10. Februar 2015
Wir beschreiben eine chirurgische Technik, die eine Drahtverletzung in der Oberschenkelarterie von Mäusen hervorruft, um eine neointimale Hyperplasie zu induzieren, die als Modelltestsystem für die perivaskuläre Verabreichung von therapeutischen Wirkstoffen zur Hemmung der Restenose dient.
Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, das Endothel der Oberschenkelarterie zu verletzen und zu entblößen, entweder während der Muskelast der Oberschenkelarterie gebunden wird oder der normale Fluss zu beiden Gefäßen wiederhergestellt wird. Dies wird erreicht, indem zunächst die Oberschenkelarterie und der Muskelast durch stumpfe Dissektion und Seidennähte isoliert werden. Im zweiten Schritt wird eine Arterie in den Muskelast eingelegt und dann ein aufgewickelter Draht eingeführt, um die Oberschenkelarterie zu verletzen.
Im letzten Schritt wird das Gefäß verschlossen und der Blutfluss in den Muskelast zurückgeführt. Letztendlich werden histologische Färbungen verwendet, um die Intimahyperplasie der Arterie als Reaktion auf die Verletzung zum experimentellen Zeitpunkt sichtbar zu machen. Sehenswürdigkeiten.
Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber bestehenden Techniken besteht darin, dass bei unserer Methode der Muskelast der Oberschenkelarterie am Ende des Eingriffs nicht ligiert wird. So kamen wir auf die Idee, den Teilkauter zu verwenden, als wir Operationen an Mäusen durchführten, die für herkömmliche Techniken zu klein waren. Das hat uns wirklich dazu inspiriert, die Methode zu entwickeln, bei der die Gefäße mit partiellem Kauter verschlossen und die Oberschenkelarterie offen gelassen werden.
Beginnen Sie damit, mit einer kleinen chirurgischen Schere einen gebogenen Schnitt in die Haut über der Oberschenkelarterie einer narkotisierten erwachsenen Maus zu machen. Platzieren Sie magnetische Fixateure im Schnitt und präparieren Sie dann stumpf das umgebende Gewebe, um die Oberschenkelarterie zu lokalisieren. Befeuchten Sie das Gewebe mit einem sterilen Applikator mit Wattespitze, der in Kochsalzlösung getaucht ist, und verwenden Sie dann eine Pinzette, um die Arterie weiter zu isolieren.
Trennen Sie anschließend mit einer feinen Pinzette den Nerv vorsichtig vom Gefäßbündel und achten Sie darauf, die Vene oder den Nerv nicht zu beschädigen. Schieben Sie den Nerv vorsichtig vom Bündel weg, um eine Stimulation zu vermeiden. Trennen Sie dann vorsichtig die Oberschenkelvene von der Oberschenkelarterie und lokalisieren Sie die Oberschenkelgabelung.
Schlingen Sie eine 6.0 Seidennaht unter der Oberschenkelarterie direkt distal der Bifurkation und sichern Sie sie mit einem Hämostaten, um den Blutfluss zur Arterie einzuschränken, dann hinter der Bifurkationsschlaufe eine zweite 6.0 Seidennaht unter der Oberschenkelarterie und befestigen Sie sie mit einem Hämostaten an der Naht, wie gerade gezeigt, um die Positionierung der Arterienschlinge zu unterstützen. Zwei weitere Nähte unter dem muskulären Ast der Oberschenkelarterie. Belasten Sie sie und sichern Sie sie mit einem anderen Hämostaten.
Befeuchten Sie dann das Gewebe mit mehr Kochsalzlösung. Legen Sie nach der Bifurkation eine Naht unter die Oberschenkelarterie und sichern Sie sie mit einem Hämostaten, um die Drahtverletzung der Oberschenkelarterie durchzuführen. Ziehen Sie zunächst die proximale Naht nach oben, um den Blutfluss in die Arterie einzuschränken.
Ziehen Sie dann leicht an den distalen und Asthämostaten, um die Stelle für die Arterototomie freizulegen, und ligieren Sie den Muskelast mit einem Nahtbinder. Verwenden Sie dann eine Mikroschere, die mit einer Pinzette stabilisiert ist, die auf einer Rolle chirurgischem Klebeband balanciert ist, um eine Arterotomie im Seitenast der Bifurkation durchzuführen. Heben Sie nun mit einer Pinzette mit feiner Spitze die Öffnung des Arteriums vorsichtig an und führen Sie das abgerundete Ende des Drahtes mit einer Spritze in die Arterie ein, um ein oder zwei Tropfen Lidocain in die Region zu geben, um das Vorschieben des Drahtes zu erleichtern.
