Co-cultivo de un explante de ganglios de raíz dorsal con células de Schwann para la mielinización de neuronas

Comience con una placa de pocillos múltiples que contenga un cubreobjetos recubierto con poli-D-lisina y un medio de crecimiento neuronal.

Coloque el ganglio de la raíz dorsal embrionario del ratón, o DRG, rico en neuronas sensoriales, en este pozo e incube.

Las neuronas DRG utilizan los nutrientes y factores de crecimiento que facilitan su crecimiento, seguido de la extensión de las proyecciones neuronales, formando axones.

Estos axones crecen a partir de tejido DRG, estableciendo el cultivo de explantes DRG.

Reemplace el medio con un medio de cocultivo suplementado con ácido ascórbico con células de Schwann, una célula glial especializada.

Con el tiempo, los axones secretan moléculas de señalización que desencadenan la migración de células de Schwann hacia los axones.

Mientras tanto, el ácido ascórbico estimula varias vías de señalización en las células de Schwann.

Estas células activadas comienzan a extender sus membranas plasmáticas ricas en lípidos alrededor de los axones, envolviéndolos en múltiples capas para formar la vaina de mielina.

Esta mielinización da como resultado una cubierta aislante alrededor de los axones, que es esencial para una comunicación neuronal eficiente.

Tome una placa de cuatro pocillos que contenga 190 microlitros de medio de crecimiento DRG en cada pocillo y transfiera con cuidado un solo DRG al centro de cada pocillo con pinzas finas y una espátula. Luego, coloque los cultivos de explante DRG en la incubadora a 37 grados Celsius y 5% de dióxido de carbono. Al día siguiente, agregue cuidadosamente 50 microlitros del medio de crecimiento DRG a cada pocillo y observe la adherencia del explante DRG y el crecimiento de los axones con un microscopio diariamente. Para el cocultivo en el tercer día del cultivo de explante DRG, se reemplazó cuidadosamente el medio de crecimiento DRG con 250 microlitros del medio de cocultivo que contenía 30.000 células de Schwann por pocillo.