Inyección ortotópica en la almohadilla de grasa mamaria: establecimiento del cáncer de mama en ratones

Primero, establezca la línea celular de cáncer de mama deseada en cultivo. El día antes de la operación, afeita el abdomen del ratón y usa crema depilatoria para eliminar el pelaje y exponer los pezones inguinales. El día de la operación, recoja las células, anestesie al ratón y confirme la falta de respuesta al pellizco del dedo del pie. Con unas pinzas, pellizca la piel alrededor del pezón para crear un túnel elevado.

Luego, con la jeringa de las células recolectadas, perfore la piel. La aguja debe seguir el túnel hasta que la punta se acerque al pezón. Mueva suavemente la punta de la aguja hacia arriba en la almohadilla de grasa mamaria, justo debajo del pezón. Retire las pinzas para formar una capa de piel con la aguja y luego inyecte lentamente las células.

Por último, retraiga la jeringa, teniendo cuidado de no alterar la protuberancia redonda que rodea el pezón. Las células inyectadas y los tumores subsiguientes expresan luciferasa y se pueden rastrear mediante imágenes bioluminiscentes. En el protocolo de ejemplo, mostraremos el establecimiento del cáncer de mama ortotópico murino. El día antes de la operación, sujete manualmente al ratón receptor y gire el vientre del animal hacia arriba hasta el pelaje que se va a afeitar alrededor de los cuartos pezones.

Limpia el pelaje con una fina capa de crema depilatoria. Use agua destilada para quitar la crema después de 30 a 60 segundos. Y seca el ratón con toallas de papel suaves. El día de la operación, diluya la suspensión de células de cáncer de mama murino a una concentración de 2 x 10 a la quinta. células por mililitro de PBS en un tubo de microcentrífuga estéril sobre hielo.

Antes de cada inyección, cargue una jeringa de un mililitro equipada con una aguja de .45 por 16, con 50 microlitros de células por ratón. Y confirman una falta de respuesta al pellizco de los dedos de los pies en cada animal sedado. Aplique ungüento en los ojos del animal y use pinzas para cubrir la piel alrededor del cuarto pezón del primer ratón para crear un túnel para que la jeringa lo siga.

Sostenga la jeringa con el bisel hacia arriba e ingrese subcutáneamente a la piel a una distancia de cinco a 10 mililitros del pezón, siguiendo el túnel hasta que la punta de la aguja casi alcance el pezón. - El uso de pinzas para cubrir la piel alrededor del primer pezón crea un túnel para que la jeringa lo siga. La aguja debe introducirse entre las puntas de las pinzas y debe subir, en lugar de hundirse en el tejido. Mueva con cuidado la punta de la aguja hacia arriba en la almohadilla de grasa mamaria hasta que el bisel esté debajo del pezón.

Y libere la carpa de piel para permitir una inyección lenta de las células cancerosas. - Tras la inserción, mueva con cuidado la punta de la aguja hacia arriba en la almohadilla de grasa mamaria hasta que el bisel esté debajo del pezón y sienta resistencia para asegurar la entrega de las células en la ubicación correcta. Cuando se hayan inyectado todas las células, gire la aguja ligeramente hacia un lado y retraiga la jeringa lentamente. Use un hisopo de algodón para aplicar presión a la herida de la aguja durante 10 a 20 segundos, para asegurarse de que no haya filtraciones de líquido.

El pezón inyectado debe aparecer como una esfera plana blanca transparente, con el pezón en el centro