Un inmunoensayo directo basado en espectroscopia Raman para detectar un antígeno específico

Comience incubando moléculas de colorante reportero Raman con nanopartículas de oro para que los reporteros se unan a las nanopartículas.

Añadir polietilenglicol, anticuerpos conjugados con PEG específicos para el antígeno diana. Los anticuerpos se adhieren covalentemente a las nanopartículas a través de la unión de disulfuro de oro. Agregue PEG conjugados con tiol para bloquear los sitios de nanopartículas restantes y evitar la agregación de nanopartículas, formando sondas de nanopartículas.

Cubra los pocillos de la placa de inmunoensayo con el antígeno objetivo. Bloquee los sitios de placa restantes con una solución que contenga proteínas. Añade las sondas de nanopartículas. Realice la dilución de la sonda en serie a través de los pozos. Incubar para que los anticuerpos de las sondas se unan a los antígenos, formando complejos.

Utilice un microscopio Raman para determinar la respuesta óptica de la sonda. El láser monocromático incidente excita los electrones de la superficie de las nanopartículas de oro y provoca su oscilación, creando un alto campo electromagnético local en la superficie de la sonda.

El haz incidente y los reporteros Raman interactúan, lo que provoca una luz inelástica mejorada o dispersión Raman con diferentes longitudes de onda y frecuencias debido al campo electromagnético mejorado. La señal Raman emitida de forma inelástica se utiliza para generar el espectro Raman.

Traza el área espectral del pico reportero Raman frente a la concentración de la sonda para encontrar el límite inferior de detección de la sonda y facilitar una detección más sensible del antígeno.