Name: Der Aufbau Finite-Elemente-Modelle zu Zebrabärbling Jaw Biomechanik Untersuchen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-03T14:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 11 s
Description: Lernen Sie die Finite-Elemente-Analyse zur Simulation der mechanischen Umgebung von sich entwickelnden Zebrabärbling-Kiefern. Diese Methode ermöglicht Einblicke in Skelettentwicklung und Zellverhalten unter mechanischer Belastung.

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LHB wurde von der Wellcome Trust Dynamische Zell PhD-Programm finanziert werden; KAR wurde von MRC Projektförderung MR / L002566 / 1 (vergeben EJR und CLH) gefördert und CLH wurde von ARUK Zuschuss 19479. finanziert Wir würden auch die Wolfson Bioimaging Einrichtung für die Bildgebung Beratung danken.

Alle Schritte innerhalb des Protokolls folgen der University of Bristol Tierpflege und Tierschutz-Richtlinien und die des britischen Innenministeriums. 1. Visualisierung von Muskel-Skelett-Anatomie HINWEIS: Um die Form der Skelettelemente visualisieren, Muskel zu quantifizieren und die genaue Platzierung der Muskelansätze, immunostain (Abschnitt 1.1) Fisch im entsprechenden Alter für Skelett-Myosin (die Muskel zeigt) zu identifizieren und Typ-II-Kollagen (zu visualisieren Knorpel). Alternativ visualisieren die Muskel - Skelett - Anatomie transgenen fluoreszierenden Reporterlinien wie die Kollagen a1 Reporter COL2A1 mit: mCherry 13,14 Knorpel und die langsame Myosin schwere Kette Reporter smyhc sichtbar zu machen: 15 GFP die Position der Muskelansätze (Abschnitt 1.2) zu visualisieren. Alternative Linien, die Knorpel und Muskeln markieren könnte genauso gut funktionieren. <ol><li> Fluoreszierende Immunostaining <ol><li> Fix Larve in überschüssigem 4% Paraformaldehyd (PFA) in phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) für 1 Stunde. Waschen in PBS mit 0,1% Tween 20 (PBT) und entwässern jeweils in 50% Methanol (MeOH) in PBT und 100% MeOH für 5 min. Achtung: PFA ist giftig und sollte in Übereinstimmung mit dem Material Sicherheitsdatenblatt behandelt werden. HINWEIS: Larve kann in 100% Methanol gelagert werden, bis sie benötigt. </li><li> Rehydrate Larve in 50% MeOH in PBT für 5 min. Waschen in PBT für 5 min. </li><li> Permeabilisierung Larve in 0,25% Trypsin in PBT auf Eis für 5-6 min. in 4x PBT Waschen für jeweils 5 Minuten. </li><li> Block für 2-3 h in 5% Serum in PBT. </li><li> Inkubieren Larve in der empfohlenen Verdünnung von Kaninchen-Anti-Typ-2-Kollagen und Maus-anti-Myosin-Antikörper in 5% Serum in PBT für 1 h bei Raumtemperatur oder über Nacht bei 4 ° C. HINWEIS: Die empfohlene Verdünnungsbereich ist in der Regel auf dem Blatt Antikörper Daten. Wählen Antikörper, die gegen verschiedene Arten angehoben sind miteinander und auch diffemieten, um das Gewebe. </li><li> Waschen Sie Larve 6x für 15 Minuten in PBT. </li><li> Block für 1-2 h in 5% Serum in PBT. </li><li> Inkubieren in Sekundärantikörper im Dunkeln. Verwenden fluoreszenzmarkierten Anti-Maus (550) und Anti-Kaninchen (488) Sekundärantikörper bei einer geeigneten Verdünnung in 5% Serum und PBT für den spezifischen Antikörper. </li><li> Wasch 6X für jeweils 10 Minuten in PBT und Bild auf einem Mikroskop 10X konfokalen so schnell wie möglich. </li></ol></li><li> Imaging Muskel - Skelett - Geometrie <ol><li> Montieren Sie die Larven ventral auf einem Deckglas in lauwarmem 0,3-0,5% mit niedrigem Schmelzpunkt (LMP) Agarose in Danieau-Lösung 16. HINWEIS: Transgene Fische müssen in 0,02% MS222 (Tricaine Methansulfonat, pH 7) vor der Montage und während der Bildgebung sediert werden. </li><li> Nehmen Sie eine konfokale Bildstapel aus der Region von Interesse mit dem 10fach Objektivlinse und das etwa 2,5-fache Digitalzoom. Bereiten Sie Bilder des grünen und roten Kanal mit der 488 nm und 561 nm-Laser sind. Bild mit einer 512 x 512 Pixel Auflösung mit einem Intervall zwischen z-Ebene von 1,3 um und 3 Linie Durchschnitt. Der resultierende Stapel wird von etwa 100 z Scheiben umfassen. </li><li> Exportieren Sie die Daten als TIFF-Serie. Maximale Projektionen der Muskel und des Knorpels Elemente aus einer 5dpf Zebrabärbling Larven sind in Abbildung 1 dargestellt. </li></ol></li></ol> 2. Erstellen eines 3D-Oberflächen <ol style="margin-left: 40px;"><li> Wählen Sie einen repräsentativen Datensatz für jeden Zeitpunkt auf 3, 4 und 5 dpf (wählen Sie nach Visualisierung mehrerer Proben). </li><li> Öffnen Sie 3-dimensionalen TIFF-Stapel und wählen Sie alle Kanäle in der Analyse-Software. Rechtsklick auf den Knorpel Kanal und wählen Sie die Bildfilter und Glättung: Gaussian (2B). </li><li> In Projektansicht rechts auf gefilterte Bild klicken und wählen Sie &quot;Bildsegmentierung&quot; und dann &quot;bearbeiten neues Label &#39;. Erstellen Sie ein neues Etikett für jedes Material, das heißt, Knorpel und junkt. Wählen Sie den Knorpelbereich des Bildes (2C, weißes Signal, lila Umriss) mit dem Zauberstab - Werkzeug. Verwenden Sie das Pinsel-Werkzeug Lärm von den Umrissen zu entfernen. HINWEIS: Wenn Zauberstab-Werkzeug, klicken Sie auf &quot;Alle Scheiben &#39;. </li><li> Wählen Sie den Verbindungsbereich mit dem Pinsel - Werkzeug und weisen auf eine gemeinsame Komponente (2C, blau umrandet) </li><li> Glatte mehrere Scheiben auf einmal durch die Segmentierung im oberen Menü und glatt Auswahl von Etiketten. Rechtsklick auf das Bild und wählen Sie erzeugen Oberfläche eine 3D - Oberfläche des Bauteils (2D) machen zu erzeugen. </li><li> Klicken Sie auf die Oberfläche und Speichern von Daten als hmascii Datei für den Import in kämmenden Software. </li></ol> 3. Berechnung der Muskelkräfte zu sein, in dem FE-Modell <ol style="margin-left: 40px;"><li> Zählen Sie die Anzahl der Muskelfasern von konfokalen Bildern von smyhc: GFP transgenen Zebrabärbling (1A, Pfeilspitze, 1C) und messen Sie den Durchmessereter der Fasern ihre Querschnittsfläche (&amp; pgr; r 2) zu berechnen. </li><li> Identifizieren geeigneter Kraft pro Flächeneinheit Muskel aus der Literatur. Die maximale Muskelkraft erzeugt pro Flächeneinheit für Larven Zebrabärbling Skelettmuskulatur (40 nN / &amp; mgr; m 2) wurden 17 verwendet. </li><li> Berechnen der Kräfte für jeden anatomischen Muskelgruppe durch die Anzahl der Fasern und deren Multiplikation Fläche durch die Kraft pro Flächeneinheit. Siehe Tabelle 1. </li></ol> 4. Erstellen eines