Tratamiento con estreptozocina: un modelo de pez cebra con diabetes mellitus tipo 1

1. Generación de Pez Cebra con Diabetes mellitus, Pez DM

1. Prepare los tanques de agua de recuperación y anestésicos. El agua de recuperación es agua normal para peces. Para el agua anestésica, agregue suficiente 2-fenoxietanol para lograr una dilución de 1:1,000 en agua de pescado normal.
2. Prepare una solución al 0,3% (en una campana extractora) de estreptozocina (STZ) añadiendo 6 mg de STZ a 2 ml de cloruro de sodio al 0,09% y coloque inmediatamente la solución en hielo. Esto proporcionará suficiente solución inyectable para la inyección de aproximadamente 20 peces en 20 minutos. Si supera la marca de 20 minutos, deténgase y prepare una nueva solución STZ antes de continuar. En un tubo separado, alícuota, suficiente solución salina para los peces control. Una vez que se solubiliza la STZ, todos los pasos posteriores no requieren el uso de campana extractora.
3. Llene una jeringa de 1/2 cc equipada con una aguja de calibre 27 1/2 con la STZ o soluciones de control asegurándose de que no queden burbujas de aire atrapadas.
4. Anestesiar a cada pez individualmente colocándolo en agua anestésica y esperar hasta que cese su movimiento de natación (1-2 min).
5. Una vez anestesiado, coloque brevemente el pez sobre una toalla de papel para absorber el exceso de agua, coloque el pez en un bote de pesaje y mida la masa del pez.
6. Coloque el pescado sobre una superficie firme (tapa de la placa de Petri) para la inyección.
7. Inyecte la STZ o solución de control en la cavidad peritoneal del pez insertando la aguja más allá del bisel en la cara posterior del peritoneo ventral.
8. Se deben suministrar 0,35 mg/g (350 mg/kg) de STZ a cada pez y el volumen de la solución al 0,3% necesaria se puede calcular de la siguiente manera.
   1. Multiplique la masa de pescado (g) por 0,35 para obtener la cantidad de STZ en mg requerida.
   2. Divida el producto generado anteriormente por 3 para obtener el volumen de la solución al 0,3% requerida para la inyección en μl.
      Muestra: Para un pez de 0,5 g: a) 0,5 x 0,35 = 0,175 b) 0,0175/3= 0,058 ml = 58 μl.
      El mismo volumen sin la STZ se inyectaría para un pez control. Se debe generar una hoja para los volúmenes a inyectar por masa de peces y usarla como referencia rápida.
9. Después de la inyección, coloque a los peces en el tanque de agua de recuperación y controle su actividad normal de natación. Una vez que se ha logrado esto, los peces se transfieren a un tanque vivo normal que se mantiene en el rango de temperatura reducido de 22 °C a 24 °C. Esta temperatura reducida es crítica para la inducción eficiente de la hiperglucemia (diabetes mellitus, DM).
10. Aunque la hiperglucemia se detecta dentro de las 24 horas posteriores a la primera inyección, para inducir un estado prolongado de hiperglucemia muy alta, el pez cebra requiere una fase de inducción de inyección frecuente seguida de inyecciones de mantenimiento semanales, como se muestra a continuación.

Semana 1: 3 inyecciones (Día 1, 3, 5), Semana 2: 1 inyección (Día 12), Semana 3: 1 inyección (Día 19), Semana 4: (Día 21) Realizar el ensayo de interés.

En este punto, se considera que el pez cebra ha estado en un estado prolongado de hiperglucemia y presenta las complicaciones diabéticas de retinopatía, nefropatía y también deterioro de la regeneración de las aletas. Estos se conocen como peces DM. Además, si se desea, los peces pueden mantenerse en estado hiperglucémico con inyecciones de mantenimiento semanales. Se debe esperar que aproximadamente el 5% muera durante este proceso.