeschränkt. Hier wird ein Protokoll für die Isolierung reifer muriner Adipozyten beschrieben, das leicht an verschiedene Fettdepots und Mausdiäten angepasst werden kann.

Isolierung und Kultivierung von primären murinen Adipozyten aus mageren und adipösen Mäusen

Lernen Sie die Lokalisierung und Exzision muriner Fettgewebsdepots bei erwachsenen Mäusen. Diese Methode ermöglicht präzise Isolation mit minimaler Kontamination für histologische und molekulare Analysen.

Lokalisierung, Identifizierung und Exzision Murine Fettgewebe Depots

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