Netz <ol style="margin-left: 40px;"><li> Importieren Sie das 3D-Modell erzeugt in Abschnitt 2 (siehe oben) in ein Softwarepaket der Lage, eine Finite-Elemente-Netz zu erzeugen. </li><li> Generieren A2D Maschen des Knorpel- und Gelenkoberflächen durch die Schrumpffolie Werkzeug unter dem 2D-Menü. Wählen Sie eine entsprechende Elementgröße. Hinweis: Verwenden Sie eine Elementgröße zwischen 1,5-2,5. Falls erforderlich, erzeugen eine Reihe von unterschiedlich großen 2D-Oberflächennetze 3D-Mesh-Optimierung durchzuführen (§ 4.4). </li><li> Führen Sie Mesh Qualitätskontrollen unter den gefundenen &#39;2D&gt; Tools&gt; Überprüfen Sie Elemente&#39; Panel für duplizierte Elemente, Einfügungen und Durchdringungen im Netz zu überprüfen. Fix Diederwinkeln durch das Dienstprogramm Registerkarte in Modellbaum verwenden. </li><li> Generieren Sie ein 3D-Netz aus den 2D-Oberflächennetzen unterschiedlicher Elementgröße mit Hilfe der 3D&gt; Tetramesh subpanel. HINWEIS: Vergleichen Sie die Ergebnisse verschiedener Maschengrößen und wählen Sie das FE-Modell mit der Größe niedrigsten Netz, das nach einer weiteren Simulationen konvergiert und keine Funktionsdefinition beeinträchtigen. Das Beispiel in Figur 3 enthält 1.500.000 tetraedrischen Elemente für den Unterkiefer Knorpeln und hatte eine 2D Elementgröße von 2,0. </li><li> Verwandeln Sie das Netz so Kiefermodell nach konfokalen Stapel zu skalieren ist mit der Geometrie&gt; Entfernung subpanel. HINWEIS: Sicherstellen, dass die Knorpel und Gelenkkomponenten sind in dem Modell verbunden durch ein Mischmodell zu exportieren oder durch Bindern. </li></ol> 5. Finite-Elemente-Model Baumaschinen <ol><li> Mit kommerziellen Finite-Elemente (FE) Software eine FE-Modell. Mit Hilfe der 3D-Muskeln und Knorpel markierte konfokalen Stapel erzeugt in Abschnitt 1 als Leitfaden, weisen Knoten, die zu Muskelansatzpunkte entsprechen. Erstellen Sie einen Vektor zwischen zwei Knoten , die den Ursprung und die Einfügung eines jeden Muskel (Abbildung 3). </li><li> Erstellen Sie eine Last Sammler des Typs &#39;Geschichte&#39; a &#39;C-Last&#39; zu gelten für jeden Muskel. Geben Sie den Betrag in Newton (berechnet in Schritt 3.3) und weisen Sie den zugehörigen Vektor. 3 sind die Befestigungspunkte für die Adduktoren mandibulae (AM) zeigt, Winkelmesser hyoideus (PH) und intermandibularis (IM). HINWEIS: Für diese Kiefermuskeln, Kraft maximale Kontraktions zwischen Ursprung und Ansatz so, dass nur 50% der jeweiligen Last verteilt wird an jedem Standort angewendet wird. </li><li> Weisen Sie entsprechende elastische isotropen Materialeigenschaften, wie durch die Literatur bestimmt. Young-Modul für die Knorpelund die Interzone in diesem Modell waren 1,1 MPa und 0,25 MPa bzw. und das Poisson-Verhältnis betrug 0,25 für beide 18,19. </li><li> Erstellen Sie eine Last Sammler des Typs &#39;Grenze&#39; anfänglichen Beschränkungen für das Modell anzuwenden. Gehen Sie auf die Registerkarte Analyse&gt; Constraints und im schaffen subpanel, wählen Sie die Knoten auf dem Modell, das Sie möchten, zu beschränken. Wählen Sie die Freiheitsgrade (DOF) diese Grenze Bewegung des Modells auf die beste Annäherung seiner natürlichen Bewegungsbereich. HINWEIS: Das Modell in Figur 3 wurde in allen Bewegungsachsen begrenzt (DOF: 1, 2, 3 für x, y und z, jeweils) am ceratohyal es im Raum zu verankern , an einem mittleren Punkt in dem Modell und in der Achse y und z an dem Punkt , wo die palatoquadrate zum Rest des Schädels Zebrabärbling verbindet (Abbildung 3, Tabelle 1). Das Modell muss in allen drei DOF in mindestens einem Knoten eingeschränkt werden. </li><li> Erstellen Sie ein &#39;Load Schritt&#39;, für jede Art von Bewegung, die Sie möchten simulaßen ( das heißt, Öffnen, Schließen), unter der Analysemenü und wählen Sie alle relevanten Lasten (hergestellt in Abschnitt 5.2) und Beschränkungen (hergestellt in Abschnitt 5.4) , um diese Bewegung zu simulieren. Wählen Sie &#39;Static&#39; aus dem Dropdown-Menü, wenn es erscheint. </li><li> Exportmodell einschließlich der Masche, Lasten, Randbedingungen und Materialeigenschaften in einem geeigneten Dateiformat, in diesem Fall &quot;.inp&quot; Format. </li><li> Lastmodell in FE-Analyse-Software. Erstellen Sie einen Job für das Modell ausführen mit dem Job-Modul. </li><li> Analysieren Ausgang für Spannung, Dehnung, Verschiebung usw. in der Ergebnisse Tab und Visualisierung Menü (Abbildung 4 und 5). </li></ol> 6. Validierung von Jaw Deformation / Displacement Entfernungen <ol><li> Wählen Sie 3-6 Tg (Col2a1aBAC: mCherry) transgenen Zebrafisch. </li><li> betäuben leicht die Larven mit 0,02% MS222, bis sie nicht mehr zu reagieren, aber ihre Herzen zu berühren schlagen immer noch. </li><li> Montierendie Larven seitlich (während narkotisierten) auf Deckgläsern in lauwarmem 1% LMP-Agarose (hergestellt in Danieau-Lösung). </li><li> Entfernen Sie die Agarose aus um den Kopf und Kiefer mit einer Pinzette. </li><li> Spülen Sie frische Danieau-Lösung (ohne MS222) über den Kopf der Larve zu entfernen Anästhesie mit einer Pasteur-Pipette, bis die normale Mundbewegungen wieder aufnehmen. </li><li> Verwenden Sie Film-Capture-Software Hellfeld High-Speed-Videos von Mundbewegungen zu nehmen. Nehmen Sie Filme von rund einer Minute Dauer auf dem höchsten Framerate, oder ausreichend mehrere Zyklen von Maulöffnung aufzunehmen. </li><li> Wählen Sie Frames, die den Kiefer offen zu seiner maximalen Verschiebung zeigen. Messen Sie den Abstand zwischen der vorderen Spitze des Meckel-Knorpel und Oberkiefer (Spitze des ethmoid Platte) in &amp; mgr; m. </li><li> Berechnen Sie die mittlere Verschiebung von mehreren Fischlarven. </li><li> Auszug Verschiebungsdaten aus dem Modell. Verwenden Sie die mittlere Verschiebung in 6.8 berechneten Modell Verschiebung Verhalten zu überprüfen ( <strong&gt; 4). Wenn das Modell abweicht von den erwarteten, führen Sensitivitätsanalyse durch sequentielles Materialeigenschaften und Muskelbelastungen zu verändern. </li></ol>

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Die Autoren haben nichts zu offenbaren. Einige Daten in den 3-5 wurde von J.Biomech nachgedruckt, 48 (12), Brunt et al., Finite - Elemente - Modellierung prognostiziert Veränderungen in gemeinsamen Form und das Verhalten der Zelle durch den Verlust von Muskelzerrung in Kieferentwicklung, 3112-22. 2015 mit Genehmigung von Elsevier 15.

