Eine Methode, um geschlossene Kopftraumatische Hirnverletzung in Verursacht Drosophila

Hier beschreiben wir eine Methode, um geschlossene Kopftraumatische Hirnverletzungen (TBI) in Drosophila zuzufügen. Dieses Verfahren stellt ein Tor zu den zellulären und molekularen Mechanismen, die TBI Pathologien mit der Vielzahl von experimentellen Werkzeuge und Techniken für Fliegen verfügbar zugrunde zu untersuchen.

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, ein geschlossenes Kopfschädel-Hirn-Trauma zuzufügen. In Fliegen. Dies wird erreicht, indem die Fliegen zuerst einen Zentimeter vom Boden entfernt in ein Fläschchen gelegt werden.

Der zweite Schritt besteht darin, das Fläschchen am HIIT-Gerät zu befestigen. Als nächstes wird die Feder in einen bestimmten Winkel ausgelenkt, das Fläschchen wird freigegeben und vollständig zur Ruhe kommen gelassen. Letztendlich kann eine Vielzahl von verhaltensmorphologischen und molekularen Assays verwendet werden, um die Folgen des daraus resultierenden Schädel-Hirn-Traumas zu charakterisieren.

Der Hauptvorteil dieser Methode gegenüber bestehenden Methoden, wie z.B. der Nagetier-Gewichtsabnahmemethode, besteht darin, dass viele Tiere über einen kurzen Zeitraum untersucht werden können. Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen im Bereich der Schädel-Hirn-Trauma zu beantworten, z. B. warum die Folgen eines Schädel-Hirn-Traumas bei verschiedenen Personen unterschiedlich sind. Zu Beginn stellen Sie die in der ersten Tabelle des Begleittextprotokolls aufgeführten Rohstoffe zusammen.

Biege die Klemmen mit einer Zange so, dass sie fest über der Feder sitzen. Zentrieren Sie dann die Klemmen relativ zur Breite der Platte und stoßen Sie sie mit der äußeren Klemme bündig mit der Brettkante aneinander. Stellen Sie die Feder so ein, dass sie parallel zur Länge des Brettes liegt, und befestigen Sie dann die Klemmen über der Feder und mit vier Schrauben auf dem Brett.

Wickeln Sie anschließend einen Streifen Velcro-Klebeband ein. Sobald Sie sich um das freie Ende der Feder befinden, sollte die Außenkante des Velcro bündig mit dem Ende der Feder sein. Legen Sie die Eiskübelabdeckung kopfüber zentriert und fest gegen das Holzbrett.

Richten Sie den erhabenen Bereich der Eiskübelabdeckung so aus, dass die lange Kante parallel zur Breite des Bretts verläuft. Schieben Sie das gesamte Gerät gegen einen festen Gegenstand, z. B. eine Wand, so dass die Eiskübelabdeckung zwischen dem Brett und dem Objekt eingeklemmt ist und sich nicht bewegt. Kleben Sie dann den Winkelmesser an die Unterseite eines Kartons, einer Flyfläschchenschale und stellen Sie ihn hochkant gegen die Länge des Bretts, so dass die 90-Grad-Markierung mit der Feder ausgerichtet ist.

Wenn es in eine perfekt vertikale Position zurückgezogen wird, legen Sie zwischen einer und 60 kohlendioxidbetäubte Fliegen in ein leeres Fläschchen und verschließen Sie das Fläschchen mit einem eng anliegenden Wattebausch. Zeichne dann eine Linie einen Zentimeter von der Basis entfernt auf das Fläschchen, schlage die Fliegen von den Seiten des Fläschchens nach unten und schiebe den Wattebausch hinein, bis er mit einer neu gezeichneten Linie übereinstimmt. Warten Sie fünf Minuten, bis die Fliegen ihre Beweglichkeit durch das Kohlendioxid wiedererlangt haben.

Führen Sie dann das Ende der Feder in das Fläschchen ein, bis die Innenkante des Velcro bündig mit der Oberseite des Fläschchens abschließt. Dadurch wird das Fläschchen an der Feder befestigt, indem eine feste Klemmverschraubung entsteht, bei der die Feder flach aufliegt. Stellen Sie sicher, dass ein Zentimeter des Fläschchens zu diesem Zeitpunkt den erhabenen Bereich der Eiskübelabdeckung überlappt.

Setzen Sie einen Gehörschutz auf, da der Aufprall des Fläschchens auf den Eiskübeldeckel ein lautes Geräusch erzeugt. Halten Sie dann das Fläschchen mit Daumen und Zeigefinger der linken Hand mit der rechten Hand an den Velcro-Bereich und halten Sie das Brett fest an der Tischplatte. Ziehen Sie dann die Feder perfekt gerade in den gewünschten Winkel zurück und lassen Sie die Feder dann los.

Warten Sie, bis die Feder vollständig zum Stillstand gekommen ist, und nehmen Sie dann das Fläschchen aus der Feder. Stellen Sie das Fläschchen auf die Tischplatte und lassen Sie die Fliegen mindestens fünf Minuten lang sich erholen. Während dieser Zeit finden die Fliegen langsam wieder zu ihrer normalen Bewegung zurück.

Übertragen Sie anschließend die Fliegen zur späteren Analyse in ein Fläschchen mit Fliegenfutter oder setzen Sie die Fliegen einem weiteren Schlag aus, die Fläschchen können viele Male wiederverwendet werden. Ziel des Experiments war es, den Einfluss der Verletzungsschwere auf den Mortalitätsindex nach 24 Stunden zu bestimmen. Die Schwere des Traumas wurde durch den Ablenkungswinkel der Feder von null bis 90 Grad vor dem Lösen bestimmt.

Das Experiment wurde an Fliegen unterschiedlichen Alters durchgeführt, null bis sieben Tage alte Fliegen und 20 bis 27 Tage alte Fliegen. Die Ergebnisse zeigen, dass schwerere Verletzungen einen höheren Sterblichkeitsindex verursachen. Ältere Fliegen hatten einen erhöhten Mortalitätsindex im Vergleich zu jüngeren Fliegen, wenn die Federdurchbiegung 50 Grad oder mehr betrug.

Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie man mit Fliegen ein Schädel-Hirn-Trauma zufügt.