Método de la gota colgante: una técnica para generar esferoides de melanoma en 3D

- Los esferoides son modelos tridimensionales de cultivo celular in vitro que imitan la arquitectura tumoral in vivo y ayudan a estudiar las interacciones intratumorales. Para configurar el cultivo, primero prepare una suspensión unicelular de células de melanoma en su medio apropiado. A continuación, localice pequeños volúmenes de esta suspensión celular, suficientemente separados en la superficie interna de la tapa de una placa de cultivo estéril y no adhesiva. Invierta con cuidado la tapa y colóquela en la base de la placa de cultivo que contiene PBS para crear una cámara de hidratación. Incubar la placa en condiciones adecuadas.

La humedad del PBS evita la evaporación de los medios de las gotas colgantes. Refresque las gotas reemplazando unos pocos microlitros de medio. Debido a la tensión superficial, las gotas mantienen su forma esférica y permanecen suspendidas de la superficie interna de la placa. Las fuerzas gravitacionales facilitan que las células permanezcan en suspensión sin extenderse, sino que se agreguen para formar esferoides tridimensionales dentro de las gotas. Finalmente, enjuague las gotas con PBS para recolectar los esferoides. Recójalos en una placa de cultiv