Finite - Elemente - Modelle wurden verwendet , um die Bereiche der Skelettelemente zu beziehen , die unter Belastung mit denen unterzieht die Knochenbildung sind 10, sowie die Bereiche unter Belastung während endochondral Verknöcherung und Joint Morphogenese 8,12,21 abzubilden. Andere Studien konnten auch theoretische Wachstumsmodelle anwenden Veränderungen 11,12 während die gemeinsame Entwicklung zu replizieren. Hier zeigen wir das Protokoll für den Aufbau von FE - Modellen für ein relativ einfaches System, der Zebrabärbling Backe 20. Im Gegensatz zu alternativen Methoden der Rohbilder für die FE - Modelle sammeln, wie beispielsweise CT - Abtastung 22, konfokale Bildgebung transgener Linien oder immunhistochemisch Zebrabärbling ermöglicht mehrere Gewebe untersucht werden. Es kann daher liefern direkte Informationen über Muskelbefestigungspunkte in Bezug auf Knorpel. Unter wirbel Modelle sind Zebrabärbling besonders zugänglich für genetische und pharmakologische Manipulation. Die Erzeugung von FE-Modellen für Zebrabärblingcraniofacial Knorpel eröffnet nun die Möglichkeit einer weiteren Untersuchung der Wechselwirkung zwischen Biomechanik und Genetik in gemeinsamen Morphogenese auf. Es gibt eine Reihe von kritischen Schritte in den Prozess ein FE-Modell erzeugt wird; Die erste ist eine genaue dreidimensionale Darstellung des Systems zu erzeugen. Dies erfordert Bildgebung bei ausreichend hoher Auflösung zu deutlich Grenzen definieren. Beachten Sie, dass auch bei Bildgebung mit hoher Auflösung eine gute Oberfläche zu machen, muss dieser einige Regionen glätten kann. Ein weiterer wichtiger Schritt ist die Definition, die korrekte Platzierung der Last und korrekte Einschränkungen. Ein unzureichend eingeschränkt Modell scheitern wird und eine falsche Platzierung der Lasten zu lösen abnorme Bewegung verursachen. Einige Verarbeitung der Rohdaten (Figur 2) ist notwendig , da eine Oberfläche aus den Rohdaten erzeugt würde schwierig sein Mesh (2B). Wir gefiltert , um die Daten , die ein Gauß - Filter (Abbildung 2C </strong&gt;) und führten wir einige manuelle Glätten der Kurven, um eine Reihe von sauberen Konturen zu erzeugen, die in einer 3D-Oberfläche umgewandelt werden können. Zu viel Glättung kann eine &quot;geschmolzen&quot; Oberfläche erzeugen, die viele ihrer Funktionen verloren hat. die richtige Elementgröße zu wählen, ist ein iterativer Prozess als zu klein Wahl eines Elementgröße ein Netz zu groß schafft, die sehr rechenintensiv ist. Allerdings wird zu groß, ein Element der Wahl der Größe erzeugen ein Netz, das die richtige Form der Struktur zu rekapitulieren ausfällt. Die richtige Masche hatte das kleinste Element Größe, die die richtige Form des Kiefers erfasst und konvergierte auf eine korrekte Lösung, überprüften die Backenbewegung verwenden. Es kann auch erforderlich sein, um die Materialeigenschaften oder Lastberechnungen zu ändern, um besser die korrekte Verschiebung emulieren, wie unterschiedlichen Alters und Arten werden im Wesentlichen unterschiedliche Eigenschaften haben. Es ist wichtig, sich daran zu erinnern, dass es immer Einschränkungen auf ein hypothetisches Modell und einssumptions gemacht FE-Modelle laufen. Wenn nur eine oder eine kleine Anzahl von Proben Modellierung ist es wichtig, sicherzustellen, dass eine repräsentative Probe, wie es gewählt wird, sind wahrscheinlich kleine Variationen zwischen Individuen. Da nur enthalten waren einige der Backenelemente und Muskeln, das Modell ist eine vereinfachte Version des Zebrabärbling craniofacial Muskel-Skelett-Systems. Daher mussten Einschränkungen positioniert werden, um zu erklären, wo die modellierten Backenelemente mit dem Rest des Schädels in Verbindung bringen würde und das Modell wurde künstlich im Zentrum gezwungen es in &quot;Raum&quot; zu beheben. Diese künstliche Einschränkung Auswirkungen nicht auf die Interpretation aus den Modellen als ceratohyal gezogen selbst nicht analysiert. Die Einbeziehung von mehr der kraniofazialen Struktur, vor allem andere Maulöffnung Muskeln wie die sternohyals und der ihr beigefügten Knorpel 23, könnte zum Modell hinzugefügt, aber Einschränkungen umfassen die Fähigkeit der größeren Modelle in der Finite - Elemente - Software auszuführen. s = &quot;jove_content&quot;&gt; Eine weitere Einschränkung besteht darin , dass wir nicht Bandinsertion modelliert, obwohl dies durch die Insertion von Federn 8 erreicht werden konnten. Eine andere Annahme in diesem Fall war, dass das Modell linear verhalten würde. Die Größen der Stämme auf die Modelle waren vergleichbar mit denen , die in der veröffentlichten Modelle und auf in - vitro - Zellen 10,24, mit Stämmen unter 3500 und über -5.000 μɛ abgesehen von Zwang und Muskelansatzpunkte sein. Daher wurden die Stämme in den jeweiligen Regionen des Modells innerhalb eines Bereichs akzeptabel für ein lineares Modell angesehen. Cartilage verhält sich nicht ganz als lineares Material und hat zuvor als poroelastischer Material modelliert, die 25 Analyse des Fluid Verhalten im Modell aktiviert. Verbreiten der Muskelansatzpunkte unter einer Gruppe von lokalen Knoten würde die Spitzenkräfte verteilen und genauer den Muskelansatz für bestimmte Muskeln darstellen. ent &quot;&gt; Verwendung von FE ermöglicht eine Bewertung der auf einer Struktur wirkenden Dehnungen und Spannungen. Als Technik häufig in vielen biowissenschaftlichen Disziplinen einschließlich der Orthopädie, Paläontologie und in jüngerer Zeit die Entwicklungsbiologie verwendet wird. Hier beschreiben wir, wie FES für die Zebrabärbling bauen Unterkiefer. in Zukunft könnten diese Modelle auf der ganzen Kiefer aussehen erweitert werden, einschließlich des Gaumens. Ähnliche Techniken verwendet werden könnten, spinal Biomechanik in Fischen, die bisher meist durch kinematische Mittel untersucht worden sind, zu modellieren.

