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DOI: 10.3791/52215-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This protocol outlines the isolation of primary myofibroblasts from murine and human esophagus. The cultured cells exhibit a myofibroblast phenotype, characterized by spindle-shaped morphology and specific marker expression.
Wir präsentieren ein Protokoll zur Erzeugung von Primärkulturen von murinen und humanen ösophagealen Stromazellen mit einem Myofibroblasten-Phänotyp. Kultivierte Zellen haben eine spindelförmige Morphologie, exprimieren α-SMA und Vimentin und es fehlen epitheliale, hämatopoetische und endotheliale Zelloberflächenmarker. Charakterisierte Stromazellen können in funktionellen Studien zu epithelial-stromalen Wechselwirkungen verwendet werden.
Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, primäre Myofibroblasten aus der Speiseröhre von Maus und Mensch zu isolieren. Dies wird erreicht, indem zunächst die gesamte Speiseröhre der Spender-Neugeborenenmaus mit menschlichem Gewebe entnommen wird. Die Schleimhaut wird von der Muscularis propria getrennt.
Der zweite Schritt besteht darin, das Tuch zu zerkleinern und mehrmals in HBSS zu waschen. Als nächstes wird das Gewebe mit Kollagenase-Diss verdaut und weiter zerkleinert, wobei die mesenchymalen Zellen zusammen mit dem angehängten Epithel freigesetzt werden. Die heterogene Zellpopulation wird dann in Myofibroblastenmedien kultiviert, in denen Myofibroblasten haften, während Epithelzellen nicht überleben und weggespült werden.
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