Aislamiento de glomérulos: una técnica para obtener glomérulos intactos a partir de riñón murino

En los riñones de los vertebrados, las nefronas consisten en múltiples glomérulos, una densa red de vasos sanguíneos, que desempeñan un papel principal en la filtración de desechos del cuerpo.

Para aislar glomérulos, comience tomando un riñón de ratón recién disecado. Use fórceps para despegar la cápsula renal del riñón y coloque el riñón limpio en una nueva placa de cultivo. Ahora, coloque el plato sobre hielo para evitar la degradación renal. Pica el riñón en trozos pequeños.

A continuación, vuelva a suspender los trozos de riñón picados en una solución tampón adecuada. Filtre la suspensión de tejido a través de un filtro de malla de gran tamaño y recoja el flujo en un plato nuevo. Repita este paso unas cuantas veces más mientras disminuye progresivamente el tamaño de la malla cada vez, hasta que los glomérulos se disocien de los fragmentos renales.

Finalmente, lave el filtro con el medio de cultivo deseado para recoger los glomérulos atrapados más pequeños mientras los fragmentos de riñón permanecen en el filtrado. Transfiera los glomérulos a una placa de fijación ultrabaja. Visualice la placa con un microscopio de luz invertida.

Con la ayuda de una micropipeta, capture un solo glomérulo y transfiéralo a un pozo nuevo. Complemente el pocillo con medios de cultivo y use el glomérulo aislado para un análisis más detallado.

Después de liberar los riñones como se describe en el manuscrito del texto, sostenga el riñón con las pinzas quirúrgicas y use otro par de pinzas para extraer las cápsulas renales. Después de esto, coloque los riñones en los pocillos de una placa de cultivo de 6 pocillos que contienen cada uno 2 mililitros de HBSS y coloque la placa de cultivo en hielo.

A continuación, transfiera los riñones a una placa de Petri de 100 milímetros y use dos bisturíes para picarlos en trozos pequeños de aproximadamente 1 a 2 milímetros. Mantenga los trozos de riñón picados húmedos con HBSS.

Luego, coloque las piezas de riñón encima de un tamiz de metal de 300 micrómetros y presione el riñón a través del tamiz con el émbolo de una jeringa de 20 mililitros. Enjuague repetidamente el tamiz con HBSS en el medio y use una pipeta serológica para recoger el flujo y transferirlo a una placa de Petri limpia.

Use un bisturí para raspar todo lo que queda en el fondo del tamiz y transfiéralo al homogeneizado de riñón recolectado. Enjuague el homogeneizado renal a través de un tamiz de 75 y 53 micrómetros con HBSS. Luego, lave ambos tamices con HBSS para eliminar todas las estructuras más pequeñas.

Recoja las estructuras renales y el material que quedan en los tamices lavando la superficie superior de cada uno con DMEM suplementado con un 20% de suero fetal de ternera y transfiera el material a los pocillos de una microplaca de fijación ultrabaja de 6 pocillos.

Lleve la microplaca de fijación ultrabaja a un microscopio de luz invertida y utilice una pipeta de 20 microlitros para recoger glomérulos encapsulados y/o desencapsulados individuales.

• Glomeruli - Capillary networks within a kidney that help filter blood.
• Scalpels - A surgical knife used to make accurate and clean incisions.
• Renal Capsule - The membrane protecting and enclosing the kidney.
• HBSS - (Hank's Balanced Salt Solution) a buffer used in biological research.
• DMEM - (Dulbecco's Modified Eagle Medium) a nutritional medium for cell cultures.

• Introduce Glomeruli - They are capillary networks in kidneys (e.g., glomeruli).
• Key Concepts - Summarize function of scalpels in dissection (e.g., precision).
• Underlying Mechanisms - Detail the filtration process by glomeruli.
• Connect to Experiment - Brief rationale linking glomeruli to kidney treatment.

• [Question 1] What are glomeruli and their function in the kidney?
• [Question 2] What is the use of scalpels in renal treatment?
• [Question 3] How do glomeruli contribute to kidney health?

• Practical Applications - Use of scalpel for precision in surgery (e.g., medical surgery).
• Industry Impact - Healthcare, especially renal treatments (e.g., kidney disorders).
• Societal Importance - Improved public health via better kidney treatments (e.g., dialysis).
• Link to Scientific Advancements - Progress in renal therapies involving glomeruli.