Semi-Automated Isolation of the Stromal Vascular Fraction from Murine White Adipose Tissue Using a Tissue Dissociator

Kaede Saito; Yuta Hiraike; Misato Oguchi; Toshimasa Yamauchi

doi:10.3791/65265

Halbautomatische Isolierung der stromalen vaskulären Fraktion aus murinem weißem Fettgewebe mit H...

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Biology

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Semi-Automated Isolation of the Stromal Vascular Fraction from Murine White Adipose Tissue Using a Tissue Dissociator

Halbautomatische Isolierung der stromalen vaskulären Fraktion aus murinem weißem Fettgewebe mit Hilfe eines Gewebedissoziators

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06:08 min

May 19, 2023

DOI: 10.3791/65265-v

Kaede Saito^1,2, Yuta Hiraike^1,2,3, Misato Oguchi², Toshimasa Yamauchi²

¹Division for Health Service Promotion,The University of Tokyo, ²Department of Diabetes and Metabolic Diseases, Graduate School of Medicine,The University of Tokyo, ³The University of Tokyo Excellent Young Researcher Program,The University of Tokyo

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This study focuses on the semi-automated isolation of the stromal vascular fraction (SVF) from murine adipose tissue, with the aim of obtaining preadipocytes and promoting adipocyte differentiation in vitro. A novel protocol utilizing a tissue dissociator for collagenase digestion is presented, which enhances reproducibility and reduces experimental variation.

Key Study Components

Research Area

Adipocyte differentiation
Energy expenditure in obesity treatments
Murine models for metabolic research

Background

Different functions of brown, beige, and white adipocytes
Need for reproducible methods in adipocyte research
Identification of critical transcription factors regulating differentiation

Methods Used

Semi-automated isolation using collagenase digestion
Murine adipose tissue
Tissue dissociators and enzymatic assays

Main Results

Improved methods for isolating SVF and differentiating adipocytes
Successful differentiation demonstrated via Oil Red O staining and mRNA analysis
Investigation into the effects of Rosiglitazone on brown fat-specific gene expression

Conclusions

This protocol facilitates reliable SVF isolation for adipocyte differentiation.
The findings hold significant implications for obesity and diabetes research.

Frequently Asked Questions

What is the significance of the stromal vascular fraction in adipocyte research?

The SVF is crucial for isolating preadipocytes, which are necessary for studying adipocyte development and differentiation.

How does the tissue dissociator improve the isolation process?

It reduces variability and contamination during collagenase digestion, leading to more reproducible results.

What specific outcomes were measured to confirm adipocyte differentiation?

Outcomes included Oil Red O staining and mRNA expression levels of adipogenesis regulators.

What are the potential applications of the differentiated adipocytes?

They can be used for functional and mechanistic analyses, including oxygen consumption rate analysis.

How might this research contribute to obesity treatments?

By promoting energy expenditure rather than suppressing intake, new obesity treatments can be developed based on these findings.

What role does the transcription factor NFIA play in this study?

NFIA is identified as a critical regulator of adipocyte differentiation and metabolism.

Dieses Protokoll beschreibt die halbautomatische Isolierung der stromalen vaskulären Fraktion (SVF) aus murinem Fettgewebe, um Präadipozyten zu erhalten und eine Adipozytendifferenzierung in vitro zu erreichen. Die Verwendung eines Gewebedissoziators für den Kollagenaseverdau reduziert die experimentelle Variation und erhöht die Reproduzierbarkeit.

Wir interessieren uns für braune und beige Subtypen von Adipozyten, die Energie in Form von Wärme abführen, während weiße Adipozyten im Allgemeinen Energie speichern. Unser Ziel ist es, eine neue Behandlung für Fettleibigkeit und Diabetes zu entwickeln, die auf der Förderung des Energieverbrauchs und nicht auf der Unterdrückung der Energieaufnahme basiert. Wir haben einen Transkriptionsfaktor, NFI, als kritischen Regulator der Differenzierung von braunen Adipozyten durch eine genomweite offene Chromatinanalyse identifiziert. NFI und der Master-Transkriptionsregulator der Adipogenese, PPAR-gamma, kolokalisieren als braunfettspezifische Enhancer.

Bei der Isolierung der stromalen vaskulären Fraktion aus dem Fettgewebe der Maus kann das manuelle Zerkleinern und der Kollagenase-Verdau von Fettgewebe zu experimenteller Variabilität und Kontamination führen. Unsere Methode verwendet einen Gewebedissoziator für den Kollagenase-Aufschluss, der die SVF-Isolierung erleichtert, die experimentelle Variabilität und Kontamination reduziert und die Reproduzierbarkeit verbessert. Experimente mit individuell differenzierten Adipozyten sind für die Forschung auf unserem Gebiet unabdingbar.

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