Encyclopedia of Experiments: Biology
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-解剖环腺, 你需要一个解剖显微镜,两个钳子,一个细量表针作为解剖刀,和缓冲的解决方案。 通过识别含有口钩的幼虫头部来查找环腺。沿着幼虫的长度旅行,找到大脑,这是在胸腔和腹部之间。 环腺比大脑小,位于顶部。
幼虫环腺是一个复杂的内分泌结构,包含三个不同的内分泌器官。 体质阿拉图姆位于环腺的中心,产生青少年激素,调节发育和衰老。 前列腺环绕地壳阿拉图姆,并构成结构的大部分。 Ecdysone,一种参与昆虫麦芽的激素,是由这个腺体制成的。 前列腺的下面是气质心律,它产生脂肪动力激素,一种营养调节剂。
在这个例子中,我们将解剖幼虫大脑和环腺进行免疫造术。
-准备幼虫后,在解剖显微镜下装满PBS的三厘米长的盘子中开始课程解剖。首先,用钳子抓住嘴钩。然后,使用微剪刀,切断身体约三分之一的长度从前尖。接下来,用一对钳子保持前长,并使用第二对轻轻地将头部尖端推入身体,最终将幼虫身体从内到外。
在10分钟内以这种方式准备多达20只幼虫,然后将其转移到固定溶液中。 30分钟后,清洗制剂,继续免疫染色。免疫后,使用一次性移液器将样品转移到装满 0.3% PBT 的菜肴中。
在解剖显微镜下,用一对钳子抓住角质层或嘴钩,然后,用一根27口径的针头像刀子一样附着在一毫升注射器上,通过切断食道和眼盘的前尖,从身体角质层中去除脑环腺-眼盘复合物。
接下来,使用钳子,小心地将食道和肠道从脑环腺眼盘复合物中分离出来。将肠道拉到后侧,因为食道穿过心室神经线上方的大脑。最后,要隔离脑环腺复合物,用针刀小心地切断脑椎间盘、眼盘和腿盘之间的连接。
- 在解剖过程中使用锋利边缘的细钳是非常必要的。我也强烈建议你用阿肯色州磨石锐化钳子,使他们的边缘在一起, 没有任何缝隙。
- 要转移样品,请使用带宽孔尖的微皮。 将样品存放在玻璃滑梯的中心。然后,使用钳子将样品定位到其心室两侧,以便对位于大脑后侧的环状腺进行成像。 接下来,倾斜滑梯并尽可能多地擦去多余的PBT。 然后,在样品附近放一滴安装试剂,然后使用钳子慢慢降低试剂上的盖片,然后在样品上。