Cromatografía en columna

1. mezcla de Gel de silicona de

1. Verter el gel de sílice en un matraz Erlenmeyer. El peso del material de embalaje debe ser de aproximadamente 50 x de la muestra están separada. Si los compuestos se separaron tienen valores muy similares de R_f , puede requerir usar una mayor cantidad de sílice por muestra, que es el caso de este ejemplo.
   1. Lugar 10 g de sílice en el matraz de Erlenmeyer, ya que 50 mg de la muestra (45 mg de Fluorenona y 5 mg de tetraphenylporphyrin) están siendo aislados.
2. Añadir el sistema de solventes (hexano/diclorometano, 70%: 30%) en el erlenmeyer que contiene el gel de sílice. Agregue suficiente solvente para asegurarse de que todo el gel de sílice es bien solvatados. La silicona no se disolverá, pero la mezcla será visualmente perceptible cuando solvatados. Una vez que se ha añadido el disolvente agitar el matraz Erlenmeyer para asegurarse de que la sílice es bien solvatados.

2. preparación de la columna

1. Seleccione la columna de tamaño adecuado. Por lo general la columna se debe llenar a medio camino con mezcla de gel de silicona. Cuanto mayor sea la muestra ser purificado, el más grande la columna necesaria.
2. Conecte la parte inferior de la columna con un trozo de lana de vidrio. Con una varilla larga, asegúrese de que la lana se encuentra firmemente en la parte inferior de la columna justo por encima de la llave de paso.
3. Una vez que la lana esté firmemente en su lugar, aplicar una fina capa de arena sobre la lana de vidrio.
   Nota: Si la columna está equipada con una frita de vidrio encima de la llave de paso, debe omitirse este paso.
4. Abrazadera de la columna en posición vertical en un soporte de anillo.
5. Suavemente utilizando un embudo, vierta la mezcla preparada de gel de sílice en la columna. Puede que necesite añadir más disolvente para transferir la mezcla del matraz Erlenmeyer a la columna. Usando una pipeta, lave cualquier gel de silicona que se adhiere a los lados de la columna.
   1. Como el gel de sílice es colocar en la columna, golpee suavemente los lados de la columna para que el gel de sílice firmemente los paquetes y excluye cualquier burbuja de aire.
6. Abrir la llave de paso y deje que solvente drene en un erlenmeyer limpio hasta justo antes del gel de sílice y el solvente se reúnen frente. El gel de silicona nunca debe ir seco hasta que se complete el procedimiento.
7. Coloque una capa delgada de arena en la parte superior del gel de sílice (figura 1). Usando una pipeta, lave cualquier arena que puede haber pegado a los lados de la columna.
8. Drenar cualquier solvente adicional hasta que la arena está seca, pero no hasta la capa de gel de silicona.

Figura 1. La configuración adecuada para una cromatografía en columna el experimento antes de la adición de la muestra.

3. Añadir la muestra a la columna

1. Disolver la muestra en la menor cantidad de solvente (con el mismo disolvente que se utilizó para hacer la mezcla de gel de sílice).
2. Suavemente con una pipeta, añadir la muestra a la parte superior de la columna.
3. Una vez que la muestra se ha aplicado a la parte superior de la columna, abra la llave de paso y deje que el solvente drene a través de la capa de arena, pero no la capa de gel de silicona. Use una pequeña cantidad de solvente para lavar abajo cualquier muestra que puede haber se aferró a los lados de la columna. Este solvente adicional a través de la capa de la arena así como de drenaje.

4. liberador de la muestra a través de la columna

1. Muy suavemente con una pipeta, añadir 4 – 5 mL de disolvente de tal manera que no moleste a la capa de arena.
2. Colocar un embudo en la parte superior de la columna y muy despacio y suavemente llene el resto de la columna con el disolvente.
3. Abrir la llave de paso y deje que el solvente drene a través de la columna.
4. Comenzar a colectar la fase móvil como drena de la columna de tubos de ensayo.
   1. Tubos de ensayo deben colocarse en un bastidor de tubo de ensayo en una manera secuencial.
5. Agregar más solvente a la parte superior de la columna como sea necesario hasta que todos los compuestos deseados han eluida de la columna.

5. recuperación de los componentes

1. Si los compuestos son coloreados, entonces pueden ser visualmente identificados. Sin embargo, si los compuestos son incoloros, tendrán que identificarse mediante luz ulta-visible (UV) (si los compuestos contienen verbal) o con la tinción apropiada. La pureza de los compuestos puede ser verificada mediante cromatografía en capa fina.
2. Identificar los tubos de ensayo que contienen, establecidos de la deseada.
3. Combinar todas las fracciones que contienen el deseado aislado, establecidos en un matraz previamente tarado de (RB) de fondo redondo. Hacer esto para cada compuesto se aisló.
4. Evaporar el solvente colocando el frasco de RB en el rotavapor.
5. Una vez que se ha eliminado todo el disolvente, pesan el RB con el producto seco y restar el peso inicial del RB para obtener un rendimiento.