Edición de genes mediada por morfolinos: una técnica de eliminación de genes que utiliza oligonucleótidos de morfolino bloqueantes traslacionales en huevos unicelulares de peces de cueva

Los morfolinos son oligonucleótidos rediseñados cortos, monocatenarios con diferencias en su esqueleto de fosfato y estructura de azúcar en comparación con los nucleótidos naturales. Estas características mejoran la estabilidad de los morfolinos al pH fisiológico. A pesar de estas variaciones, los morfolinos contienen las nucleobases estándar, que ayudan a diseñar oligonucleótidos complementarios a la secuencia específica de ARNm de un gen objetivo deseado para ser eliminado.

Para realizar la edición de genes impulsada por morfolinos, comience tomando huevos unicelulares de peces de cueva colocados dentro de los pocillos de una placa de inyección de agarosa. Visualice los huevos translúcidos y redondos para ubicar el saco vitelino, una estructura llena de líquido presente dentro del huevo.

Tome una aguja de microinyección precargada con una solución que contenga morfolinos diseñados. Inyecte la solución directamente en la yema de huevo, asegurándose de que los morfolinos ingresen al citoplasma celular. Dentro de las células, el gen diana forma el ARNm, que se transporta al citoplasma.

Dentro del citoplasma, el morfolino inyectado se hibrida con su transcripción de ARNm diana complementaria en el sitio de iniciación endógeno y se extiende más allá de él. Este proceso bloquea la unión de la subunidad más grande del ribosoma con el naciente complejo de iniciación de la traducción que consiste en una pequeña subunidad ribosómica complejada con algunas proteínas específicas.

Posteriormente, la progresión del complejo de iniciación de la traducción se ve obstaculizada estéricamente, lo que detiene la traducción del ARNm a la proteína. Finalmente, la concentración de la proteína diana se reduce debido al bloqueo de la traducción por parte de los morfolinos.