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DOI: 10.3791/58651-v
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Dieses Protokoll beschreibt einen detaillierten Workflow für die Generierung und ex-Vivo Charakterisierung von onkolytische Viren für den Ausdruck von Immunmodulatoren, Masern-Viren Codierung bispezifische T Zelle Engagers als Beispiel verwenden. Anwendung und Anpassung an andere Vektor-Plattformen und transgene beschleunigt die Entwicklung von neuartigen Immunovirotherapeutics für klinische Übersetzung.
Diese Methode kann dazu beitragen, die wichtigsten Herausforderungen im Bereich der Krebsimmuntherapie zu bewältigen, indem sie die Entwicklung von onkolyktischen Vektoren für eine gezielte Immunmodulation erleichtert. Der Hauptvorteil des angewandten Reverse-Gensystems ist seine Vielseitigkeit; daher können Vektoren angepasst werden, um verschiedene Forschungsfragen zu adressieren und Tumoren mit unterschiedlichen Immunsignaturen anzusprechen. Die Virusausbreitungsschritte, insbesondere die Bestimmung des optimalen Zeitpunkts für die Ernte des Virus, sind von einem Textprotokoll schwer zu lernen, da die Synzytätsbildung im Laufe der Zeit visuell beurteilt werden muss.
Um mit dem Entwurf und klonen von rekombinanten immunmodulatorischen Vektoren zu beginnen, wie im Manuskript beschrieben. Dieses Protokoll beschreibt spezifische Schritte zur Entwicklung eines onkolytischen Masern-Impfstoffvektors, der einen bispezifischen T-Zell-Engager kodiert. Um das Masernvirus aus der cDNA zu retten, 24 Stunden vor der Transfektionsplatte produzieren Masernvirus-Produzentenzellen gleichmäßig auf einer 6-Wand-Platte.
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