Finite - Elemente (FE) Modellierung ist ein Engineering - Technik , die rechnerisch berechnen kann und ordnen Sie die Größe und Lage der Stämme auf einer Struktur wirken 1. Das Modell besteht aus der 3D-Struktur, die von einem Netz von &quot;Finite Elemente&quot; dargestellt, und das Endergebnis der Analyse wird durch eine Anzahl von Faktoren ab, einschließlich der Struktur und der Anzahl der Elemente in dem Gitter, die Größe und die Position der mechanischen geregelt Lasten und die Materialeigenschaften. Materialeigenschaften beschreiben bestimmte Aspekte des Verhaltens eines Materials unter einer bestimmten Art der Last; Elastizitätsmodul (E) beschreibt die Elastizität des Materials, während das Poisson-Verhältnis des proportionalen Abnahme der Breite des Materials zu seiner Länge beschreibt, wenn eine Probe gestreckt wird. FE-Modellierung verwendet werden, um eine Vielzahl von Variablen auf dem Modell unter Berücksichtigung der einzigartigen Eingangsdaten über die Struktur einschließlich Verschiebung, Stress, Druck und Dehnung wirkend zu berechnen &#39;; S Form, Lage und Größe der Lasten und die spezifischen Materialeigenschaften. FE - Modellierung wird in der Technik 2 und zunehmend auch für orthopädische 3 und paläontologische Anwendungen 4 weit verbreitet. In der Entwicklung sind als Anregung in vielen Zellen zu biomechanischen Kräfte bekannt wirken zu aktivieren Zellantworten 5-8 und es ist nützlich , sowohl die relativen Positionen und Grßen der mechanische Reize innerhalb der Entwicklungsorgansysteme vorherzusagen, wurde jedoch noch FE Modellierung wenig gebraucht für Zebrabärblingentwicklung. Sowohl Knorpel und Knochen wurden mechanosensitive Materialien erwiesen. Beispielsweise in vitro Kompression gefunden wurde chondrogene Wege zu aktivieren, während die Spannung für die Knochenbildung 9 notwendig erwiesen hat. FE-Analyse (FEA) wurde ausgebeutet Stämme wirken auf biologische Proben zu modellieren, einschließlich derjenigen, auf die Skelettelemente während Knochen wirkenden formationen 10. Andere Entwicklungsanwendungen umfassen seine Verwendung die Form eines gemeinsamen vorherzusagen , nachdem es 11,12 theoretischen biomechanischen Kräften ausgesetzt wurde und das Muster der Stämme 8 vorhanden während Küken Kniegelenk Morphogenese zu zeigen. Dieses Protokoll wird auf die gemeinsame Nutzung der Erfahrungen soll der Erzeugung von 3-dimensionalen Oberflächen, Netze und Finite-Elemente-Modelle von konfokalen Bildern, mit denen die Mechanik der Entwicklung von Geweben zu verstehen. Wir zeigen Ihnen auch Möglichkeiten, die FE - Modelle Validierung obwohl echte gemeinsame Verschiebungsinformation in vivo zu erfassen. Während wir die Zebrabärbling Kiefer als ein Beispiel die gleichen Techniken verwenden könnte auf jedem kleinen biologischen System verwendet werden, für die 3D-Informationen über die Struktur des Muskel-Skelett-System kann durch konfokale oder Multiphotonen-Imaging erhalten werden.

<table><tbody><tr><td>Coll2</td><td>Abcam</td><td>ab34712</td><td>Kollagen-Antikörper Typ II - färbt alle Knorpel</td></tr><tr><td>A4.1025 / MF20</td><td>Entwicklungsstudien Hybridombank</td><td>A4.1025</td><td>Skelett-Mysoin-Antikörper - markiert alle Skelettmuskeln&nbsp;</td></tr><tr><td>Low Melt Agarose</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>A9414-5G</td><td>Zur Montage von Zebrafischen</td></tr><tr><td>MS222 (Ethyl-3-aminobenzoat-Methansulfonat )</td><td>Sigma</td><td>E10521-10G</td><td>Zur Herstellung von Anästhetikum</td></tr><tr><td>Trypsin</td><td>Fisher</td><td>T/3760/48</td><td>Probenpermeablisierung</td></tr><tr><td>Dylight 488 Maus IgG</td><td>Thermofisher</td><td>35502</td><td>Sekundärantikörper</td></tr><tr><td>Dylight 550 Kaninchen IgG</td><td>Thermofisher&nbsp;</td><td>84541</td><td>Sekundärantikörper</td></tr><tr><td>SP8/SP5 oder SPE konfokal</td><td>Leica&nbsp;</td><td></td><td>Für die Bildgebung&nbsp;</td></tr><tr><td>LAS Leica Erfassungssoftware</td><td>Leica</td><td></td><td>Imaging Software</td></tr><tr><td>Aviso (Version 7.0.0)</td><td>3D-Bildanalysesoftware</td> der <td>FEI Visualization Science Group</td><td></td> (Sektion 2)</tr><tr><td>Hypermesh, Teil des Hyperworks-Pakets (Version 10)</td><td>Altair Engineering</td><td></td><td>Software zur Generierung von FE-Modellen (Abschnitt 4-5)</td></tr><tr><td>Abaqus (Version 6.14)</td><td>SIMULIA</td><td></td><td>FE Analysesoftware (Sektion 5.7-5.8)</td></tr></tbody></table>

der aufbau finite-elemente-modelle zu zebrabärbling jaw biomechanik untersuchen

Building Finite Element Models to Investigate Zebrafish Jaw Biomechanics

Die Skelettmorphogenese erfolgt durch streng reguliertes Zellverhalten während der Entwicklung; viele Zelltypen ändern ihr Verhalten als Reaktion auf mechanische Belastung. Skelettfugen werden dynamisch-mechanisch belastet. Die Finite-Elemente-Analyse (FEA) ist eine Berechnungsmethode, die häufig im Ingenieurwesen eingesetzt wird und vorhersagen kann, wie ein Material oder eine Struktur auf mechanische Eingaben reagieren wird. Durch die Aufteilung eines ganzen Systems (in diesem Fall des Kieferskeletts des Zebrafisches) in ein Netz kleinerer "finiter Elemente" kann die FEA verwendet werden, um die mechanische Reaktion der Struktur auf äußere Lasten zu berechnen. Die Ergebnisse können auf viele Arten visualisiert werden, unter anderem als "Heatmap", die die Position der maximalen und minimalen Hauptdehnungen zeigt (eine positive Hauptdehnung zeigt die Spannung an, während eine negative die Kompression anzeigt). Das Maximum und Minimum beziehen sich auf die größte und kleinste Dehnung). Diese können verwendet werden, um zu erkennen, welche Regionen des Kiefers und damit welche Zellen bei der Kieferbewegung voraussichtlich besonders hohen Zug- oder Druckbelastungen ausgesetzt sind und können somit verwendet werden, um Zusammenhänge zwischen mechanischer Belastung und Zellverhalten zu identifizieren. Dieses Protokoll beschreibt die Schritte zur Generierung von Finite-Elemente-Modellen aus konfokalen Bilddaten des Bewegungsapparates am Beispiel des Zebrafisch-Unterkiefers. Das Protokoll führt den Leser durch eine Reihe von Schritten: 1) Färben der muskuloskelettalen Komponenten, 2) Abbildung der muskuloskelettalen Komponenten, 3) Aufbau einer 3-dimensionalen (3D) Oberfläche, 4) Erzeugen eines Netzes aus finiten Elementen, 5) Lösen der FEA und schließlich 6) Validierung der Ergebnisse durch Vergleich mit realen Verschiebungen, die bei Bewegungen des Fischkiefers beobachtet werden.

