El análisis de ADN de doble cadena Break (OSD) de reparación en células de mamífero

En este video se demuestra un protocolo que es un método para medir la eficiencia y precisión de la reparación de frenos de doble cadena de ADN por NHEJ o HR en una línea celular de mamíferos. El procedimiento comienza con la generación de una línea celular que contiene una copia única integrada cromosómicamente de NHEJ o casete reportero HR. A continuación, estas células reporteras se transfectan con una mezcla de I SCE, un plásmido que expresa y rojo DS y un plásmido.

Yo sce. Una endonucleasa produce una rotura de doble cadena en la construcción reportera y DS RED sirve como control de transfección. A continuación, se analiza por fax el porcentaje de células GFP positivas y de células rojas DS positivas para cuantificar la eficacia de la NHEJ o de la HR, si se desea.