Establecimiento de un cultivo de células gliales de Müller obtenido de retinas de ratón

Tomemos retinas de ratón que contienen células Müller glial, o MG, y neuronas.

Colóquelos en una solución de disociación con enzimas digestivas e incube con un balanceo suave para garantizar una distribución uniforme de las enzimas.

Estas enzimas descomponen la matriz extracelular, desprendiendo células individuales.

Pipetea las retinas hacia arriba y hacia abajo varias veces para liberar las células.

Agregue un inhibidor para detener la actividad enzimática, luego centrifuge.

Deseche el sobrenadante.

Vuelva a suspender las células en un medio que contenga un factor de crecimiento específico para las células MG.

Transfiera las células a un pozo e incube.

Con el tiempo, el factor de crecimiento en el medio facilita el crecimiento y la multiplicación de las células MG mientras que las células neuronales que no se dividen perecen.

Retire el medio. Lavar con un tampón de sal.

Incubar con una enzima digestiva para separar las células del pozo.

Recoge las células en un tubo y luego centrifuga.

Deseche el sobrenadante que contiene las células neuronales muertas.

Vuelva a suspender las células MG en el medio para su posterior análisis.

Prepare la mezcla de disociación de papaína ADNasa I c