Immunofärbung für Muskel (1A) und des Knorpels (1B) bzw. Abbildungs transgener Reportern (1C) kann die 3D - Struktur des Kiefers visualisiert werden, zusammen mit der zugeordneten Muskulatur. Durch Bildgebung mit einer hohen Auflösung war es möglich , ein Modell zu erstellen , die sowohl die dreidimensionale Form des Kiefers (Abbildung 2) und die Lage und Anordnung der Lasten (3) erfasst. Unter Verwendung in vivo Verschiebungen hoher Geschwindigkeit Video - Capture (Abbildung 4) durch verifiziert wir , dass der Bereich der Bewegung in dem Modell in einem realistischen Bereich war. Die FE - Modelle einmal laufen können eine Reihe von Daten anzuzeigen, wie Stress (5A), minimale und maximale Hauptdehnung (- K 5B) verwendet werden. Diese Ergebnisse sind drei-dim<html> ensional so kann das Modell feine Muster Detail (5E, 5I) zu sehen , der vergrößert werden soll relevante Ansichten (5F, 5G, 5J, 5K) und digital geschnitten (5E &#39;, 5E&#39; &#39;, 5I&#39;, 5I zu erhalten gedreht &#39;&#39;) zu zeigen , wie die Muster von Spannung, Dehnung oder Druckänderung während des gesamten Modells. Es ist auch möglich, quantitative Daten aus dem Modell zu extrahieren (nicht gezeigt). Durch das Modell zu überprüfen und mit den genauesten Materialeigenschaften, Lasten und Netz Form der FE-Modell verwendet werden, um die bestmögliche Schätzung der mechanischen Umgebung zu erkunden, indem Zellen in diesem Fenster der Entwicklung erlebt. Die Ergebnisse des Modells kann direkt auf Veränderungen in Zellverhalten und die Genexpression 20 verglichen werden. <html> re 1 &quot;src =&quot; / files / ftp_upload / 54811 / 54811fig1.jpg &quot;/&gt; Abb . 1: Repräsentative Bilder der Muskel - Skelett - Elemente der Zebrabärbling Unterkiefer bei 5 dpf Repräsentative konfokalen Stapel des Unterkiefers von 5dpf Larven alle mit vorderen gezeigt nach oben (A) Immunostaining für A4.1025 die alle Skelett-Myosin Flecken (B) Immunostaining für Typ - II - Kollagen , das alle Knorpel (C) Stapel von einer Live - Larve markiert die transgenen Reporter COL2A1 ausdrücken: mCherry Knorpel Markierung (rot) und smyhc: GFP langsam Muskel (grün). IA: intermandibularis anterioren, PH: Winkelmesser hyoideus, AM: Adduktoren mandibulae, HALLO: hyoideus minderwertig, HALLO: hyoideus überlegen, CH: sternohyoideus, MC: Meckel-Knorpel, PQ: Palatoquadrate, CH:. Ceratohyal <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54811/54811fig1large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier eine größere Version zu sehen dieser Figur.</a> &quot;Fo: keep-together.within-page =&quot; 1 &quot;&gt; <img alt="Figur 2" src="/files/ftp_upload/54811/54811fig2.jpg" /> Abbildung 2: Erzeugung einer 3D - Oberfläche von konfokalen Daten Bilder den Übergang von der konfokalen Daten in eine 3D - Oberfläche für den Zebrabärbling Unterkiefer mit höherer Vergrößerung des Verbindungsbereichs zeigt.. (A) Rohdaten konfokalen; (B) Datensatz nach der Anwendung eines Gaußschen Filters; (C) Gefiltert Kontur; (D) 3D - Oberfläche. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54811/54811fig2large.jpg" target="_blank">Bitte hier klicken</a> , um <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54811/54811fig2large.jpg" target="_blank">eine größere Version dieser Figur zu sehen.</a> <img alt="Figur 3" src="/files/ftp_upload/54811/54811fig3.jpg" /> Abbildung 3: Repräsentative Maschen Zwänge und Kraftvektoren Repräsentative Maschen für eine 5 dpf Larve für (A) Mund Schließung zeigt und.(B) Mundöffnung. Weiße Punkte bezeichnen Stellen , wo das Modell beschränkt ist , und in dem Maße (beispielsweise x und y oder x, y und z). Weiße Linien bezeichnen Muskel Positionen, die mit dem Vektor der Muskelkraft durch weiße Pfeile gekennzeichnet. Rot zeigt Knorpel und Gelb die interzone. Diese Zahl wurde von ergänzendem Material modifiziert zuvor in Brunt veröffentlicht et al. 15. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54811/54811fig3large.jpg" target="_blank">Bitte hier klicken</a> , um <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54811/54811fig3large.jpg" target="_blank">eine größere Version dieser Figur zu sehen.</a> <img alt="Abbildung 4" src="/files/ftp_upload/54811/54811fig4.jpg" /> Abbildung 4:. Sensibilitätsprüfung FE-Modell Backenbewegung in 5dpf Zebrabärbling für verschiedene Knorpel und Interzonen Young-Module simulieren. Backenbewegung (offen in &amp; mgr; m geschlossen) auf der Backe markiert; mit der Farbtaste aufgezeichnet. Jedes Modell (A - L) eine unterschiedliche Kombination von Knorpel (c = 1,1, 3,1 bzw. 6,1 MPa) oder Interzonen (i = von 0,25, 0,5, 0,75 oder 1 MPa) Eigenschaften aufweisen . Horizontal schwarzer Pfeil hebt den Wert der Backenbewegung an der Spitze der Meckel-Knorpel (durch den vertikalen schwarzen Pfeil dargestellt). M und N Standbilder aus Videos von 5 dpf Larven zeigt Minimum, das heißt, Kiefer geschlossen (M) und Maximum, das heißt, Kiefer vollständig geöffnet (N) mit den beiden überlagerten (O) - weiße Linie auf O steht für die Verschiebung (von 43 &amp; mgr; m). In diesem Fall sind relativ Knorpel Eigenschaften von 1,1 mit einem Interzone von 0,25 (A) am besten entsprechen die Verschiebungen in lebenden Fischen gesehen (O). Panels AL dieser Figur wurden zuvor in Brunt et al. 15. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54811/54811fig4large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier um einen größeren vers anzuzeigen</a>Ion dieser Figur. <img alt="Abbildung 5" src="/files/ftp_upload/54811/54811fig5.jpg" /> Abbildung 5: Repräsentative Daten aus den FE - Modelle FE-Modell Simulation aller in einem 5 dpf Larve angewendet Muskeln (A - C).. (A) Von Mises (EMaxmin) (B) Mindesthauptdehnung (E Min. P, μɛ) (C) Maximaler Hauptdehnung (E Max. P., μɛ). FE-Modell-Simulation der maximalen und minimalen Hauptstämme bei Kieferöffnung. (D - K): Die maximale Hauptdehnung (. E Max P., μɛ) in (D) ventralen Kiefer Sicht und (E) ventralen Gelenkansicht (E) zeigt Lage von proximal-distalen Abschnitte durch den Knorpel Meckel Gelenk und das Interzonen in (E &#39;) und (E&#39; &#39;), respectively. (F): seitlichKiefer-Ansicht. (G): Lateralgelenk Ansicht. (H - K): minimale Hauptstamm (. E Min P, μɛ) in (H) ventralen Kiefer Sicht und (I) ventralen gemeinsamen Ansicht. (I) zeigt Lage der proximal-distalen Abschnitte durch den Knorpel Gelenk Meckel und interzone in (I &#39;) und (I&#39; &#39;) bzw. (J): seitliche Kieferansicht. (K): Lateralgelenk Ansicht. Diese Zahl wurde veröffentlicht früher al in Brunt et. 15. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54811/54811fig5large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier</a> , um <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54811/54811fig5large.jpg" target="_blank">eine größere Version dieser Figur zu sehen.</a> <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td></td><td> Anzahl der Muskelfasern </td><td> Muskelfaserbereich (um 2) </td><td> Muskelgruppe Bereich (&amp; mgr; m2) </td><td> Force (N) </td></tr><tr><td> 5 dpf intermandibularis anterioren </td><td> 5 </td><td> 23.8 </td><td> 119 </td><td> 4.76e-6 </td></tr><tr><td> 5 dpf Winkelmesser hyoideus </td><td> 6 </td><td> 23.8 </td><td> 142,8 </td><td> 5.71e-6 </td></tr><tr><td> 5 dpf Adduktoren mandibulae </td><td> 9 </td><td> 23.8 </td><td> 214,2 </td><td> 8.57e-6 </td></tr></tbody></table> Tabelle 1: Muskel - Quantifizierung. Durchschnittliche Muskelkräfte für die Intermandibularis Anterior, Adduktoren mandibulae und Protractor Hyoideus bei 5 dpf unter Verwendung von 40 nN / &amp; mgr; m 2 (Wert pro Flächeneinheit von Referenz 17 genommen) berechnet. (Lorga et al., 2011) (n = 3).

