Inyección intratorácica: administración de compuestos al corazón del pez cebra adulto

En este artículo

Resumen

Fuente: Bise, T., et al. Inyección intratorácica para el estudio del corazón del pez cebra adulto. J. Vis. Exp. (2019).

Este video describe la técnica de administrar compuestos en el corazón de un pez cebra adulto mediante inyección intratorácica.

Protocolo

1. Preparación del pez para la inyección intratorácica

Atrapa un pez cebra adulto (Danio rerio) con una red y transfiérelo a la solución anestésica.
Después de 1-2 minutos, cuando el pez deje de nadar y el movimiento del opérculo se reduzca, toque el pez con una cuchara de plástico para asegurarse de que no reaccione a ningún contacto.
Transfiera rápida y cuidadosamente el pescado con la cuchara a la ranura de la esponja húmeda, con la parte ventral hacia arriba. La cabeza del pez debe apuntar en dirección opuesta a la mano dominante del operador.

2. Microinyección en el pericardio

Bajo el microscopio estereoscópico, observe cuidadosamente el movimiento del corazón latiendo debajo de la piel del pez. Determine visualmente el punto de inyección por encima del corazón latiendo y en el centro del triángulo definido por las placas cartilaginosas ventrales (Figura 1D). Inserte la punta del capilar en un ángulo de 30-45° grados con respecto al eje del cuerpo (Figura 1E). Penetrar suavemente en la piel con la punta del microcapilar hasta el pericardio (Figura 1C). Un punto de entrada óptimo es más cerca del abdomen que de la cabeza.
nota: No inserte el capilar demasiado profundamente en el cuerpo y el corazón, ya que esto causará lesiones en el órgano. En caso de punción cardíaca, la aguja generalmente se llena de sangre. Si esto sucede, retire el capilar y excluya a los peces del experimento.
Una vez que la aguja esté dentro del pericardio, complete la inyección presionando el pedal del dispositivo de microinyector.
nota: Tenga cuidado de no inyectar aire en la cavidad torácica.
Después de la inyección, retire suavemente el capilar del tórax e inmediatamente transfiera a los peces a un tanque con agua del sistema para su recuperación.
Monitoree a los peces hasta la recuperación total de la anestesia.
Recoja el corazón en el punto de tiempo deseado y prepárelo para un análisis posterior.
nota: En caso de que el pez no reanude el movimiento del opérculo dentro de los 30 segundos, reanime al pez exprimiendo agua en las branquias con una pipeta de plástico.

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Resultados

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Figura 1: Inyección intratorácica (IT) en pez cebra adulto. (A) Fotografía de un capilar de microinyección estirado con filamento (6", 1,0 mm de diámetro) y valores del programa de extracción de aguja utilizado. (B) Fotografía de un capilar de microinyección estirado con filamento (6", 1,0 mm de diámetro) relleno con 2,5 μL de solución que contiene un 10% de rojo fenol. La punta tirada de la aguja tiene una longitud máxi...