Implantación guiada por ultrasonido: una técnica para implantar células de adenocarcinoma ductal pancreático en un ratón adulto

- La ecografía proporciona imágenes de alta resolución que ayudan a implantar células cancerosas en un sitio de tejido específico con una inflamación mínima durante la inyección de células tumorales. Principalmente, utilizamos modelos ortotópicos para injertar células tumorales en un órgano relevante de origen tumoral. El órgano imita el microambiente tumoral original y facilita la metástasis.

Comience suspendiendo las células tumorales en PBS frío para mantener el pH y coloque el tubo en hielo. A continuación, coloque el ratón anestésico en la platina de ultrasonido y asegure las extremidades con cinta de laboratorio. Aplique la cantidad requerida de gel de ultrasonido en el abdomen afeitado y ajuste la posición de la sonda de ultrasonido hasta que el páncreas sea claramente visible. Cargue la jeringa con suspensión de células tumorales e inyecte cuidadosamente las células en el páncreas.

En la imagen ecográfica aparece una burbuja de líquido que confirma el éxito de la implantación. Espere 5 segundos para evitar el reflujo de las células y retire suavemente la aguja. Regrese al animal a una jaula limpia y vigile hasta que se recupere de la anestesia. A las pocas semanas de la inyección, las células cancerosas inyectadas en el páncreas se dividen rápidamente y forman un tumor. En el siguiente protocolo, realizaremos la implantación guiada por ultrasonido de células de adenocarcinoma ductal pancreático derivadas de murinos en el páncreas del modelo ortotópico.

- Antes de comenzar el procedimiento, vuelva a suspender la línea celular de adenocarcinoma ductal pancreático de interés en un volumen adecuado de PBS frío estéril en hielo. Coloque las jaulas en una placa de calentamiento a 37 grados centígrados y limpie a fondo el gabinete de seguridad biológica, la cámara de inducción y la etapa de ultrasonido con un esterilizante adecuado. Ajuste la función de calentamiento de la etapa de ultrasonido a 37 grados centígrados y, después de la inducción de la anestesia, aplique ungüento en los ojos del primer animal.

Coloque el ratón en decúbito dorsal en la platina de ultrasonido y asegure suavemente las extremidades superiores e inferiores a la platina con la cinta. Use un aplicador estéril de punta de algodón para aplicar una capa generosa de crema depilatoria en el cuadrante superior izquierdo del abdomen sobre la región del bazo hasta la línea media. Después de 1 minuto, use una gasa seca para eliminar suavemente el vello antes de eliminar el exceso de crema depilatoria con la gasa húmeda de solución salina. Luego, coloque el mouse en una de las nuevas jaulas limpias en el calentador.

Para la implantación de células tumorales guiada por ecografía, ajuste la plataforma de ecografía de modo que la superficie quede paralela al suelo y se coloque en el lado izquierdo del animal con la cabeza del ratón hacia la derecha. Ajuste la posición del transductor para obtener una imagen abdominal transversal y asegure las extremidades del ratón a la plataforma con cinta adhesiva. Baje suavemente el transductor para que entre en contacto con el abdomen del ratón y ajuste el transductor hasta que el páncreas sea claramente visible. Localice el riñón izquierdo y el bazo para proporcionar una orientación precisa en la cavidad abdominal.

Cuando se haya localizado el lugar de la inyección, cargue una jeringa de insulina de media pulgada de calibre 29 con 25 microlitros de suspensión de células tumorales y limpie la punta de la aguja con una almohadilla estéril de preparación con alcohol. Use pinzas de borde romo para agarrar la piel y la pared peritoneal del ratón para aumentar la tensión en el lugar de la inyección. Sosteniendo la jeringa en un ángulo aproximado de 25 a 45 grados con respecto a la superficie de la plataforma de ultrasonido, avance lentamente la aguja a través de la piel y la pared peritoneal. Confirme que la aguja ha perforado la pared peritoneal antes de utilizar la visualización de ultrasonido para guiar la aguja directamente al páncreas.

Cuando la aguja esté en su lugar, inyecte lentamente las células tumorales. La formación de un bolo de líquido dentro del páncreas será evidente en un páncreas correctamente inyectado por ecografía. Una vez que se ha inyectado el volumen completo de la suspensión, y se puede observar un bolo de líquido por ultrasonido, mantenga la jeringa muy quieta durante varios segundos antes de retirar lentamente la aguja del abdomen del ratón, teniendo cuidado de no perturbar las células inyectadas. Luego, coloque el mouse en una nueva jaula limpia en el calentador con monitoreo hasta la recuperación completa.

- La colocación adecuada de la aguja en el páncreas, incluida la profundidad y el ángulo de la aguja, es un paso crítico en este protocolo. La visualización del bolo de líquido ayuda a confirmar una inyección exitosa del tumor. El control de la profundidad de inyección es el aspecto más difícil. Mi consejo es practicar con inyecciones de tripano-azul y confirmar el bolo de líquido tanto por ecografía como por necropsia.