Chirurgische Verletzung des Maus-Pankreas durch Ligatur des Pankreasganges als Modell für endokrine und exokrine Reprogrammierung und Proliferation

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, schwere Verletzungen in der adulten Bauchspeicheldrüse von Nagetieren zu induzieren, um eine Umgebung zu schaffen, die die Neogenese und Proliferation von Betazellen ermöglicht. Dies wird erreicht, indem zunächst eine Mittellinien-Laparotomie durchgeführt wird, um die Freilegung der Bauchspeicheldrüse zu ermöglichen. Anschließend wird der Hauptgang der Bauchspeicheldrüse im Halsbereich der Bauchspeicheldrüse mit zwei chirurgischen Knoten ligiert.

Im letzten Schritt wird die partielle Gangligatur oder PDL-Bauchspeicheldrüse entnommen. Letztendlich werden die immunhistochemische Analyse und Q-R-T-P-C-R verwendet, um die Faktoren zu untersuchen, die am Gewebeumbau, der endokrinen Proliferation und der Neogenese beteiligt sind, die durch die partielle Gangligatur induziert werden. Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber anderen Pankreasverletzungsmodellen, wie z. B. der Pankreeatomie und der chemischen Betazellablation, besteht darin, dass die partielle Gangligatur ein einfaches Verfahren ist, bei dem weder Pankreasgewebe entfernt noch Betazellen zerstört werden.

Die partielle Gangligatur durch die Bauchspeicheldrüse von Ratten wurde vor mehr als 20 Jahren in unserem Institut eingeführt. Wir haben diese Technik auf Mäuse übertragen, um die Rückverfolgung genetischer Zelllinien sowie Experimente zum Verlust und Gewinn von Funktionen zu erleichtern. Um den Mechanismus hinter der Bildung von Betazellen unter diesen experimentellen Bedingungen zu bewerten, desinfizieren Sie vor Beginn des Eingriffs den Thorax, den Bauch einer acht Wochen alten anästhesierten Maus mit einer antiseptischen Chlorhexidinlösung.

Rasieren Sie anschließend einen 2,5 x 1,5 Zentimeter großen Abschnitt des Bauches und desinfizieren Sie die Operationsstelle mit abwechselnden Peelings des Antiseptikums und des Ethanols. Bestätigen Sie nach dem letzten Peeling die entsprechende Anästhesietiefe mit den Zehen. Kneifen Sie das Tier und drapieren Sie es.

Verwenden Sie dann eine sterile Klinge, um mit einer sterilen Schere einen Schnitt in der oberen Mittellinie in die Haut zu machen, der sich vom Xiphoid-Prozess bis zum Nabel erstreckt. Trennen Sie den darunter liegenden linearen Ellenbogen und das Peritoneum, um den oberen Bauchquadranten freizulegen. Ziehen Sie dann den Magen nach oben zurück, um die Milz freizulegen.

Legen Sie dann den Milzlappen oder die Schwanzregion der Bauchspeicheldrüse frei. Ziehen Sie als Nächstes den Zwölffingerdarm und einen Teil des oberen Jejunums vorsichtig in den rechten oberen Bauchquadranten zurück, um Kopf, Hals und Körper der Bauchspeicheldrüse freizulegen. Lokalisieren Sie den Hauptgang der Bauchspeicheldrüse im Halsbereich der Bauchspeicheldrüse.

Der Körper und die Schwanzregion der Bauchspeicheldrüse sind nun freigelegt, um den Pankreasgang zu ligatisieren. Platzieren Sie vorsichtig eine Nahtnadel 6.0 unter der Halsregion und ligieren Sie an der linken Seite der Pfortader, wobei Sie den Gastroduodenal- und den Milzlappen trennen. Platzieren Sie eine zweite Ligatur in unmittelbarer Nähe der ersten, um sicherzustellen, dass die Lappen ausreichend getrennt sind.

Bringen Sie dann die Organe wieder in die Bauchhöhle zurück und verwenden Sie vier filamentöse Fäden ohne Polyglykol, um die Muskelschicht in einem kontinuierlichen Nahtmuster zu schließen. Zum Schluss verschließen Sie die Haut mit einer diskontinuierlichen Naht und überwachen das Tier, bis es sich vollständig erholt hat. Die PDL-Bauchspeicheldrüse wird verkleinert und erscheint fast durchscheinend.

Da die Ösen als kleine weiße Punkte erscheinen, erscheint der Kopf der Bauchspeicheldrüse in undurchsichtiger rosa Farbe, was die Identifizierung des eindeutigen exokrinen LOI mit einer sterilen Schere ermöglicht. Schneiden Sie entlang der Milz, um den ligierten Schwanz der Bauchspeicheldrüse von der Milz und das Bindegewebe zu trennen, das den Schwanz der Bauchspeicheldrüse mit den inneren Organen verbindet. Schneide dann den PD L Schwanz direkt vor der Ation ab.

Isolieren Sie das Scheinschwanzgewebe auf die gleiche Weise. Beachten Sie jedoch, dass sowohl die Schwanz- als auch die Kopfregion der Schein-Bauchspeicheldrüse undurchsichtig rosa sind. Um beide Teile getrennt voneinander zu isolieren, schneiden Sie die scheinligierte Bauchspeicheldrüse im Halsbereich ab.

Wenn die PDL korrekt durchgeführt wird, erscheinen die Mäuse gesund und zeigen keinen signifikanten Unterschied im Körpergewicht oder in der Glykämie. Im Vergleich zu den scheinoperierten Tieren geht das exokrine Asargewebe nach der PD L-Operation allmählich verloren, was zu einer Verringerung der Größe und des Gewichts des ligierten PD L-Schwanzes drei Tage nach der PDL führt. Die Morphologie des Thein R-Gewebes wird mit der offensichtlichen Apoptose der Asarzellen gestört. Nach einer Woche wird das Pankreasgewebe von infiltrierenden CD 45-positiven Immunzellen verschlungen.

Nach zwei Wochen werden viele ASIN-r-Läppchen durch fibrotisches und fettes Gewebe ersetzt, was zu einem durchscheinenden Aussehen der PD L-Schwanzbauchspeicheldrüse führt und die Ösen mit bloßem Auge sichtbar werden lässt. Parallel zum Beginn der Asar-Apoptose wird auch eine Zunahme der Zellaktivität des duktilen Epithels beobachtet. Darüber hinaus verdoppelt sich zwei Wochen nach der PDL das gesamte Betazellvolumen im PDL-Schwanz im Vergleich zu dem, das im nicht ligierten Scheinschwanz beobachtet wurde, was mit einer Zunahme der Betazellproliferation einhergeht, einer Aktivierung des embryonalen endokrinen Vorläufermarker-Marker-Neurogens bei drei Zellen.

Bei diesem Eingriff ist es wichtig, für jeden Schritt der Operation die richtige aseptische Technik anzuwenden und die Ligatur des Pankreasgangs mit so minimaler Schädigung wie möglich an den darunter liegenden Arterien und dem umgebenden Gewebe durchzuführen. Im Anschluss an dieses Verfahren können weitere Methoden, wie z.B. die Abstammungsverfolgung in partiell gangligierten transgenen Mäusen, durchgeführt werden, um zusätzliche Fragen zum Verbleib und zur Herkunft von Zellen zu beantworten. Nach PD L.