Die Finite-Elemente-Analyse ist ein häufig verwendetes Werkzeug, um die mechanische Leistung von Strukturen unter Last zu untersuchen. Hier wenden wir seine Verwendung an, um die Biomechanik des Kiefers des Zebrafisches zu modellieren.

Der Aufbau Finite-Elemente-Modelle zu Zebrabärbling Jaw Biomechanik Untersuchen

Skeletal morphogenesis occurs through tightly regulated cell behaviors during development; many cell types alter their behavior in response to mechanical ...

Das übergeordnete Ziel dieser Modellierungstechnik besteht darin, die mechanische Umgebung nachzuahmen, der sich sich entwickelnde Zebrafisch-Kiefer ausgesetzt sehen. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen im Bereich des Bewegungsapparats zu beantworten, beispielsweise: Wie verändern sich die Muster mechanischer Belastung im Laufe der Zeit? Und wie beeinflussen diese Belastungen das Zellverhalten?Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie es uns ermöglicht, Muster der Genexpression und Veränderungen im Zellverhalten im Kontext der mechanischen Umgebung zu analysieren. Diese Methode kann Einblicke in die Skelettentwicklung liefern. Außerdem kann sie auf jede andere biologische Struktur angewendet werden, die mechanischer Belastung ausgesetzt ist, wie beispielsweise die Skelettelemente höherer Wirbeltiere oder das kardiovaskuläre System.Im Allgemeinen können Personen, die neu in dieser Methode sind, Schwierigkeiten haben, da die Terminologie und die Software Grundkenntnisse aus dem Ingenieurwesen voraussetzen. Um die Form der Skelettelemente sichtbar zu machen, die Muskulatur zu quantifizieren und die genaue Lage der Muskelansätze zu bestimmen, führen Sie eine Immunfärbung des Fisches im geeigneten Entwicklungsstadium für skelettäre Myosin und Typ-II-Kollagen durch. Fixieren Sie zunächst ein Fischlarvenexemplar eine Stunde lang in 4 % Paraformaldehyd und PBS.Anschließend den Fixansatz durch zwei PBT-Spülungen entfernen. Danach die Larve fünf Minuten lang in 50 % Methanol und PBT dehydrieren, gefolgt von fünf Minuten in 100 % Methanol. Die Larven können dann bei Bedarf in 100 % Methanol aufbewahrt werden.Falls erforderlich, die Larve fünf Minuten lang in 50 % Methanol und PBT rehydrieren. Anschließend fünf Minuten in PBT waschen. Danach die Larve mit 0,25 % Trypsin in PBT fünf bis sechs Minuten lang auf Eis permeabilisieren.Waschen Sie es anschließend fünf Minuten lang in PBT und wiederholen Sie den PBT-Waschschritt dreimal. Vor der Antikörperanwendung blockieren Sie die Larve zwei bis drei Stunden lang in 5 % Serum und PBT. Inkubieren Sie die Larve dann in der empfohlenen Verdünnung von Kaninchen-Anti-Typ-II-Kollagen- und Maus-Anti-Myosin-Antikörpern mit 5 % Serum und PBT.Führen Sie diese Inkubation eine Stunde bei Raumtemperatur oder über Nacht bei vier Grad Celsius durch. Nach der Applikation der primären Antikörper waschen Sie die Larve insgesamt sechs Mal mit PBT, jeweils 15 Minuten pro Waschgang. Nach den PBT-Waschungen wenden Sie eine Blockierung mit 5 % Serum in PBT für ein oder zwei Stunden an.Jetzt die sekundären Antikörper auftragen und anschließend die Probe so weit wie möglich vor Licht schützen. Verwenden Sie fluoreszenzmarkierte sekundäre Antikörper gegen Maus und Kaninchen in 5 % Serum und PBT. Nach dem Auftragen der sekundären Antikörper das Larvenpräparat sechsmal mit PBT waschen, wobei jede Waschung 10 Minuten dauert.Jede Larve, die wie beschrieben angefärbt ist oder fluoreszierende Markierungen exprimiert, kann nun wie folgt mit einem konfokalen Mikroskop abgebildet werden. Erstellen Sie einen konfokalen Bildstapel der Region von Interesse mithilfe des 10x-Objektivs mit etwa 2,5facher digitaler Vergrößerung. Regen Sie den grünen und roten Kanal mit einem 488-Nanometer-Laser bzw. einem 561-Nanometer-Laser an.Nehmen Sie anschließend 512-Quadrat-Pixel-Bilder mit einem Z-Ebenen-Intervall von 1,3 Mikrometern und drei Zeilenmittelwerten auf. Etwa 100 Z-Schnitte füllen den Stapel aus. Exportieren Sie die Daten als TIFF-Bildstapel.Öffnen Sie den TIFF-Bilddatenstapel und betrachten Sie alle Kanäle in der entsprechenden Software. Klicken Sie mit der rechten Maustaste auf den Knorpelkanal, wählen Sie Orthoslice und erstellen Sie diese. Klicken Sie dann erneut mit der rechten Maustaste auf den Knorpelkanal und wählen Sie Bildverarbeitung, Glätten und Rauschunterdrückung, wählen Sie den Bildfilter aus und aktivieren Sie die Gaußsche Glättung.Klicken Sie in der Projektansicht mit der rechten Maustaste auf das gefilterte Bild und wählen Sie „Bildsegmentierung“ und anschließend „Neues Etikett bearbeiten“. Erstellen Sie ein neues Etikett für jedes Material, beispielsweise Knorpel und Gelenk. Wählen Sie dann mithilfe des Zauberstab-Werkzeugs bei aktivierter Option „Alle Schichten“ den Knorpelbereich des Bildes aus und verwenden Sie das Pinselwerkzeug, um Rauschen aus den Konturen zu entfernen.Wählen Sie als Nächstes den Gelenkbereich mit dem Pinselwerkzeug aus und weisen Sie ihn der Gelenkkomponente zu; wiederholen Sie diesen Schritt entlang des gesamten Gelenks. Um mehrere Schnitte gleichzeitig zu glätten, wählen Sie im oberen Menü Segmentation und anschließend Smooth labels. Um anschließend eine 3D-Oberflächenrekonstruktion der Komponente zu erzeugen, klicken Sie mit der rechten Maustaste auf das Bild und wählen Sie Generate Surface.Klicken Sie nun auf die gerenderte Oberfläche und speichern Sie die Daten als HMASCII-Datei für die Meshing-Software. Die Erzeugung eines 3D-Netzgerüsts ist ein entscheidender Schritt bei der Erstellung eines guten Modells. Es ist ein Kompromiss erforderlich zwischen einem Netz, das die tatsächliche Form der zu modellierenden Struktur genau wiedergibt, und der Vermeidung von zu vielen Details, die problematische Elemente verursachen könnten, beispielsweise solche mit zu kleinen oder zu großen Winkeln.Um das Netz zu erstellen, importieren Sie das 3D-Modell in ein geeignetes Softwarepaket. Um ein zweidimensionales Netz der Knorpel- und Gelenkflächen zu erzeugen, verwenden Sie das Shrinkwrap-Werkzeug im 2D-Menü. Wählen Sie eine Elementgröße zwischen 1,5 und 2,5.Es können Oberflächen-Netze verschiedener Größe erstellt werden, um eine 3D-Netz-Optimierung durchzuführen. Um sicherzustellen, dass das Netz zwischen den Gelenk- und Knorpeloberflächen kontinuierlich ist, müssen alle Elemente an der Grenzfläche gemeinsame Knoten aufweisen. Um dies zu erreichen, entfernen Sie die innere Oberfläche des Gelenks, sodass ein hohler Schlauch übrig bleibt.Verwenden Sie die Funktionstaste F2, um auf die Verknüpfung zum Menü „Elemente löschen“ zuzugreifen. Wählen Sie die zu löschenden Elemente aus. Passen Sie die Randknoten an, um sie der Knorpeloberfläche anzupassen.Verwenden Sie eine Kombination der Funktionstasten F2, F3 und F6, um Knoten zu löschen, zu verschieben und neue Elemente zu erstellen. Kopieren Sie abschließend die Knorpeloberfläche am Gelenk mithilfe des Menüs „Collector organize components“. Nutzen Sie die Funktionstaste F2, um alle nicht zum Gelenk gehörenden Elemente zu löschen.Anschließend führen Sie Qualitätsprüfungen durch, indem Sie zum Bereich „Elemente prüfen“ wechseln. Überprüfen Sie das Netz auf doppelte Elemente, Einfügungen und Durchdringungen. Falls solche gefunden werden, bearbeiten Sie diese mithilfe des Reiters „Werkzeuge“.