Inhibición del crecimiento de Aspergillus flavus y la producción de aflatoxina en transgénicos maíz expresando el inhibidor de la α-amilasa de Lablab purpureus L.

Contaminación por micotoxinas de los géneros de hongos, Alternaria , Aspergillus, Penicilliumy Fusariumes un problema importante de los alimentos y cultivos en todo el mundo^1,2,3. Entre estos hongos fitopatógenos, Aspergillus tiene el mayor impacto adverso en el valor de cultivos y salud humana y animal. Aspergillus flavus (A. flavus) es un patógeno oportunista de la planta que infecta cultivos ricos aceite tales como semilla de algodón, maíz y maní y produce el potente carcinógeno, aflatoxinas, así como numerosos metabolitos secundarios tóxicos (SMs). Maíz es un alimento importante y alimenta de cultivo en todo el mundo y es altamente susceptible a la contaminación por a. flavus. El impacto económico de la contaminación por aflatoxinas en pierde y valor reducido en el maíz puede ser tanto como $ 686,6 millones/año en los Estados Unidos² con los cambios previstos en el clima global, el impacto de las aflatoxinas podría resultar en mayores pérdidas económicas en maíz con estimaciones tan altas como $ 1,68 billones/año en el futuro cercano². Teniendo en cuenta los efectos adversos de la económicos y la salud de las aflatoxinas en los seres humanos y ganado, control de aflatoxinas antes de la cosecha de maíz podría ser la manera más eficiente para prevenir la contaminación por aflatoxinas en los alimentos y productos comestibles.

El enfoque de control previo a la cosecha principal de resistencia de aflatoxina en el maíz que se ha utilizado ampliamente en las últimas décadas es principalmente a través de la crianza, que requiere una cantidad significativa de tiempo⁴. Recientemente, el control biológico ha tenido cierto éxito en la reducción de aflatoxina en gran escala campo aplicaciones^5,6. Además de biocontrol, aplicación de vanguardia herramientas moleculares como 'Host inducida por el silenciamiento del gen"(HIGS) a través de RNAi y expresión transgénica de proteínas asociadas a resistencia ha tenido cierto éxito en la reducción del crecimiento de a. flavus y aflatoxina producción en estudios de laboratorio y de campo a pequeña escala. Estos enfoques están siendo optimizados actualmente además de identificar nuevos blancos potenciales del gene de a. flavus para la futura manipulación.

Además de genes que están directamente involucrados en la producción de micotoxinas como potenciales blancos de estrategias para el control transgénicos, amilasas fúngicas han demostrado jugar un papel crítico en mantener la producción exitosa de la patogenesia y micotoxinas durante las primeras etapas de la infección de la planta del anfitrión. Algunos ejemplos incluyen Pythium pleroticum (agente causal de la pudrición del rizoma de jengibre), Fusarium solani (agente causal de la marchitez de la coliflor), donde una correlación positiva entre la actividad y expresión de la patogenicidad y la α-amilasa se observaron ^7,8. Inhibición de la actividad de la α-amilasa por golpe de gracia del gene o enfoques precipitación afecta negativamente el crecimiento fungicida, producción de toxina. Un mutante de octavos de final de la α-amilasa de a. flavus fue incapaz de producir aflatoxinas cuando se cultiva en almidón sustrato o degermed granos de maíz⁹. Del mismo modo, en Fusarium verticillioides una cepa de octavos de final de la α-amilasa no fumonisina B₁ (micotoxinas) durante la infección de granos de maíz¹⁰. En un estudio más reciente, Gilbert et al., (2018) demostró que una basada en RNAi derribar de la expresión de α-amilasa de a. flavus a través de HIGS redujo significativamente el crecimiento y aflatoxina producción de a. flavus durante la infección del maíz núcleo¹¹ .

