Tratamiento con estreptozocina: un modelo de pez cebra con diabetes mellitus tipo 1

- La diabetes mellitus tipo 1 es una enfermedad humana en la que el sistema inmunitario destruye las células beta productoras de insulina en el páncreas. La estreptozocina puede inducir diabetes mellitus tipo 1 en el pez cebra. Primero, anestesiar a un pez en una solución de 2-fenoxietanol en agua de pescado. Toma el pez y colócalo en una placa de Petri, con el lado ventral hacia arriba. Calcule la dosis de estreptozocina en función de 0,35 miligramos por gramo del peso del pez y dilúyala en solución salina.

Administrar la estreptozocina por inyección intraperitoneal debajo de la cintura pélvica en el lado ventral del pez cebra. La estreptozocina es estructuralmente similar a la N-acetilglucosamina, un ligando que se une al receptor GLUT2 en las células beta pancreáticas, lo que conduce a la secreción de insulina. Por lo tanto, la estreptozocina se une a los receptores GLUT2 presentes en las células beta pancreáticas que la transportan dentro de las células.

Al entrar en las células beta, la estreptozocina desencadena una respuesta inmunitaria que conduce a la liberación de autoantígenos. Los autoantígenos hacen que el sistema inmunitario reconozca las células beta como extrañas y las destruya, lo que reduce los niveles de insulina. Administrar dosis repetidas de estreptozocina en los días tres y cinco, seguidas de dosis semanales, una cada siete días para mantener la respuesta inmunitaria.

En el siguiente ejemplo, generaremos un modelo de pez cebra con diabetes mellitus tipo 1. Para generar pez cebra con diabetes mellitus, prepare un tanque de recuperación con agua de peces normal y un tanque anestésico de agua de peces con una dilución de 1 a 1,000 de 2-fenoxietanol. Bajo una campana extractora, prepare una solución al 0,3% de estreptozocina o STZ añadiendo 6 miligramos de STZ a 2 mililitros de cloruro de sodio al 0,09% e inmediatamente coloque la solución en hielo.

En un tubo separado, alícuota suficiente solución salina para los peces de control. Llene una jeringa de medio CC equipada con una aguja de calibre 27 y 1/2 con la STZ, o soluciones de control, asegurándose de que no queden burbujas de aire atrapadas. Anestesiar a un solo pez colocándolo en agua anestésica y esperando hasta que cese el movimiento de natación, aproximadamente uno o dos minutos.

Una vez anestesiado, coloque brevemente el pescado sobre una toalla de papel para absorber el exceso de agua. Luego, coloque el pescado en un bote de pesaje y péselo. A continuación, coloque el pescado sobre una superficie firme. A continuación, inserte la aguja más allá del bisel en la cara posterior del peritoneo ventral e inyecte 0,35 miligramos por gramo de STZ o un volumen equivalente de solución de control en la cavidad peritoneal del pez.

Después de la inyección, coloque el pez en el tanque de agua de recuperación y controle la actividad normal de natación. Después de inyectar suficientes peces para el experimento, transfiéralos a tanques vivos normales y manténgalos a una temperatura de 22 a 24 grados centígrados. La temperatura reducida es fundamental para la inducción eficiente de la hiperglucemia. Para inducir un estado prolongado de hiperglucemia muy alta, siga un programa de inyecciones frecuentes durante la fase de inducción seguidas de inyecciones de mantenimiento semanales como se muestra aquí.