Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 4:48 min. • July 8th, 2025
Comience con un ratón anestesiado con un tumor cerebral, asegurado en un aparato estereotáxico, que lleva una cánula guía.
Desinfecte y luego diseccione el cuero cabelludo. Extirpar el tejido subcutáneo para exponer el cráneo.
Rasca la superficie del cráneo para que quede desigual. Ancle los tornillos para sostener la cánula.
Perforar un agujero en el cráneo en un lugar preciso para llegar al tumor.
Descienda la cánula guía a través del orificio para insertarla en el tumor.
Aplica una resina acrílica. La superficie irregular del cráneo proporciona un agarre para que el adhesivo asegure la cánula guía.
Deje que el mouse se recupere.
Vuelva a anestesiar y asegure el mouse.
Tome una cánula de tratamiento conectada a una jeringa que contenga un agente terapéutico.
Coloque la cánula de tratamiento sobre la cánula guía.
Inyecte el agente terapéutico y permita que fluya hacia el tumor.
Para comenzar, coloque el ratón anestesiado con la cabeza afeitada sobre la mesa de operaciones y abra suavemente la parte inferior del brazo estereotáctico con una espátula. Inserte la cánula con fórceps y asegúrela apretando el tornillo del brazo hasta que 1/2 a 2/3 de la porción de plástico blanco y 5 milímetros de la cánula sobresalgan de la parte inferior de la abertura.
Inserte y asegure los dientes superiores del ratón en la barra de mordida del aparato estereotáxico. Tire del cono de la nariz hacia adelante y apriételo, asegurándose de que el ratón inhale isoflurano. Luego monte el mouse en el aparato calentado a estereotáxico usando ear cuffs o barras para los oídos, evitando una presión excesiva.
Desinfecte el sitio quirúrgico y haga un corte paralelo al cráneo, como se describe en el manuscrito. Use hisopos con punta de algodón para alejar la fascia. Identificar los puntos de referencia bregma y lambda en el cráneo correspondientes a las marcas anteriores y posteriores donde se unen las placas craneales.
Para crear una superficie para unir el acrílico, haga suavemente varias hendiduras en el cráneo con un bisturí. Usando el brazo estereotáctico, localice la cánula en el punto de referencia de interés. Levante la punta de la cánula de 1 a 2 milímetros por encima de la superficie del cráneo y muévase a las coordenadas deseadas. Con una aguja de calibre 18 o un taladro quirúrgico, haga dos orificios para tornillos en el cráneo expuesto lejos de donde entra la cánula, asegurando suficiente espacio para la cánula.
Gire un taladro a través del orificio del tornillo hasta que se adhiera al cráneo. Con un destornillador de punta plana, inserte y apriete dos tornillos en los orificios. Luego, tire suavemente del tornillo hacia arriba para asegurarse de que esté asegurado.
Para insertar una cánula, cree un orificio en el cráneo en las coordenadas identificadas con una aguja de calibre 18 o un taladro quirúrgico. Usando el brazo estereotáctico, baje la cánula a la coordenada DV deseada. Agregue aproximadamente 0,3 gramos de polvo de resina acrílica y de 10 a 15 gotas de líquido en una placa de porcelana de 12 pocillos.
Cargue el material viscoso de color blanco preparado en una jeringa de 1 mililitro. Cubra el cráneo y rellene los espacios alrededor de la cánula y el tornillo. Afloje el tornillo del brazo estereotáctico mientras el cemento es flexible. Use suavemente una espátula para liberar la cánula del soporte en la abertura inferior y retraiga el brazo estereotáctico lejos del mouse.
Una vez que el cemento esté seco, inserte la cánula ficticia en la cánula guía y gírela en el sentido de las agujas del reloj para asegurarla firmemente. Una vez que se complete el procedimiento, regrese el ratón a su jaula de casa calentada para su recuperación.
Para preparar la cánula de tratamiento, inserte su parte superior en el tubo PKG. Luego, llene la jeringa de tratamiento con suspensión de células T con CAR e insértela a través del otro extremo del tubo PKG que cubre la parte superior de la cánula de tratamiento. Después de anestesiar al ratón, fije la cánula guía en la base con fórceps. Desenrosque y retire la cánula ficticia, permitiendo el acceso a la cánula guía.
Infunda las células T con CAR durante un minuto y mantenga la cánula de tratamiento en su lugar durante un minuto más. Después de retirar la cánula de tratamiento, atornille firmemente una cánula ficticia. Luego, administre Meloxicam por vía subcutánea para controlar el dolor.