Wenn der Draht die proximale Naht erreicht, lösen Sie die Naht und passen Sie sie so an, dass das Vorschieben des Drahtes nicht behindert wird. Führen Sie dann den Draht ein, bis er nicht mehr vorgeschoben werden kann. Lassen Sie den Draht außerdem eine Minute lang in der Oberschenkelarterie verbleiben.
Ziehen Sie dann den Draht 10 Mal in einer Sägebewegung zurück und schieben Sie ihn vor, um das Endothel der Arterie zu verletzen und zu entblößen. Wenn die Verletzung abgeschlossen ist, ziehen Sie den Draht langsam zurück, bis das runde Ende die proximale Naht passiert hat. Ziehen Sie dann an der Naht, um den Blutfluss in die Arterie einzuschränken, und ziehen Sie den Draht zurück, um den Muskelast zu ligieren. Ziehen Sie die verbleibende Naht am Ast fest, um Blutungen aus der Arterienotomie zu vermeiden.
Verwenden Sie als Nächstes eine Mikroschnittschere, um den kleinen Ast zwischen den beiden Nähten zu durchtrennen. Stellen Sie dann den Blutfluss zur Oberschenkelarterie wieder her, bestätigen Sie, dass kein Blut austritt, und schneiden Sie die Enden aus den Nähten ab. Alternativ, um eine Ligatur des Muskelastes zu vermeiden und einen Gefäßzugang durch die größere Hauptoberschenkelarterie zu ermöglichen, verletzen Sie die Arterie mit dem Draht, wie gerade gezeigt, und schließen Sie den Schnitt, indem Sie die Spitze eines erhitzten Kauters mit feiner Spitze leicht auf die Seite der Arterotomie auftragen, während sie abkühlt.
Bei der Durchführung der Methode der partiellen Kauterisation erhöht die Herstellung der Arterie an der Seite des Gefäßes die Chancen auf eine erfolgreiche Kauterisation. Um den Erfolg der Kauterisation zu testen, lösen Sie die proximale Naht und stellen Sie den Fluss zur Oberschenkelarterie wieder her. Wenn die Kauterisation erfolgreich ist, wird der Blutfluss distal zum Arterio wiederhergestellt. Entfernen Sie die provisorischen proximalen und distalen Bindungen.
Verwenden Sie zum Schluss eine sterile Schere, um die Ecken des Barrierebereichs eines Arzneimittelverabreichungspflasters abzustumpfen. Legen Sie dann das Pflaster mit einer dem Gefäß zugewandten Seite mit einer Zange auf die verletzte Oberschenkelarterie, um die Position des Pflasters nach Bedarf anzupassen. Nach einer Drahtverletzung entwickelt sich die neointimale Hyperplasie über einen Zeitraum von 14 bis 28 Tagen.
Wie dargestellt, weist eine unverletzte Oberschenkelarterie ein intaktes Gummiband und eine normale Dicke und einen normalen Umfang auf. Eine verletzte Oberschenkelarterie weist jedoch eine Intimahyperplasie und ein degradiertes Gummiband auf, sowie eine erneute Endothelisierung zu einem späteren Zeitpunkt. Bei der Durchführung dieses Verfahrens ist es wichtig, die Größe der Otomie zu begrenzen.
Da es sich bei einer großen Arterotomie um eine große Arteromie handelt, wird die Oberschenkelarterie während des Einführens des Drahtes durchtrennt. Darüber hinaus ist es schwierig, eine große Arterotomie mit der Kautermethode ohne Ligatur zu schließen. Wir hoffen, dass diese Methode einige der technischen Barrieren für die Durchführung dieser Technik beseitigt und den Menschen hilft, neue Methoden zur Behandlung von Herz-Kreislauf-Erkrankungen zu finden.
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Dieser Artikel beschreibt eine chirurgische Technik zur Induktion von Neointimahyperplasie in der Femoralarterie von Mäusen. Das Modell dient als Testsystem für die perivasculare Verabreichung therapeutischer Verbindungen zur Hemmung von Restenose.
Robust murine models of femoral artery injury with perivascular drug delivery enable mechanistic de-risking of restenosis therapies at the preclinical stage. This approach supports predictive confidence in vascular response profiling and informs early go/no-go decisions for anti-restenotic candidates. The model's reproducibility and technical accessibility facilitate portfolio-wide evaluation of therapeutic strategies targeting vascular repair.
This murine model integrates into the discovery-to-preclinical continuum for vascular therapeutics, bridging target validation, lead identification, and translational assessment.