Tinción de inmunofluorescencia de cerebros de Drosophila para la obtención de imágenes unicelulares de células gliales

Comience con los cerebros de moscas Drosophila transgénicas, que contienen diferentes tipos de células gliales que albergan un sistema de recombinasa específico de células.

Impulsa la expresión de una proteína de la superficie celular fusionada con diferentes epítopos antigénicos en el mismo tipo de células.

Tratar el tejido con un fijador para reticular proteínas y preservar la arquitectura del tejido.

Lavar para eliminar el exceso de fijador.

Agregue proteínas de bloqueo para enmascarar sitios de unión no específicos para reducir la tinción de fondo.

Incubar el tejido con un cóctel de anticuerpos primarios que se une a los diferentes epítopos expresados en las células gliales.

Lavar para eliminar los anticuerpos primarios no unidos.

Incubar con anticuerpos secundarios conjugados con fluoróforos que se unen a los anticuerpos primarios.

Lavar para eliminar los anticuerpos secundarios no unidos.

Monte el cerebro dentro de un espaciador de imágenes y coloque un cubreobjetos. El espaciador crea una cámara para el tejido, preservando su estructura tridimensional.

Diferentes células del mismo tipo glial marcadas con diferentes anticuerpos conjugados con fluoróforos permiten comprender l