Imaging Lokale Ca 2+ Signale in kultivierten Säugetierzellen

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, die Erfassung, Detektion und Analyse von lokalen IP 3-vermittelten Kalziumsignalen in intakten Säugetierzellen mittels kamerabasierter Bildgebung zu demonstrieren. Dies wird erreicht, indem die Zellen zunächst auf die Glasbodenschalen kultiviert und mit den zellmembrandurchlässigen Formen des fluoreszierenden Kalziumindikators beladen werden. CAL fünf 20 und eingesperrt IP drei.

Der zweite Schritt besteht darin, das Deckglas auf den Tisch eines inversen Mikroskops zu positionieren und die Probe mit 488 Nanometern Licht zu beleuchten, um den kalziumempfindlichen Fluoreszenzfarbstoff Cal five 20 anzuregen. Als nächstes werden lokale Kalziumsignale induziert, indem die Zellen einem kurzen Impuls von UV-Licht ausgesetzt werden. Dieses Foto befreit IP drei von einem eingesperrten Vorläufer, so dass es nun an den Acetoltrisphosphatrezeptor binden und die Kalziumfreisetzung aus dem endoplasmatischen Retikulum vermitteln kann.