Orthotopen Eierstock Transplantationsverfahren zu untersuchen, die Gesundheit und Lebensdauer Einfluss der Eierstöcke Seneszenz bei weiblichen Mäusen

Das übergeordnete Ziel dieser Verfahren ist es, den Einfluss des reproduktiven Alterns von dem chronologischen Altern bei Frauen zu trennen. Diese Methode kann dazu beitragen, wichtige Fragen im biomedizinischen Bereich zu beantworten, z. B. wie die Signale der Eierstöcke von jungen Eierstöcken gesunde junge Frauen bewahren und die Gesundheit von Frauen in den Wechseljahren wiederherstellen. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass wir Komponenten der ovariellen Signalübertragung von einem jungen, gesunden Tier auf ein älteres Tier übertragen können, das seine junge Signalgebung verloren hat.

Die Implikationen dieser Technik erstrecken sich auf die Therapie von altersbedingten Krankheiten. Da viele dieser Krankheiten bei alten Mäusen durch die Wiederherstellung der Signalübertragung der jungen Eierstöcke vermieden werden können. Obwohl diese Methode Aufschluss über die mit der Menopause verbundene Zunahme der Krankheit geben kann, kann sie auch auf andere Krankheiten angewendet werden, z. B. auf solche, die mit primärer oder sekundärer Ovarialinsuffizienz verbunden sind.

Bestätigen Sie vor Beginn des Eingriffs den entsprechenden Sedierungsgrad durch Zehenkneifen. Und tragen Sie Salbe auf die Augen des Tieres auf. Legen Sie die Maus in Rückenlage auf einen Stapel erhitzter Papiertücher und beginnen Sie knapp unter den Rippen und bewegen Sie sich distal mit einer Haarschneidemaschine mit der Klinge Nummer 40, um ein zwei bis drei Zentimeter großes Quadrat Haar zu entfernen, einige Millimeter lateral zur Mittellinie auf jeder Seite des Tieres, mit einem ein bis zwei Zentimeter großen Haarstreifen, der die Mittellinie bedeckt.

Nach der Verabreichung der Analgesie das Tier in Rückenlage auf ein beheiztes, steriles Operationsfeld bringen und mit einem zwei mal zwei Zentimeter großen Stück 70%ig ethanolgetränkter Gaze gefolgt von einem Betadine den Operationsbereich desinfizieren. Machen Sie dann einen ein bis 1,5 Zentimeter großen paralumbalen Schnitt in einem der Operationsbereiche und verwenden Sie eine Schere, um die Haut von der darunter liegenden Faszie abzustumpfen. Machen Sie dann einen weiteren Schnitt durch die Faszie und stumpfen Sie seitlich so oberflächlich wie möglich unter der Faszie hindurch, bis die Bauchhöhle erreicht ist.

Legen Sie ein zwei mal zwei Zentimeter großes chirurgisches Mulltuch über den Schnitt und befeuchten Sie die Gaze mit steriler Kochsalzlösung. Lokalisieren Sie mit einer kleinen Pinzette das Fettgewebe, das den Eierstock umgibt, und ziehen Sie das Fettpolster und den Eierstock vorsichtig auf das Tuch. Das Fettpolster der Eierstöcke erscheint weißer als das umgebende Fettgewebe.

Platzieren Sie eine 1,5-Zoll-Bulldog-Klemme auf dem Fettpolster und achten Sie darauf, den Schleimbeutel der Eierstöcke nicht zu blockieren, um den Trakt während des Eingriffs an Ort und Stelle zu halten. Verwenden Sie ein Präpariermikroskop, um den Schleimbeutel der Eierstöcke zu identifizieren. Fassen Sie dann den Schleimbeutel mit zwei Uhrmacherzangen und schneiden Sie den Schleimbeutel auf der gegenüberliegenden Seite des Ovarialhilums ein, um den Eierstock freizulegen.

Bevor Sie entscheiden, wo Sie den Schleimbeutel öffnen möchten, versuchen Sie, sich eine Tasche im Schleimbeutel vorzustellen, in der Sie den neuen Eierstock vor dem Nähen platzieren werden. Öffnen Sie den Schleimbeutel nur so weit, wie es für die Entnahme des körpereigenen Eierstocks erforderlich ist. Entfernen Sie vorsichtig den Eierstock aus dem Schleimbeutel und klemmen Sie den Ovarialhilum mit einer Uhrmacherzange fest, um den Eierstock herauszuschneiden und Blutungen zu vermeiden.