Inhibidores específicos de la actividad de la α-amilasa también han producido resultados similares, obtenidos de la abajo-regulación de la expresión de α-amilasa. El primer informe sobre el papel de un inhibidor de la α-amilasa en resistencia fungicida vino desde el aislamiento y la caracterización de un inhibidor de la tripsina-α-amilasa de 14 kDa de líneas de maíz resistentes a . flavus¹². Mayor proyección de varios centenares de especies de plantas por Fakhoury y Woloshuk conducido a la identificación de una proteína de tipo inhibidor de la α-amilasa 36 kDa (IABP) de las semillas de frijol Jacinto, Lablab purpureus L.¹³. La secuencia del péptido de lectinas de IABP se asemejó a perteneciente a la familia de lectinas – arcelin-α-amilasa inhibidor en común registrados haba^14,15. IABP purificada no exhibe ninguna actividad inhibidora de tripsina mamífero y mayor caracterización in vitro demostrada una inhibición significativa del crecimiento de a. flavus y la germinación de conidios¹³. Los informes presentados aquí claramente muestra la α-amilasa puede servir como un destino en los enfoques de control para restringir patógenos o plagas que dependen de la movilización de la almidón (a través de la actividad de la α-amilasa) y adquisición de azúcares solubles como fuente de energía durante su interacción patógena con plantas hospederas.

Alpha-amilasa es conocida por ser crítico en a. flavus patogenicidad^9,10,11y dada la importancia de la AILP como un potente anti-a. flavus agente (inhibición de la α-amilasa/antigrowth)¹³, hemos generado plantas de maíz transgénicas expresando Lablab AILP gene bajo el promotor CaMV 35S constitutivo. El objetivo era investigar si la expresión heteróloga de este inhibidor de la α-amilasa en maíz es eficaz contra a. flavus producción patogenia y aflatoxinas durante la infección del núcleo de maíz. Nuestros resultados demuestran que granos de maíz transgénicos expresando AILP significativamente reducción a. flavus crecimiento y aflatoxina la producción durante la infección del núcleo.

1. construcciones plásmidos y transformación de maíz

1. PCR amplificación Lablab AILP insertar usando los cebadores 5'-TATCTAGAACTAGTGATTACCATGGCTCC-3 'y 5'-ATACTGCAGGATTGCATGCAGAGTAGTACTG-3'. Las condiciones PCR incluyen un paso de desnaturalización inicial a 98 ° C por 30 s (paso 1), seguido de la desnaturalización a 98 ° C durante 10 s (paso 2), recocido a 55 ° C para 30 s (paso 3), elongación a 72 ° C por 20 s (paso 4), 31 ciclos del paso 2 al paso 4 , y una elongación final a 72 ° C por 5 min clon el producto PCR en un modificado pCAMBIA 1.300 vector con XbaI y PstI sitios de restricción. Secuencia el vector del destino final de la planta para confirmar la orientación y la secuencia del gen clonado de IABP en el vector.
2. Como anteriormente descrito ¹⁶transformar la Agrobacterium cepa EHA101 con la construcción final del vector (figura 1).
3. Uso transformado Agrobacterium que contiene el vector de destino final de la planta a transformar embriones inmaduros de maíz (Zea mays L. Hi-II) (realizados en la instalación de planta de transformación de la Iowa State University) ¹⁶.
4. T₀ plantas en el invernadero (26 – 29 ° C, fotoperíodo de 16/8 h con Na-lámparas de alta presión) y autofecundarse repetidamente para obtener T₆ generación para lograr la calidad de homozigoto para el rasgo transgénico.

2. ensayo de germinación de esporas de

1. Las muestras de hojas de la cosecha y almacenar a-80 ° C. Moler las muestras de hojas con un mortero y una maja con nitrógeno líquido. Pesar 0.5 g en tubos de microcentrífuga de 2 mL, Añadir 17 μl de inhibidor de la proteasa y coloque los tubos en hielo.
2. Centrifugar los tubos durante 10 min a 16.000 x g. Transferencia de 225 μL de extracto de la planta a tubos de microcentrífuga de 0, 5 mL y coloque en hielo.
3. En un tubo de centrífuga de 15 mL, prepare una suspensión 5 mL de esporas de Aspergillus flavus 70-GFP en caldo de dextrosa de papa de 1% (p/v). Vórtice y ajustar la concentración de esporas a 10 esporas/mL,⁵ con un hemocitómetro.
   PRECAUCIÓN: A. flavus produce aflatoxinas, todo el trabajo con este hongo debe llevarse a cabo en un gabinete de seguridad biológica.
4. Incubar en PDB a 28 ° C hasta que la cultura logra 50% inicio de la germinación de las esporas según lo indicado por abultamiento de las esporas.
5. Vórtice y alícuota 25 μl solución, espora a la planta 225 μL del extracto. Incubar las muestras durante 20 horas a 28 ° C con agitación intermitente.
6. Alícuota de 25 μl de solución de esporas en un portaobjetos de microscopio y mida la longitud del germen tubos esporas mediante el software de la cámara digital. Utilizar un mínimo de 20 mediciones replicadas de cada línea.
   Nota: En esta etapa, coloque todas las culturas a 4 ° C para detener el crecimiento de la colonia hasta que esté listo para contar.

