Espectroscopía ultravioleta-visible (UV-Vis)

1. calibrar el espectrómetro

1. Encienda el espectrómetro UV-Vis y las lámparas se caliente por un período adecuado de tiempo (alrededor de 20 min) para estabilizarlos.
2. Llenar una cubeta con el solvente de la muestra y asegúrese de que el exterior esté limpio. Esto servirá como un espacio en blanco y ayudar a responsables de pérdidas de luz debido a la dispersión o la absorción por el disolvente.
3. Coloque la cubeta en el espectrómetro. Asegúrese de alinear correctamente la cubeta, como a menudo la cubeta tiene dos caras, que sirven para la manipulación (puede ser acanalado) y no pretenden iluminar a través de.
4. Se hace una medición para el espacio en blanco. La absorbancia debe ser mínima, pero cualquier absorbencia debe restarse de muestras futuras. Algunos instrumentos pueden almacenar los datos en blanco y realizar la resta automáticamente.

2. realizar un espectro de absorbancia

1. Llene la cubeta con la muestra. Para asegurarse de que la transferencia es cuantitativa, enjuagar la cubeta dos veces con la muestra y luego llenarlo aproximadamente 3/4 completo. Asegúrese de que el exterior esté limpio de huellas digitales, etcetera.
2. Coloque la cubeta en el espectrómetro en la dirección correcta.
3. Cubrir la cubeta para evitar cualquier luz ambiental.
4. Recoge un espectro de absorbancia al permitir que el instrumento para la exploración a través de diferentes longitudes de onda y recoger la absorbancia. La gama de longitud de onda se puede configurar con información sobre la muestra específica, sino un rango de 200 – 800 nm es estándar. Un instrumento de arreglo de diodos es capaz de recoger un espectro de absorbancia todo en una carrera.
5. Del espectro de absorbancia recogidos, determinar el máximo de absorción (λ_máx.). Repetir la colección de espectros para obtener una estimación de error en λ_max.
6. Para hacer una curva de calibración, recoger el espectro UV-Vis de una variedad de muestras de diferente concentración. Espectrómetros están a menudo limitados en rango lineal y no será capaces de medir un valor de absorbancia mayor que 1.5. Si los valores de absorbancia de la muestra están fuera del rango lineal del instrumento, diluir la muestra para obtener los valores dentro del rango lineal.

3. cinética experimentos con espectroscopía UV-Vis

1. UV-Vis se puede utilizar para experimentos de cinética examinando el cambio de absorbancia con el tiempo. Para un experimento de cinética, tome una lectura inicial de la muestra.
2. Agregar rápidamente el reactivo para iniciar la reacción química.
3. Revuelve bien para mezclar con la muestra. Si se agrega una pequeña cantidad, esto se podría hacer en una cubeta. Alternativamente, mezclar el reactivo con la muestra y vierta rápidamente en una cubeta para una medición.
4. Medir la absorbancia a la λ_max para el analito de interés en el tiempo. Si utilizar el reactivo se mide (es decir la absorbancia esta subiendo porque hay menos reactivo a absorber), entonces el decaimiento indicará el orden de la reacción.
5. Usando una curva de calibración, haga una parcela de tiempo de vs de concentración de analito, convertir el valor de absorbancia en concentración. A partir de ahí, este gráfico se puede caber con las ecuaciones apropiadas para determinar las constantes de velocidad de reacción.