Legen Sie dann den Spender-Eierstock in ein Uhrenglas mit vier Grad Celsius steriler Kochsalzlösung und legen Sie eine lose Abdeckung über das Glas. Nach der Ovariektomierung der Empfängermaus, wie gerade gezeigt, legen Sie ein kleines Stück hämostatisches Schaumstoffpolster in die leere Schleimbeutel des Empfängertieres, um die Blutung zu kontrollieren, und legen Sie ein kleines Stück mit Kochsalzlösung getränkte Gaze über die freiliegende Operationsstelle. Füllen Sie einen Castroviejo-Nadelhalter mit einer konischen Nadel, die mit einer Filamentnaht von neun O oder 10 O und einer Glasperle zum Einbetten versehen ist.

Mit einer zweiten Uhrmacherzange wird gleichzeitig die Gaze und das Schaumstoffpolster aus dem Schleimbeutel des Empfängers entfernt. Nehmen Sie dann die Glasperle mit einer Bishop-Harmon-Pinzette auf und lassen Sie die Perle auf das Fettpolster neben dem Schleimbeutel fallen, damit die Perle in den Schleimbeutel eingerollt werden kann. Wenn die Perle endlich an Ort und Stelle ist, verschließen Sie den Schleimbeutel mit ein bis zwei Halsted-Nähten und spülen Sie die Stelle leicht mit steriler Kochsalzlösung.

Nachdem Sie die Fettpolsterklemme entfernt haben, bringen Sie den Eierstock und das Fettpolster wieder in den Bauch zurück. Möglicherweise müssen Stay-Nähte gelegt werden, um den Eierstock für die Untersequenzplatzierung von Nähten zum Verschluss des Schleimbeutels zu positionieren. Verwenden Sie dann Vicryl-Nähte, um die Bauchdecke zu schließen, und neun Millimeter lange Wundclips, um die Haut zu schließen.

Schließlich das Tier in einem beheizten, lichtgeschützten Aufwachkäfig mit Überwachung bis zur vollständigen Genesung. Postreproduktive weibliche Mäuse, die neue Eierstöcke erhalten, leben signifikant länger als Mäuse, die sich einer Scheinoperation unterziehen. Es wird kein Unterschied zwischen Eierstöcken festgestellt, die im Alter von 11 oder 17 Monaten transplantiert wurden.

Durch die Erschöpfung der Keimzellen vor der Transplantation verdoppelt sich jedoch die Verlängerung der Lebensdauer. Die mittlere Lebensdauer von weiblichen CDAG-Kontrollmäusen beträgt 644 Tage. Mäuse, die sich im Alter von 11 Monaten einer Scheinoperation unterzogen, erreichten ein Durchschnittsalter von 728 Tagen.

Azyklische intakte Mäuse leben durchschnittlich 810 Tage, wenn sie im Alter von 11 Monaten transplantiert werden. Und 798 Tage bei einer Transplantation im Alter von 17 Monaten. Wenn die jungen Eierstöcke vor der Transplantation von Keimzellen befreit werden, verlängert sich die mittlere Lebensdauer auf 880 Tage, doppelt so lange wie bei Mäusen, die junge Keimzellen mit Eierstöcken erhalten.

Bei der VCD-Behandlung werden primodiale und primäre Follikel erschöpft. Die verbleibenden Sekundär- und Antralfollikel zirkulieren dann und werden nicht ersetzt, wodurch der Eierstock von allen Keimzellen erschöpft wird. Zum Beispiel zeigen in diesem repräsentativen Experiment Eierstöcke, die 37 Tage nach Beginn der VCD-Behandlung von Mäusen entnommen wurden, signifikant depletierte primordiale und primäre Ovarialfollikel im Vergleich zu Eierstöcken bei Kontrolltieren.

Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie die Eierstockfunktion manipulieren können, um die Trennung von reproduktivem Altern und chronologischem Altern zu erleichtern und den separaten Einfluss beider auf die Langlebigkeit und Gesundheitsspanne zu identifizieren.