3. núcleo investigación ensayo (KSA)

1. Construir tapas de KSA pegando 4 snap caps (22 mm) en caja Petri 60 x 15 mm. Permitir el pegamento se seque durante 48 H antes de usar gorras. Cada tapa KSA constituye un representante (figura 2).
2. En un estéril gabinete de seguridad biológica, rocíe una bandeja cuadrada bioensayo (24 cm x 24 cm) con 70% etanol: H₂O (v/v) y deje secar al aire. Añadir papel de cromatografía estéril a la bandeja. Aerosol 9 casquillos KSA con etanol al 70%, deje que el aire seque y coloque en la bandeja del bioensayo.
3. Para cada línea de maíz transgénico está probando, seleccione 20 núcleos indemnes y colocar en un tubo de centrífuga de 50 mL. Añadir etanol al 70% y dejar reposar durante 4 minutos. Agitar suavemente los tubos durante la esterilización. Retirar los granos etanol y enjuague tres veces en estéril desionizada H₂O.
4. Preparar una suspensión de esporas de Aspergillus flavus 70-GFP¹⁷ de una cultura de 6 días de edad cultivadas en medio V8 (5% jugo V8 agar al 2%, pH 5.2).
   1. Añadir 20 mL estéril 0.02% Triton X-100/desionizada H₂O (v/v) y desechos de las esporas con un asa estéril. Pipeta el inóculo y el lugar en un vaso de precipitados estéril 300 mL.
   2. Preparar una dilución de 5-fold con 0,02% Tritón X-100, luego realizar un conteo de esporas con un hemocitómetro. Diluir más si es necesario para obtener 100 mL con una concentración de 4 x 10⁶ esporas/mL.
5. Colocar los granos en un vaso de precipitados estéril 300 mL con una barra de agitación. Añadir el inóculo en el vaso.
   Atención: Agregar granos a inóculo se causa solución a splash. Coloque el vaso en un plato mezclar durante 3 minutos. Después de 3 minutos, vierta de inóculo en un vaso de precipitación vacío.
6. Usando un fórceps, coloque los granos en el plato de prueba (1/tapadera). Añadir 30 mL agua a la parte inferior de cada bandeja de prueba e incubar a 31 ° C en la oscuridad durante 7 días.
7. Preparar los granos para la fotografía.
   1. Dejar reposar 4 núcleos de cada línea para análisis microscópico y la fotografía.
      Nota: Los granos pueden almacenarse a 4 ° C durante no más de 5 días antes de completar la fotografía.
   2. Tomar fotografías de granos después de siete días de la inoculación con a. flavus (figura 3).
   3. Limpieza exterior de granos con un tejido blando y agua desionizada. Realizar secciones longitudinales de núcleos y fotografiar inmediatamente bajo el microscopio de fluorescencia.
8. Preparación de núcleos para análisis.
   1. Limpieza exterior de núcleos restantes con un tejido blando y agua desionizada.
   2. Colocar 4 núcleos, constituyendo 1 rep, en un policarbonato de tapón de rosca 15 mL vial que contiene 2 bolas de acero inoxidable. Congelar inmediatamente los frascos en nitrógeno líquido y conservar a-80 ° C hasta el posterior procesamiento y análisis.
   3. Saque los frascos del congelador de-80 ° C y moler los granos en un homogeneizador a 1.500 rpm durante 3 minutos.
      Nota: Mantenga los núcleos congelados con nitrógeno líquido.

