Inyección ortotópica en la almohadilla de grasa mamaria: establecimiento del cáncer de mama en ratones

Los experimentos con animales se llevaron a cabo de acuerdo con la Disposición y la Recomendación General de la Legislación China de Administración de Animales de Experimentación y fueron aprobados por el Comité de la Institución de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad Médica de la Capital (Ref. AEEI-2014-052). Se utilizaron ratones Balb/c hembra de 6 a 8 semanas de edad.

1. Preparación de las células y los animales

1. Un día antes de la operación, afeita el vello alrededor del cuarto pezón para exponer el área de operación.
   1. Use una mano para sujetar el mouse firmemente en la parte posterior para asegurarse de que el mouse no se mueva libremente, gire el mouse para exponer su vientre al operador y luego use otra mano para afeitar el pelaje alrededor de los cuartos pezones con una afeitadora electrónica.
   2. Coloque una fina capa de crema depilatoria alrededor de los pezones durante 30 a 60 segundos, limpie la crema con agua destilada y luego seque el mouse con papel suave.
2. El día de la operación, recoja células de cáncer de mama murino (4T1-luc2), cuente el número de células y ajuste la densidad celular a 2 x 10⁵ células/ml en solución salina tamponada con fosfato (PBS) en tubos de microcentrífuga estériles y manténgalos en hielo. Para cada ratón, se prepara 1 x 10⁴ células/50 μL en una jeringa de 1 mL.

2. Inyección ortotópica

1. Anestesia de ratones
   1. Inducir la anestesia. Coloque los ratones en un recipiente transparente cerrado y encienda el gas isoflurano al 2% para anestesiar a los ratones durante unos 5 minutos, hasta que todos se acuesten y se duerman.
   2. Mantener la anestesia. Transfiera los ratones del recipiente a máscaras de anestesia individuales, coloque un poco de ungüento veterinario en sus ojos para evitar la sequedad, mantenga a los ratones en posición supina con los pezones expuestos al operador y deje que continúen inhalando gas isoflurano durante unos minutos hasta que se haya realizado la inyección.
   3. Confirme el éxito de la anestesia por la ausencia de un reflejo de retirada de pellizco del dedo del pie.
   4. Aplique ungüento oftálmico en los ojos de los ratones para prevenir la sequedad ocular.
      NOTA De acuerdo con el tamaño del envase y el número de mascarillas de anestesia individuales disponibles, se puede anestesiar a un grupo de ratones juntos e inyectarlos uno por uno bajo anestesia individual.
2. Rendimiento de la inyección
   1. Use una mano para cubrir la piel alrededor del cuarto pezón con pinzas, para establecer un "túnel" elevado para que la jeringa lo siga. Use la otra mano para sostener la jeringa con la aguja girada hacia arriba para ingresar a la piel por vía subcutánea a 5 - 10 mm del pezón; Luego, siga el "túnel" hasta que la punta de la aguja se acerque al pezón, mueva con cuidado la punta de la aguja hacia arriba en la almohadilla de grasa mamaria hasta que el ojo de la aguja pase por debajo de la punta del pezón, deseche las pinzas e inyecte las células lentamente.
   2. Gire un poco alrededor de la aguja y retraiga la jeringa lentamente; use un hisopo de algodón para presionar la herida de la aguja durante 10 a 20 segundos para asegurarse de que no haya filtraciones de líquido.
   3. Observe el cuarto pezón para confirmar que la inyección se ha realizado correctamente: se puede observar una esfera plana blanca transparente con el pezón como centro (Figura 1).
3. Mantenga a los ratones anestesiados durante un minuto más para evitar que los ratones se recuperen y se muevan demasiado rápido, lo que hará que la herida de la inyección se abra y las células tumorales se filtren.

Figura 1: Imágenes antes y después de la inyección ortotópica en la almohadilla de grasa mamaria de ratones Balb/c hembra. Se realizó la operación y las imágenes se tomaron mientras los ratones estaban bajo anestesia con isoflurano. A, antes de la inyección, B, después de la inyección.