Inducción de una lesión cerebral traumática penetrante en moscas Drosophila adultas

Tomemos como ejemplo las moscas Drosophila adultas modificadas genéticamente recién emergidas.

Los cuerpos de hongos en el cerebro de la mosca contienen neuronas que expresan proteínas fluorescentes verdes.

Los cuerpos de hongo son estructuras que contienen redes neuronales complejas esenciales para el aprendizaje y la memoria.

Anestesiar las moscas en una almohadilla de dióxido de carbono.

Bajo un microscopio estereoscópico equipado con los filtros necesarios, visualice los cuerpos de los hongos que expresan fluorescencia verde.

Tome un alfiler Minutien desinfectado y empújelo a través de la cápsula de la cabeza hacia el cuerpo del hongo.

Esto causa daño a las neuronas del cuerpo de los hongos e interrumpe las redes neuronales, infligiendo una lesión cerebral traumática penetrante.

A continuación, retire suavemente el pasador de la bragueta.

Coloque las moscas heridas en un frasco con comida y permita que se recuperen para realizar más estudios.

Después de anestesiar las moscas en una almohadilla de dióxido de carbono, clasifique las moscas macho jóvenes F1 recién cerradas dentro de las seis horas posteriores a la eclosión y colóquelas en viales limpios que contengan alimentos con 40 o menos moscas por vial. A continuación, desinfecte los alfileres minuciosos colocando aproximadamente 100 alfileres en un tubo de microcentrífuga de 1,5 mililitros lleno de etanol al 70% durante cinco minutos. Luego, desinfecte la almohadilla de dióxido de carbono en el pincel rociando etanol al 70% y séquela con un pañuelo limpio y sin pelusa.

Una vez que las herramientas estén limpias y secas, transfiera 40 machos F1 clasificados o menos a la almohadilla limpia y sepárelos en dos grupos. Un grupo servirá como control de moscas ilesas y el segundo grupo experimental será sometido a una lesión cerebral traumática penetrante. Luego, con fórceps, saque de cuatro a cinco clavos minuciosos nuevos del tubo de microcentrífuga y colóquelos cerca del borde de la almohadilla de dióxido de carbono. Luego, debajo del alcance de disección, elija un alfiler minucioso recto con una punta afilada. Reutilice los alfileres afilados y coloque los alfileres dañados o romos en un tubo separado que contenga etanol al 70% para su eliminación segura.

A continuación, para moscas con el genotipo cruzado estándar, encienda la lámpara LED del microscopio estereoscópico equipada con los filtros de excitación y emisión apropiados para la proteína fluorescente verde, que permite la excitación a 440 a 460 nanómetros y permite la visualización a 500 a 560 nanómetros. Luego, elija una mosca del grupo experimental y colóquela de manera que el experimentador tenga una vista dorsal de la cápsula de la cabeza con la cabeza de la mosca hacia la derecha. Con unas pinzas, levanta y sujeta el alfiler minucioso seleccionado en una mano y el pincel en la otra. Luego, coloque el cepillo en el interior del tórax dorsal y empuje suavemente hacia abajo para estabilizar la mosca.

Apunte la punta del alfiler minucioso a los cuerpos de los hongos, cuerpos celulares en el lado derecho de la cabeza y penetre en la cápsula de la cabeza. Si usa puntos de referencia, apunte a la cutícula de la cabeza dorsal entre los ocelos y el borde dorsal del ojo. Después de completar la lesión, use el pincel para empujar la cabeza suavemente fuera del pasador minucioso. Si usa el cerebro para la secuenciación de ARN o qRT-PCR, haga una segunda lesión en el lado izquierdo de la cabeza. Una vez que todas las moscas experimentales hayan sido heridas, coloque las moscas de control y las moscas heridas en viales etiquetados separados que contengan alimentos.