4. proyección PCR de granos de maíz transgénicos

1. Utilice el kit de aislamiento de DNA para aislar ADN genómico (gDNA) de granos de maíz pulverizados infectados por a. flavus según las instrucciones del fabricante. Añadir brevemente, 280 μl de tampón de F 20 proteasa μl y 3 μl dithiothreitol (DTT) a 10-15 mg de granos de maíz pulverizados. Incubar y agitar en un Termomezcladores (56 ° C, 1.200 rpm, 30 min). Centrifugar a 10.000 x g durante 1 min y transferir el sobrenadante a la columna equilibrado. Incubar a temperatura ambiente durante 3 minutos y centrifugar a 700 x g durante 1 min eluir gDNA.
2. Tomar 0,8 μl de gDNA extraído para configurar un 20 μl PCR la reacción para cada muestra usando un kit PCR. Siga las condiciones de termociclaje rápido como se recomienda en el protocolo del fabricante. Las condiciones PCR incluyen un paso de desnaturalización inicial a 98 ° C por 5 min (paso 1) seguido de la desnaturalización a 98 ° C durante 5 s (paso 2), recocido a 55 ° C durante 5 s (paso 3), elongación a 72 ° C por 20 s (paso 4), 40 ciclos de paso 2 al paso 4 y a un paso de elongación final a 72 ° C durante 1 minuto (paso 5).
3. Use primer forward 5'-TATACCACCCCCATCCGTGT-3' y primer 5'-AGCTCGGAAGCAAAAGACCA-3' para confirmar la presencia de Lablab AILP gene en los granos de maíz transgénicos.

5. aislamiento RNA, síntesis de cDNA y RT-PCR semicuantitativa

1. Tomar homogeneizada a. flavus infectados los granos de maíz previamente almacenados a-80 ° C para la extracción de RNA. Extracto de RNA utilizando un kit de aislamiento de RNA total según protocolo del fabricante pero con ligera modificación¹⁸. Después de agregar 50 mg de polvo del núcleo de maíz homogeneizada en el buffer de extracción, mezcla bien (sin Vortex) usando una punta de la pipeta de 1 mL y dejarla en hielo durante 5-6 minutos antes de proceder a realizar los siguientes pasos como se describe en el protocolo del fabricante.
2. Preparar el cDNA usando un cDNA síntesis kit según protocolo ^{18 el fabricante}.
3. Utilizar 0,5 μl de cDNA sin diluir por reacción de polimerización en cadena para RT-PCR semicuantitativa como anteriormente descrito¹⁸. Usar primers de avance y retroceso qAILP-F 5'-TCCCAACAAGGCAACTACTG-3' y qAILP-R 5' - CGGTGTCGAAGAGACCTAGATA - 3' respectivamente para detectar genes de IABP Lablab y adelante y atrás iniciadores qRib-F 5ʹ-GGCTTGGCTTAAAGGAAGGT-3ʹ y qRib-R 5ʹ-TCAGTCCAACTTCCAGAATGG-3ʹ respectivamente para la expresión del gen de estructural ribosomal maíz (costilla), GRMZM2G024838¹⁹ como un gen de mantenimiento de la casa.

6. cuantificación de GFP

1. Preparar 50 mL de cada una de 0.2 M de fosfato de sodio monobásico (NaH₂PO₄) y 0.2 M fosfato sódico dibásico (Na₂HPO₄·7H₂O) desionizada H₂O.
2. Hacer 100 mL de tampón de fosfato de pH 7.0 Sorenson. Para pH 7.0, agregue 19,5 mL NaH₂PO₄ acción, 30,5 mL NaHPO₄·7H₂O existencia y 50 mL desionizada H₂O.
3. Pesar 25 mg de núcleo triturado (peso fresco, FW) y colocar en un tubo de microcentrífuga de 1,0 mL. Añadir 500 μl de tampón de fosfato al tubo de centrífuga y vortex durante 30 s.
4. Centrifugar las muestras durante 15 minutos a 16.000 x g. Sobrenadante en una placa bien negro 96 en Pipetee 100 μl. Leer las muestras con un fluorómetro (excitación 485 nm, emisión 528 nm).

