Espectroscopía UV-visible para el seguimiento de la formación de coágulos de fibrina

En respuesta a una herida, una serie de reacciones enzimáticas inician la formación de una red de proteínas insolubles, un coágulo de fibrina, que sella los vasos sanguíneos y evita la pérdida excesiva de sangre.

Para monitorear la formación de coágulos de fibrina in vitro, comience con una placa de pocillos múltiples que contenga un tampón de formación de coágulos. El tampón está compuesto por iones de calcio, un cofactor, y fibrinógenos, glicoproteínas solubles esenciales para la coagulación.

Trata el pozo con las trombinas, una enzima proteolítica que inicia la reacción.

Inserte la placa en un espectrofotómetro UV-visible. Ilumine el pozo con luz con una longitud de onda de 350 nanómetros y registre la absorbancia de la solución a intervalos regulares.

Inicialmente, la luz incidente pasa a través de la solución clara que contiene fibrinógenos solubles, mostrando una absorbancia de luz mínima y una transmitancia máxima. El detector recoge la luz transmitida y genera espectros que muestran la absorbancia en función del tiempo, correlacionándose con la turbidez de la solución.

Con el tiempo, en presencia de iones de calcio, la trombina escinde los fibrinógenos solubles para liberar fibrinas. Estas fibrinas insolubles interactúan para formar una red tridimensional de fibrina, un coágulo, que hace que la solución sea turbia. La solución turbia que contiene el coágulo de fibrina absorbe más luz, lo que provoca una disminución de la intensidad de la luz transmitida.

Analice los espectros UV-visible; el aumento en el valor de absorbancia con el tiempo se correlaciona con un aumento en la turbidez de la solución, lo que sugiere una rápida formación de coágulos de fibrina.