Intraportal Transplantation der Bauchspeicheldrüse Inselchen im Mausmodell

Pankreatischen inselversetzung ist eine Möglichkeit, Normoglycemia bei Diabetes Typ 1 zu erreichen. Dieser Artikel konzentriert sich auf die Transplantation-Technik durch die intraportal Route weiterhin normale Blutzuckerwerte bei diabetischen Mäusen.

Ich bin Thomas Linn, Leiter der Forschungsgruppe Diabetes an der Justus-Liebig-Universität Gießen. Die Inseltransplantation der Bauchspeicheldrüse ist eine Behandlung von Typ-1-Diabetes mellitus. Die experimentelle Inseltransplantation wird in die Nierenkapsel durchgeführt, während klinische Programme den intraportalen Weg bevorzugen.

Daher glauben wir, dass mehr Forschung zur intraportalen Inseltransplantation in präklinischen Modellen erforderlich ist. Zum Beispiel Inselzellen, die Blut ausgesetzt sind, da die Transplantationsstelle intravaskulär ist. Darüber hinaus erfordert die mikrochirurgische Technik etwas Erfahrung.

Zum Beispiel kann es nach der Injektion der Pfortader zu Blutungen kommen, oder es kann Probleme mit der Anästhesie oder mit der Aufrechterhaltung des Körpergewichts der Empfängermaus geben. Daher sind wir der Meinung, dass eine visuelle Erklärung des Verfahrens von entscheidender Bedeutung ist. Dieses Video konzentriert sich auf den intraportalen Weg der Inseltransplantation.

Um eine normale Glykämie bei diabetischen Mäusen zu erreichen, kann es für die syngene und allogene Transplantation bei schwarzen Mäusen, aber auch in syngenen Modellen bei Nacktmäusempfängern verwendet werden. Nehmen Sie die isolierten Inselzellen aus dem Inkubator und stellen Sie sie unter eine Strömungsbank. Zentrieren Sie die Inselchen mit einer kreisförmigen Schwingbewegung der Petrischale.

Füllen Sie 100-Mikroliter-Medium mit Hilfe der blauen Nadel in eine Ein-ml-Spritze. Fügen Sie dann 350 Inselzellen in 300 Mikroliter Hank's Solution hinzu. Halten Sie die Spritze in einer vertikalen Position, damit sich die Inseln absetzen können.

Verringern Sie das Volumen auf 50 Mikroliter. Ersetzen Sie die blaue Nadel durch die braune Nadel. Geben Sie in dieselbe Spritze 150 Mikroliter Dichtegradientenmedium nach oben, um das endgültige Volumen von 200 Mikrolitern in der Spritze zu erreichen.

Vermeiden Sie die Luftblasen. Halten Sie die Spritze in vertikaler Position. Drehen Sie es leicht, um das Verklumpen der Inselchen zu vermeiden.

Die Inselzellen setzen sich innerhalb von zwei bis drei Minuten am Spritzenkegel ab. Überprüfen Sie nach dreitägiger Streptozotocin-Injektion den Blutzuckerspiegel, indem Sie die Schwanzvene mit Hilfe eines tragbaren Glukosemessgeräts punktieren. Betäuben Sie die Mäuse mit Dalzylozin und Ketamin durch intraperitoneale Injektion.

Legen Sie die Mäuse in Rückenlage auf eine warme Thermoplatte. Überprüfen Sie die Tiefenanästhesie, indem Sie den Zeh einklemmen. Reinigen Sie die Haut mit einem hautlosen Infektmittel.

Um ein Austrocknen der Augen zu verhindern, halten Sie sie mit Augensalbe feucht. Beginnen Sie mit der Elektrotomie, indem Sie die Haut mit einer Pinzette festhalten und mit einer Schere einen zwei bis drei Zentimeter langen Mittelschnitt machen. Lege eine sterile, feuchte Gaze um die Wundränder, um sie feucht zu halten.

Halten Sie den Darm links und außerhalb der Bauchhöhle. Bewegen Sie den Zwölffingerdarm und lokalisieren Sie die Bauchspeicheldrüse. Benutze einen Finger und einen Daumen, um die Pfortader freizulegen.

Injizieren Sie die Inselzellen in 200 Mikrolitern langsam in die Pfortader. Üben Sie den Druck mit dem Zeigefinger sechs Minuten lang auf die Einstichstelle aus, um die Blutung zu stoppen. Bringen Sie den Darm-Situs, das Peritoneum und die Bauchmuskelschicht vorsichtig wieder in diese Position.

Heben Sie mit einer Pinzette die Haut an, schließen Sie den Muskelschnitt und die obere Hautschicht mit einer resorbierbaren Seidennaht. Tragen Sie ein Wundheilmittel auf. Halten Sie die Körpertemperatur auf einer warmen Thermoplatte bei 37 Grad Celsius.

Beobachte die Maus, bis sie wieder zu ausreichend Bewusstsein kommt. Geben Sie Tramadol zusammen mit Flüssigkeit, um Schmerzen zu lindern. Nach der Transplantation von Inselzellen wurde am ersten Tag ein plötzlicher Abfall des Blutzuckerspiegels von 23 Millimolar pro Liter auf 4,6 Millimolar pro Liter bei Strepto-induzierten diabetischen Mäusen beobachtet.

Die normale Glykämie wurde bis zu 121 Tage lang aufrechterhalten. Das Körpergewicht und der Blutzuckerspiegel folgten in etwa dem gleichen Muster. Nach der Streptozotocin-Injektion und der Operation nahm das Körpergewicht ab; Ab dem zweiten Tag steigt er tendenziell in Richtung Normalwert an, von 25,3 Gramm auf 29,7 Gramm.

Bei Mäusen mit Major-Histokompatibilitäts-Mismatch nach einer Inseltransplantation sank der Blutzuckerspiegel auf 4,4 Millimol pro Liter und die normale Glykämie wurde bis zu 10 Tage lang beobachtet. Danach beginnt es abzulehnen. Auch das Körpergewicht von diabetischen Mäusen folgt einem ähnlichen Muster.

Bei erfolgreicher Transplantation von transplantierten Pankreasinseln in die Leber. In dieser Studie wird der intraportale Weg der Inseltransplantation untersucht. Dieses Protokoll ist hocheffizient bei der Linderung von diabetischem Stress und bietet eine eingehende Möglichkeit, die Inseltransplantation zu untersuchen.

Dieses Protokoll bestätigt, dass etwa 350 Inselzellen in der Lage sind, den hyperglykämischen Zustand umzukehren. Darüber hinaus starb keine der Mäuse während des Eingriffs, und die glykämische Kontrolle wurde aufrechterhalten.