7 análisis de aflatoxina total

1. Extracción procesamiento y aflatoxina muestra
   1. Muestras de núcleo seco en un horno de aire forzado durante 2 días a 60 ° C. Pesar las muestras y colocar en un matraz de Erlenmeyer con un tapón de vidrio de 50 mL.
   2. En una campana de humos, añadir cloruro de metileno 25 mL en cada matraz.
      PRECAUCIÓN: Cloruro de metileno es muy volátil y se considera peligroso (irritante, cancerígeno). Guantes de látex ni de nitrilo son seguras para trabajar con cloruro de metileno. Utilice guantes de alcohol polivinílico resistentes solventes orgánicos mejorado.
   3. Agitar las muestras durante 30 minutos en un agitador de acción de la muñeca. Después de 30 min, verter lentamente el extracto a través de un círculo de papel de filtro estriado en un vaso de precipitado de 80 mL. Dejó la vasos seque durante la noche en una campana de humos.
   4. Al día siguiente, squirt cloruro de metileno (aproximadamente 5 mL) en el interior del borde de los vasos secos, Remolino alrededor y verter en frascos de vidrio de 2 dram. Dejar los frascos abrirán para que se seque durante la noche en una campana de humos.
2. Análisis de aflatoxinas
   1. Añadir 4,0 mL 80% metanol: desionizada H₂O (v/v) viales.
   2. Uso un kit de extracción de aflatoxinas para purificar solución de metanol con la columna proporcionada. Analizar los niveles de aflatoxina total con un fluorómetro, según las instrucciones del fabricante.

Transformación de maíz y detección molecular de las plantas transgénicas

Embriones inmaduros de maíz líneas Hi-II fueron transformados usando la cepa EHA101 de Agrobacterium tumefaciens que contiene el vector de destino final planta expresando el Lablab purpureus AILP gen bajo el control del CaMV 35S promotor. Cinco líneas de maíz transformadas independientemente fueron avanzadas para la generación de T6 para estudios posteriores. Las plantas de maíz transgénicas eran mucho más pequeñas y menos vigorosas pero no presentaron ninguna otras anormalidades en comparación con las plantas control negativo isogénicas. Amplificación por PCR del gen objetivo AILP demostró un amplicon de bp 548, observado solamente en las líneas de maíz transgénicas en comparación con las plantas testigo (Figura 4A). El gen de la AILP demostró la expresión en las líneas transgénicas mientras que ninguna expresión de IABP fue observada en las plantas control (Figura 4B).

Aspergillus flavus extractos del ensayo de esporas con la hoja de

Hoja cruda se extrae del maíz transgénico jóvenes plantas prepararon moliendo en líquido N y centrifugar a 16.000 x g. Esporas de germinación de etapa temprana fueron expuestas el extracto de hoja de 20 horas y se registró la longitud hifal espora media de 20 muestras. Longitud hifal de esporas expuestas a extractos de las hojas transgénicas mostraron una reducción de 58% – 80% en comparación con el control negativo (figura 5)

Aspergillus flavus crecimiento durante la infección del núcleo

Se realizó un ensayo de detección de núcleo (KSA) para examinar el crecimiento de a. flavus en los granos transgénicos y control. Expresión del gen de IABP en granos transgénicos había afectado negativamente el crecimiento de a. flavus . La cepa de a. flavus empleada en el estudio actual contiene un reportero GFP que permite la monitorización y cuantificación del crecimiento fúngico en tiempo real. Reducción significativa en la fluorescencia de GFP fue observada en núcleos de IABP transgénicos en comparación con el control negativo isogénicas (figura 6). IABP líneas 4 y 5 mostraron una reducción significativa en el crecimiento del hongo, 69% y 72%, respectivamente, seguido por las otras líneas donde se observó una reducción de 35% – 60% en comparación con los núcleos de control (Figura 7A).

Producción de aflatoxinas en los granos infectados

Expresión heteróloga del gen de IABP en maíz resultó en una reducción significativa del contenido de aflatoxinas en las líneas transgénicas vs control. Los datos de aflatoxina proporcionan aquí es el contenido de aflatoxinas totales en los granos infectados. Se observó una reducción de 62% a 88% en contenido de aflatoxinas en los granos de IABP en comparación con el control (figura 7B). Entre las 5 líneas de IABP, línea 4 mostró el más bajo contenido de aflatoxinas (486 ng/g DW), seguido de otras líneas que van entre 640-1.498 ng/g DW en los kernels vs control (3.986 ng/g DW).