Überprüfen Sie Diederwinkel mithilfe der im Modellbaum verfügbaren Dienstprogramm-Registerkarte. Um ein 3D-Netz aus 2D-Oberflächennetzen mit unterschiedlichen Elementgrößen zu erzeugen, verwenden Sie das Tetramesh-Werkzeug. Vergleichen Sie verschiedene Netzgrößen und wählen Sie das FE-Modell mit der kleinsten Netzgröße aus, das nach weiteren Simulationen konvergiert und die Merkmalsdefinition nicht beeinträchtigt.Verwenden Sie als Nächstes das Distanz-Werkzeug, um das Netz so zu transformieren, dass das Kiefermodell maßstabsgetreu ist. Stellen Sie sicher, dass Knorpel- und Gelenkbestandteile im Modell verbunden sind, indem Sie ein zusammengeführtes Modell exportieren oder Verbindungen verwenden. Wenden Sie anschließend Lasten, Randbedingungen und Materialeigenschaften auf das FE-Modell an, um die Kieferfunktion zu simulieren.Definieren Sie anhand der markierten konfokalen Stapel die Muskeln. Weisen Sie zunächst Knoten zu, die den Muskelansatzpunkten entsprechen. Erstellen Sie danach Vektoren zwischen den Knoten, die Ursprung und Ansatz jedes Muskels darstellen.Nachdem alle Muskeln definiert wurden, erstellen Sie einen History-Loadcollector und weisen Sie jedem Muskel eine Cload zu. Geben Sie die Größe in Newton an und weisen Sie den zugehörigen Vektor zu. Weisen Sie anschließend geeignete elastische isotrope Materialeigenschaften zu, wie sie in der Literatur festgelegt sind.Erstellen Sie als Nächstes einen Randbedingungs-Loadcollector und legen Sie einige Anfangsbeschränkungen für das Modell fest. Wählen Sie die Knoten aus, die eingeschränkt werden sollen, und selektieren Sie einen Freiheitsgradfaktor, der dem natürlichen Bewegungsbereich des von diesen Knoten definierten Muskels entspricht. Erstellen Sie nun einen Lastschritt für jede Art von Bewegung, die simuliert werden soll.Wählen Sie im Analysemenü alle relevanten Lasten und Randbedingungen aus, um die vorgegebene Bewegung zu simulieren. Wählen Sie anschließend „statisch“ aus dem Dropdown-Menü. Wenn Sie bereit sind, exportieren Sie das Modell in einem geeigneten Dateiformat, einschließlich des Netzes, der Lasten, der Randbedingungen und der Materialeigenschaften.In diesem Fall wird das INP-Format gewählt. Anschließend das Modell in die FE-Analyse-Software laden. Dort einen Job für das Modell erstellen und ausführen sowie die Ergebnisse hinsichtlich Spannung, Dehnung, Verschiebung und dergleichen analysieren.Wählen Sie drei bis sechs transgene Zebrafischlarven aus und betäuben Sie die Larven leicht mit 0,02 % MS-222, bis sie nicht mehr auf Berührung reagieren, aber ihr Herz weiterhin schlägt. Anschließend montieren Sie die Larven seitlich auf Deckgläsern in lauwarmem, 1 %igen Agarose mit niedrigem Schmelzpunkt in Danieau-Lösung. Entfernen Sie danach vorsichtig mit einer Pinzette die Agarose um Kopf und Kiefer herum.Danach frischen Danieau-L&ouml;sung mit einer Pasteur-Pipette &uuml;ber den Kopf der Larve sp&uuml;len, um das An&auml;sthetikum zu entfernen. Dies solange durchf&uuml;hren, bis die normale Mundbewegung wieder einsetzt. Verwenden Sie nun eine Videoaufnahme-Software, um fluoreszierende Hochgeschwindigkeitsvideos der Mundbewegungen aufzunehmen.Filmen Sie mit der höchsten Bildrate so lange, wie nötig, um mehrere Kieferöffnungszyklen aufzuzeichnen. Analysieren Sie anschließend die maximale Auslenkung des Kiefers. Wählen Sie die Einzelbilder aus, in denen der Kiefer am weitesten geöffnet ist, und messen Sie den Abstand zwischen der vorderen Spitze der Meckel-Knorpel und dem Oberkiefer.Der Punkt des Oberkiefers entspricht der Spitze der Siebplatte. Eine Immunfärbung für Muskulatur und Knorpel oder die Abbildung von transgenen Reportern ermöglicht es, die dreidimensionale Struktur des Kiefers zusammen mit der zugehörigen Muskulatur sichtbar zu machen. Durch die hochauflösende Abbildung konnte ein Modell erstellt werden, das die dreidimensionale Form des Kiefers erfasst.Das Modell beinhaltet Lasten, deren Platzierung und Größe aus den konfokalen Aufnahmen von Muskel und Knorpel abgeleitet wurden. Anhand dieses Modells wurden verschiedene Materialeigenschaften getestet. Unter Verwendung der in vivo beobachteten Verschiebungen, die mittels Hochgeschwindigkeitsvideografie erfasst wurden, wurde ein Modell ausgewählt, das den Bewegungsumfang am besten repliziert.Unter Verwendung der präzisesten Materialeigenschaften, Lasten und Daten zur Netzgeometrie wurde das FE-Modell genutzt, um die genauestmögliche Abschätzung des mechanischen Umfelds zu ermitteln, das während dieses Zeitraums vorherrschte. Beispielsweise wurden die Größenordnungen der Spannung gemessen. Das Modell kann vergrößert werden, um feine Details des Musters zu erkennen, und anschließend in digitalen Schnitten betrachtet werden, um die Details in allen Dimensionen zu untersuchen.Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, werden Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie man die konfokale Bildgebung nutzt, um ein physiologisch genaues 3D-Modell einer biologischen Struktur unter mechanischer Belastung zu erstellen. Bei der Durchführung dieses Verfahrens ist es wichtig zu bedenken, dass es sich um ein lineares, elastisches Modell handelt und dass Knorpel sich nicht vollständig wie ein lineares Material verhält. Andere Materialeigenschaften, wie beispielsweise die Permeabilität, können einbezogen werden, erfordern jedoch möglicherweise weitere Modifikationen am Netz.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Developmental Biology