Figura 1: Diseño vectorial para la expresión transgénica de Lablab AILP gene en maíz. 35S = virus del mosaico del coliflor o CaMV promotor constitutivo; RB = borde derecho; LB = borde izquierdo; nptII = gen de neomicina fosfotransferasa kanamicina resistencia; nos y 35s = terminadores de transcripción. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Figura 2: Núcleo investigación análisis. (A, B) Esterilizar los granos y vierta en un vaso de precipitados estéril en un gabinete de seguridad biológica. (C – E) Sembrar granos con suspensión de esporas de a. flavus . (F-H) Usando una pinza estéril, colocar granos en plato de prueba. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Figura 3: Luz micrografías de a. flavus crecimiento. (A) control negativo isogénicas. (B-F) Granos transgénicos expresando AILP (líneas 1-5) una semana después de la inoculación. Barra de escala = 1 cm. haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Figura 4. Investigación molecular de las plantas transgénicas. (A) PCR confirmación de las plantas de maíz transgénicas (carriles 1-5) que contengan Lablab AILP (548 bp diagnóstico fragmento de la DNA; C = control negativo isogénicas; NEB 2 registro ADN escalera utilizada como un marcador de ADN). (B) expresión de gene de Lablab IABP en líneas de maíz transgénicas (carriles 1-5) mediante RT-PCR. Carril C representa isogénicas control negativo. Gen de estructural ribosomal maíz (costilla), GRMZM2G02483819 fue utilizado como un gen de mantenimiento de la casa (escalera de DNA de 2-Log de NEB: marcadores de ADN). Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Figura 5. Efecto de la hoja cruda de extractos de plantas transgénicas de maíz de la IABP en la germinación de esporas de a. flavus en comparación con un control negativo isogénicas (neg). Separación de media fue realizada por postest de Dunnett después de ANOVA. Niveles de reducción se indican por asteriscos (***P ≤ 0.0001). Barras de error indican el error estándar de medias para muestras de veinte. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Figura 6. Fluorescencia de GFP que emana de la cepa de a. flavus 70-GFP en granos transgénicos expresando IABP después de una semana de prueba. Se utilizaron controles negativos isogénicas (A) para evaluar la infección micótica y se separó en granos transgénicos (B-F que representan líneas transgénicas 1-5). Se revisaron al menos cuatro núcleos para cada línea bajo el microscopio de fluorescencia. Barra de escala = 2 mm. haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Figura 7: Un flavus crecimiento y aflatoxina producción. (A) infección de 70-GFP de a. flavus y el crecimiento de granos de maíz después de 7 días en un ensayo de detección de núcleo. Promedio de tres experimentos independientes con cuatro biológicos repeticiones cada vez. Cuantificación de GFP (en unidades relativas de fluorescencia, RFU) indica crecimiento fúngico en líneas de maíz transgénicos expresa AILP a un control negativo isogénicas. Separación de media fue realizada por postest de Dunnett después de ANOVA. Niveles de reducción se denota por asteriscos (*P ≤ 0.05; **P ≤ 0.01; ***P ≤ 0.001). Barras de error indican el error estándar de medios para cuatro repeticiones biológicos aleatorios. (B) producción de aflatoxina por 70-GFP de a. flavus en granos de maíz después de 7 días en un ensayo de detección de núcleo. Promedio de 12 réplicas biológicas y cada repetición contiene cuatro núcleos. Niveles de aflatoxina en granos transgénicos de IABP (líneas 1-5) en comparación con un control negativo isogénicas (neg). Separación de media fue realizada por postest de Dunnett después de ANOVA. Niveles de reducción se denota por asteriscos (**P ≤ 0.01; ***P ≤ 0.001). Barras de error indican el error estándar de medios para cuatro repeticiones biológicos aleatorios. Ver figuras adicionales para ver los datos en el panel B carente de sesgo debido a la inhibición de hongos. Cierre correlación entre GFP = RFU y aflatoxina también cuentan con valores. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Suplementario Figura 1: Datos de la figura 7B dibujar para mostrar la producción de aflatoxina por 70-GFP de a. flavus en granos de maíz después de 7 días en un ensayo de detección de núcleo para eliminar el sesgo debido a la inhibición del crecimiento fúngico. Valores de aflatoxina se dividieron por la inhibición del crecimiento fúngico representada como GFP-RFU valores en la figura 7B. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Suplementario Figura 2: cerrar la correlación entre valores de GFP-RFU (= crecimiento fúngico) y niveles de aflatoxina (r2 = 0.86) divulgado en la KSA. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Los autores no tienen conflicto de interés.