Entwicklungsbiologie

Der Zebrafisch Oberkiefer Barbe ist ein integumentary Sinnesorgan mit ektodermalen, mesodermalen und Neuralleiste Derivate. Wichtig ist, dass die erwachsenen Barben nach proximal Amputation zu regenerieren. Dieses Video stellt Oberkiefer Barben Entwicklung und zeigt eine chirurgische Protokoll, um die Regeneration zu induzieren, durch Sammlung, Einbett-und nachgelagerten Bildgebung von Barben Exemplare folgten.

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Zeitraffer-konfokale Bildgebung ist eine leistungsstarke Technik zur Charakterisierung der embryonalen Entwicklung. Hier beschreiben wir die Methodik und zu charakterisieren kraniofazialen Morphogenese in Wildtyp-als auch PDGFRA, Smad5 und SMO mutierten Embryonen.

Analyse Craniofacial Morphogenese in Zebrafisch Mit 4D konfokale Mikroskopie

Die Zebrafischembryo ist ein hervorragendes Modell für Entwicklungsbiologie Forschung. Während der Embryogenese entwickeln Zebrafisch mit einem Dottermasse, die dreidimensionale Herausforderungen für die Proben Beobachtung und Analyse präsentiert. Dieses Protokoll beschreibt, wie man zweidimensionale Flachmontage Zubereitungen der ganze Berg in situ (WISH) gefärbt Zebrafischembryo Proben erstellen.

Wohnung Berge Vorbereitung für Beobachtung und Analyse der Zebrafisch-Embryo Proben von Bunt Ganze Berge<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisierung

Der Zebrafisch ist ein hervorragendes Modellsystem für genetische und Entwicklungsstudien. Die Bead-Implantation ist eine wertvolle Gewebemanipulationstechnik, die verwendet werden kann, um Entwicklungsmechanismen zu untersuchen, indem Veränderungen in der lokalen zellulären Umgebung eingeführt werden. Dieses Protokoll beschreibt, wie die Implantation von Mikrokügelchen im Zebrafischembryo durchgeführt wird.

Microbead Implantation im Zebrafischembryo

Das Ziel dieses Protokolls ist es, die Penetranz der letale Skelett mutierte Phänotypen im Zebrafisch durch selektive Zucht zu ändern. Letale Mutanten können nicht bis ins Erwachsenenalter angebaut werden und selbst gezüchtet, daher dieses Protokoll beschreibt eine Methode für die Verfolgung und Penetranz über mehrere Generationen von Nachkommen Tests auswählen.

Verschiebung der Zebrafisch letale Skelett mutierte Penetranz um Nachkommen testen

Hier beschreiben wir 3 Erwachsene Zebrafisch-Verletzung-Modelle und ihre kombinierte Nutzung mit immunsuppressiven medikamentösen Behandlung. Wir betreuen über Bildgebung Gewebe zu regenerieren und Mineralisierung der Knochen darin erkennen.

Erwachsenen Zebrafisch Verletzungen Modelle zur Untersuchung der Auswirkungen von Prednisolon bei der Regeneration von Knochengewebe

Dieses Protokoll beschreibt die Entnahme und Visualisierung von elasmoiden Schuppen von Zebrafischen während der in vivo Regeneration. Darüber hinaus wird die ex vivo Kultur dieser Schuppen für bis zu 7 Tage nach der Ernte vorgestellt.

Regeneration von Zebrafischschuppen in Toto- und Ex-vivo-Schuppenkultur

Dieses Protokoll bietet eine Methode zur Untersuchung der zellulären Dynamik mit einer einfachen In-vitro-Kulturtechnik . Es bietet Zebrafischforschern und Pädagogen die Möglichkeit, zelluläre Prozesse, wie z. B. solche, die mit der Knochenhomöostase und der grundlegenden Zellbiologie zusammenhängen, zu untersuchen, indem fluoreszierende Zellkerne und apoptotische Zellen innerhalb der Skalen sichtbar gemacht werden.

In-vitro-Kultivierungstechnik zur Untersuchung der zellulären Dynamik in Zebrafischschuppen

Das hier beschriebene Protokoll stellt ein einfaches und leicht verständliches Verfahren zum Färben und Präparieren von kraniofazialen Knorpeln bei einer 5 Tage alten Zebrafischlarve dar. Es kann verwendet werden, um die Anatomie, Form und Größe dieser Strukturen unter verschiedenen Entwicklungsbedingungen zu untersuchen.

Dissektion von kraniofazialem Gewebe von Zebrafischen nach Färbung mit Alcian Blue

Diese Arbeit beschreibt ein Protokoll zur Quantifizierung der Kraniofacialform von Knorpelform mithilfe freier Software (tpsDigs2, MorphoJ und PAST), um Veränderungen der Gesichtsstruktur bei Zebrafischlarven zu messen.

Morphometrische Formanalysen: Die Analyse-Software-Werkzeugkaste zur Quantifizierung kraniofacialer Form bei Zebrafischen

Lernen Sie die Finite-Elemente-Analyse zur Simulation der mechanischen Umgebung von sich entwickelnden Zebrabärbling-Kiefern. Diese Methode ermöglicht Einblicke in Skelettentwicklung und Zellverhalten unter mechanischer Belastung.

Der Aufbau Finite-Elemente-Modelle zu Zebrabärbling Jaw Biomechanik Untersuchen

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